도열병균의 원형질체 나출 및 세포벽 재생

Purification and Cell Wall Regeneration of Protoplasts from Pyricularia oryzae Cav.

수도 도열병균(Pyricularia oryzae)의 균사체로부터 다량의 원형질체의 분리 및 세포벽 재생을 하기 위하여 필요한 몇가지 조건을 선발하였다. 나출을 위하여 기본용액으로 0.02M potassium phosphate buffer와 pH 5.2, 0.6M KCl로 삼투압을 조절하였고 분해효소는 ml당 각각 20mg Cellulase R-10, 5mg Macerozyme $-10, 10mg Driselase를 사용하였는데 각각의 단독처리구보다 3가지 효소의 복합처리구에서 원형질체 나출 정도가 우수하였다. 또한 선발된 복합효소액에 2일간 액체배양된 어린 균사체를 3시간, $30^{\circ}C$ 항온기에서 진탕했을 때 가장 많은 원형질체가 분리되었다. 원형질체로부터 세포벽의 재생은 순수 정제한 원형질체를 0.2M potassium phosphate와 0.6M KCl을 삼투압을 조절한 감자한철배지에 접종시켜 가장 높은 재생율을 얻을 수 있었다.

The optimum conditions for protoplast formation and regeneration from Pyricularia oryzae Cav. were selected as follows. As a basic solution, 0.02M potassium phosphate buffer solution plus 0.6M KCl adjusted to pH 5.2 with 1N HCl was used. A mixture of enzyme combinations with 20mg Cellulase R-l0/ml, 5mg Macerozyme R-l0/ml and l0mg Driselase/ml used as a lytic enzyme showed better lytie effect than any single enzyme treatment for protoplast formation. Two-day-old mycelia of P. oryzae grown in the mixture of three lytie enzyme solution at $30^{\circ}C$ for 3 hr showed best condition for protoplasts formation. For regeneration from the protoplasts of P. oryzae, potato dextrose agar containing 0.02M potassium phosphate plus 0.6M KCl used as a stabilizer was best for regeneration medium.