Abstract
An In vitro protein sulfation in the soluble fraction of rat brain was charaderized further by an improved method of alkaline hydrolysis and thin layer ceflulose electrophoresis TLE) The protein sulfation was carried out in a reaction system containing [35 S] 3'-phosphoadenosine-5'-phosphosulfate (PAPS), Tris-maleate buffer (pH 8), MgCI$_2$, and soluble proteins from rat brain. The sulfated proteins were precipitated by acetone and alkaline hydrolysis was performed to obtain sulfated amino acids. The hydrolysate was separated further by TLE and the separated residues were identified by fluorography. The Iluorography of one-dimensional The showed at least nine sulfated residues including tryosine-O-sulfate. The other spots were not identified yet positively. General properties of protein sulfotransferases (PST) using this method were re-examined such as effects of concentrations of PAPS, pH, incubation temperature and $Mg^2$+. These results suggest a possible occurrence of several PST corresponding to each sulfated residue in rat brain and that the sulfation can occur not only in tyrosine but also in other residues as well.
개선된 방법인 알칼리 가수분해와 얇은 층 cellulose전기 영동 (TLE)으로 in vitro 조건에서 쥐 뇌의 용해부분에서의 단백질 황산화의 특성을 추가로 조사하였다. 단백질 황산화는 방사능을 띤 [35 S] 3'-phosphoadenosine-5'-phosphosulfate (PAPS),Tris-maleate buffer (pH 8), MgCI$_2$, 그리고 쥐 뇌의 용해 단백질이 포함된 반응체 내에서 실행되었다. 황산화된 단백질들은 acetone에 의해 침전된 후 황산화된 아미노산을 얻기위해 알칼리 가수분해를 하였다. 더나아가 그 가수분해물을 TLE로 분리하고 황산화된 잔기들을 fluorography를 통해 확인하였다. 일차원 TLE의 fluorography에서는 tryosine-O-sulfate를 포함한 적어도 9개의 황산된 잔기들이 나타났다. tryosine-O-sulfate를 제외한 다른 잔기들은 아직 분명하게 밝혀지지 않고 있다. 이런 방법으로 단백질 황산기전달효소(PST)의 일반적 성질들 즉, PAPS농도, pH,반응온도,그리고 $Mg^2$+등의 효과를 재조사하였다. 이런 결고들은 쥐 뇌에서 각황산화된 잔기들에 해당하는 여러개의 PST의 존재가 가능하며 단백질 황산화가 tryosine뿐만 아니라 다른 잔기들에서도 일어날 수 있음을 암시한다.