노랑느타리버섯의 원형질체(原形質體) 재생(再生) 및 환원(還元)에 관한 연구(硏究)

Protoplast Regeneration and Reversion in Pleurotus cornucopiae

원형질체(原形質體)를 이용한 버섯의 육종연구(育種硏究)를 하는데 있어서 원형질체(原形質體) 재생(再生) 및 환원(還元)은 필수적인 과정이라고 할 수 있다. 식용(食用)버섯의 일종(一種)인 P. cornucopiae 노랑 느타리버섯의 원형질체(原形質體) 재생(再生)에 적합한 제조건(諸條件)에 대해서 조사한 바를 요약하면 다음과 같다. 원형질체(原形質體) 재생(再生)에 적합한 삼투압 조절제(調節劑)와 농도(濃度)는 0.6M sucrose로 MCM에서 5.21%의 높은 재생률(再生率)을 보였고, agar를 포함하지 않은 0.6M sucrose 삼투압 조절제(調節劑)나 0.6M液 sucrose+MMM 체배지(體培地)만을 overlaying한 경우에 재생률(再生率)이 높았다. 노랑 느타리버섯의 균사(菌絲) 생장(生長)을 촉진시킨 아미노산, 핵산 구성 성분의 종류(種類)와 원형질체(原形質體) 재생률(再生率)을 증가시킨 종류(種類)는 유사하며 큰 차이가 없었으나 비타민에서는 다소 다른 경향을 나타냈다. 재생률(再生率)을 증가시킨 영양원(營養源)들을 혼합했을 때 무첨가 배지 MMM에 비해 아미노산 혼합, 핵산 구성 성분 혼합에서는 재생률(再生率)이 증가했으며 비타민 혼합에서는 오히려 감소하였고 아미노산, 핵산 구성 성분, 비타민 모두가 첨가된 데서 가장 높은 재생률(再生率)을 나타냈다. 고체(固體) 배지(培地)에서 원형질체(原形質體)가 $1{\sim}2$일 배양(培養)되었을 때 광학 현미경하에서 재생(再生) 형태(形態)를 첫째, one or two directgerm tube, 둘째, bud like structure, 세째, yeast-likecell chain, 네째는 한 원형질체(原形質體)에서 direct germ tube와 yeast-like cell chain을 형성하는 형태를 관찰할 수 있었으며 $3{\sim}4$일 배양(培養)때는 균사(菌絲)가 branch를 형성하며 성장하였고 결국 완전한 균사체(菌絲體)로 되어 노랑 느타리 자실체(子實體)를 형성하였다.

Protoplasts of P. cornucopiae were reverted to normal hyphal growth and reversion frequency was $0.04{\sim}19%$. The complete medium stabilized with 0.6 M sucrose was most effective for regeneration of protoplasts. When hypertonic mushroom complete medium not containing agar was overlaid, regeneration frequency of protoplasts was the highest rate among the others of topagar. The protoplast reversion frequency and mycelial growth of P. cornucopiae were increased when various amino acids, nucleic acid components and vitamin compound were added to the hypertonic minimal medium. The relation between sources increasing reversion frequency and sources accelerating mycelial growth was similar in amino acids and nucleic acid components but it was different in vitamins. The protoplast reversion frequency showed the highest rate when all sources were added to the regeneration minimal medium. Microscopically, regeneration patterns of protoplasts showed formation of a bud-like structure, direct germination, yeast-like cell chain of the protoplast, and the production of both direct germ tube and yeast-like cell chain from a protoplast.