고전압 PEF는 P. rhodozyma 세포막에 손상을 주어 투과성을 80% 이상 증진시키지만, carotenoid 색소가 P. rhodozyma 세포막의 지방체와 결합한 생태로 존재하기 때문에 고전압 PEF 처리에 의한 세포막 투과성 증진의 효과만으로는 색소 추출 효과가 거의 없다는 김$^({12})$ 등의 보고에 이어서, 본 실험에서는 투과성을 증진시키는 물리적, 화학적 또는 생물학적 방법을 전처리하고 고전압 PEF 처리를 하는 병합 처리가 색소 추출에 미치는 영향에 대하여 조사하였다. 유기 용매 처리 또는 냉동-해동의 반복 처리 후에 50 kV/cm, 300 Hz에서 $1000\;{\mu}s$ 동안 PEF처리하는 병합 처리의 경우에는 색소 추출에 synergy 효과가 없었다. 효모 세포벽 용균 효소 처리나 ultra turrexer를 이용하는 기계적 처리를 한 후에 PEF 처리를 하는 병합 처리의 경우에는 색소 추출이 PEF단독 처리보다 각각 13.7배 또는 3.3배 증가하였다. 위의 2가지 경우에는 PEF와 전처리에 따른 색소 추출량의 산술적 합계보다도 병합처리 하는 경우의 색소 추출량이 각각 52% 및 69.8% 증가하였다. 따라서 병합처리가 synergy 효과가 있다는 것을 알 수 있었지만 연속 공정으로 적합하지 못하였다. 한편 세포 투과성을 증진시키는 11가지의 permeabilizing agents를 $0.01{\sim}0.5%(v/v)$의 농도로 0.01% $CaCl_2$ 세포 현탁액에 첨가하여 상온에서 2시간 교반 후에 고전압 PEF 처리하는 병합 처리를 한 결과, 계면활성제인 Tween 20과 탄소수 10개의 포화지방산인 capric acid는 각각 0.01% 및 0.1% 첨가했을 때 색소 추출량이 60.7 및 $75.2\;{\mu}g$으로서 가장 효과적이었다. 이러한 병합 처리는 연속 공정으로서의 가능성도 충분하다. 뿐만 아니라 capric acid를 첨가하고 난 후에 PEF 처리하는 병합 처리 효과를 직접 확인 하고자 무처리, PEF 단독처리 및 병합처리 후의 세포 내 외부의 변화를 SEM과 TEM으로 관찰하였다. SEM으로 관찰한 결과 PEF 처리에 의해서 세포 표면이 거칠어지고 쭈글쭈글한 모양을 띠어 무처리 세포와는 다른 형태로 나타내었으며, 병합처리의 경우에는 정도가 심하였다. TEM으로 관찰한 결과 병합 처리에 의하여 세포벽은 유지되었으나 세포막은 그 구성물질이 많이 빠져나가 손상된 모습을 나타내었다. 이와 같은 결과들은 P. rhodozyma로부터 연속적으로 색소 추출 가능성을 제시하고 있다.
This study evaluated the effects of live yeast and yeast cell-wall mannan-oligosaccharide supplementation onperformance and nutrient digestibility during early lactation in cows fed a diet based on a mixture of corn silage and alfalfa hay as forage sources. Eight multiparous Holstein dairy cows (average days in milk, 27${\pm}$6) were used in a replicated 4${\times}$4 Latin square design. Diets contained 45% forage and 55% concentrate on a dry matter (DM) basis and treatments were: i) basal diet without additive (Control), ii) basal diet with 32 g/d of mannan-oligosaccharides (MOS), iii) basal diet with $1.2{\times}10^{10}$ colony forming units per day (cfu/d) of live yeast (Saccharomyces cerevisiae CNCM 1-1077; SC), and iv) basal diet with a mixture of MOS (32 g/d) and SC ($1.2{\times}10^{10}$ cfu/d; MOS+SC). Treatments had no effect (p>0.05) on DM intake and yields of milk, 3.5% fat-(FCM) and energy-corrected milk (ECM), and on milk fat percentage, body condition score and blood metabolites. Compared with the Control, only supplementation of SC resulted in numerically higher yields of FCM (41.9 vs. 40.1 kg/d) and ECM (41.8 vs. 40.3 kg/d), and milk fat percentage (3.64 vs. 3.43%). While the MOS diet had no effects on performance compared to the Control, the combination treatment MOS+SC increased milk protein percentage (p<0.05). Also, the MOS supplementation, both alone or in combination with SC, numerically increased milk fat percentage. The SC supplementation increased apparent digestibility of DM and crude protein while the MOS supplementation did not affect digestibility. Concentrations of total volatile fatty acids (VFA) and ruminal pH were similar across treatments. Overall results indicated that supplementation of MOS produced variable and inconsistent effects on rumen metabolism and performance, whereas SC supplementation improved nutrient digestibility and numerically increased FCM and ECM yields, which could not be enhanced by the combined supplementation of MOS+SC. According to our experimental condition, there was no effect of MOS alone or in combination with SC on dairy cow performance.
비허용온도인 $37^{\circ}C$에서 삼투감수성을 보이며 베타-1,3-글루칸 합성능이 현저히 손상된 Saccharomyces cerevisiae mutant(LP353)를 YCp50으로 제조한 yeast genomic library로 형질전환시킨 후, 콜로니 자기방사법으로 형질전환체의 선별을 시도한 결과, LP353의 베타-1,3-글루칸 합성능을 부분적으로 회복시켜 주는 약 8.5-kb 크기의 DNA 절편을 클로닝하는데 성공하였다. 클로닝된 8.5-kb의 DNA 절편은 copy 수에 무관하게 LP353의 또 다른 표현형질인 온도의존적 삼투감수성은 회복시켜 주지 못하였으나, 세포벽의 베타-1,3-글루칸 함량과 베타-1,3-글루칸 분해효소인 ${\beta}-glucanase$에 대한 내성은 copy수에 무관하게 증가시켜 주었다. 한편, 8.5-kb의 DNA 절편은 $37^{\circ}C$의 삼투안정제가 첨가된 액체배지에서 잘 자라지 못하는 LP353의 돌연변이 형질을 회복시켜 야생형의 수준에 근접하는 생장양상을 보여 주었다. 이상의 결과로 클로닝된 8.5-kb 크기의 DNA 절편은 S. cerevisiae의 베타-1,3-글루칸 생합성에 관여하는 유전자의 하나인 BGS2를 포함하고 있는 것으로 보여지며, subcloning을 통한 기능부위 분석 결과, 4.8-kb 크기의 BglII-KpnI DNA 절편에 BGS2가 존재하는 것으로 추정되었다.
본 연구에서는 항산화와 항균 활성 등이 우수한 녹차 잎을 대상으로 관련 물질 회수에 적합한 추출 용매의 농도 설정과 세포벽 분해 효소 처리 및 효모 발효가 활성을 높이는데 도움을 줄 수 있는지 살펴보았다. 입도 약 4-10 ㎛의 녹차 분말을 사용하여 추출물을 제조할 때, 다양한 에탄올 농도 가운데 50% 에탄올을 추출 용매로 하고 가열 처리 (121℃, 15 min)를 진행할 경우 높은 수율과 DPPH 라디칼 소거능 및 항균 활성을 나타내었다. 이 추출물은 B. cereus, B. licheniformis, S. aureus subsp. aureus 및 A. hydrophila subsp. hydrophila 에서 항균 활성을 나타내었다. 녹차 잎 분말에 효소 처리 및 효모 발효 진행 시 최종 녹차 잎 추출물의 항산화와 항균 활성에 미치는 영향을 조사하기 위해, 효소 처리에는 cellulase와 pectinase를 혼합(2.5% + 2.5%)하여 사용하였고, 효모 발효에는 S. cerevisiae 가 사용되었다. 녹차 잎을 효소 처리할 경우 추출물의 수율은 증가되었으나, 50% 에탄올 추출물(대조구)에 비해 항산화와 항균 활성은 유의적으로 감소되었다(p<0.05). 그에 반해 효모 발효를 단독으로 진행할 경우 최종 추출물의 수율 증가는 없었지만, 총페놀화합물과 플라보노이드 함량을 높여 항산화와 항균 활성을 높이는데 긍정적으로 작용하였다.
Candida albicans infections are often problematic to treat owing to antifungal resistance, as such infections are mostly associated with biofilms. The ability of C. albicans to switch from a budding yeast to filamentous hyphae and to adhere to host cells or various surfaces supports biofilm formation. Previously, the ethanol extract from Paeonia lactiflora was reported to inhibit cell wall synthesis and cause depolarization and permeabilization of the cell membrane in C. albicans. In this study, the P. lactiflora extract was found to significantly reduce the initial stage of C. albicans biofilms from 12 clinical isolates by 38.4%. Thus, to assess the action mechanism, the effect of the P. lactiflora extract on the adhesion of C. albicans cells to polystyrene and germ tube formation was investigated using a microscopic analysis. The density of the adherent cells was diminished following incubation with the P. lactiflora extract in an acidic medium. Additionally, the P. lactiflora-treated C. albicans cells were mostly composed of less virulent pseudohyphae, and ruptured debris was found in the serum-containing medium. A quantitative real-time PCR analysis indicated that P. lactiflora downregulated the expression of C. albicans hypha-specific genes: ALS3 by 65% (p = 0.004), ECE1 by 34.9% (p = 0.001), HWP1 by 29.2% (p = 0.002), and SAP1 by 37.5% (p = 0.001), matching the microscopic analysis of the P. lactiflora action on biofilm formation. Therefore, the current findings demonstrate that the P. lactiflora ethanol extract is effective in inhibiting C. albicans biofilms in vitro, suggesting its therapeutic potential for the treatment of biofilm-associated infections.
Magnaporthee grisea causes the devastating blast disease of rice. Entensive research has been conducted on infection mechanisms, particularly on appressorium formation and penetration, of this fungus during the last decade. However, the role(s) of cell-wall-degrading enzymes (CWDEs) on pathogenesis is not clearly demonstrated at molecular level. Many CWDES in plant pathogenic fungi including M. grisea are redundant; that is, there are multiple genes encoding enzymes with a similar or overlapping spectrum of activities. It is laborious to isolate all of the genes encoding related enzymes and to construct mutants lacking all 9f them. Thus, we considered alternative strategies to address the role of CWDEs in pathogenesis. Since expression of CWDE genes Is repressed by a simple sugar, as the first step, we cloned a Snfl (sucrose non-fermenting) gene (MgSnf1) from M. grisea. The predicted amino acid sequence showed a high identity with other Snf1 genes from various fungi. To elucidate molecular function of MgSnf1, a transformant lacking MgSnf1 was created by targeted gene replacement. En glucose, sucrose, and xylan the MgSnf1 mutant grew normally but in pectin and complex media, it grew slower than wild type. Expression of various CWDEs in MgSnf1 mutant was investigated and found that expression of some CWDEs is repressed. However, no significant difference was observed in conidial germination, appressorium formation, and pathogenicity in MgSnf1 mutant. However, MgSnf1 functionally complemented a yeast MgSnf1 mutant. These results suggest that MgSnf1 is involved in regulation of CWDEs and MgSnf1 is dispensable in pathogenicity of M. grisea.
알칼리성 cellulase를 분비하는 세균을 토양으로 부터 분리하고 그 중 알칼리 환경하에서 생육이 양호하며 CMCase 생성능이 우수한 균주 AC-711를 선발하였다. AC-711 균주의 형태적, 배양적 및 생리학적 특성을 조사한 결과 호알칼리성 Pseudomonas속의 균주로 동정되었으나 염색체 DNA의 G+C함량이 54.43 mol%로서 Pseudomonas속보다 다소 낮은 값이었으며, 세포벽 지방산의 주성분은 15:0 anteiso 및 17:0 anteiso이었다. AC-711 균주의 생육은 $25{\sim}37^{\circ}C$, pH 9.5~10.5에서 좋았으며 효소생산을 위한 최적 조건은 $30^{\circ}C$, pH 10.3 이었다. 또한 효소생산을 위한 배지조성은 $KH_2PO_4$ 0.1%, $CoCl_2$ 0.02%, Tween 80 0.02%, $Na_2CO_3$ 0.5%에 탄소원으로서 CMC 1%, 질소원으로서 yeast extract 0.8%를 사용하였을 때가 가장 좋았다. CMCase의 생산은 3일 배양후 가장 높았으며, 생성된 효소는 filter paer와 avicel과 같은 결정성 섬유소보다는 수용성 섬유소인 CMC에 대한 분해 활성이 현저히 높아서 세제 첨가제로서의 이용 가능성이 주목되었다.
Streptococcus mutans is the most important causative bacteria of dental caries among the oral bacteria. Lactococcus lactis 1370 was isolated from the oral cavity of child. The effect of Lactococcus lactis 1370 on the formation of artificial plaque by Streptococcus mutans was studied. 1. The insoluble substances and bacteria were much more attached on the wall of disposable cuvette in the culture of Streptococcus mutans than in the combined culture of Streptococcus mutans and Lactococcus lactis 1370. 2. The mean weight of produced artificial plaque on the wires in the beaker was 131.7 mg in the culture of Streptococcus mutans only, whereas being reduced to 6.4 mg in the combined culture of Streptococcus mutans and Lactococcus lactis 1370 (p<0.05). The viable cell didn't show the significant difference between them after culturing. 3. When Streptococcus mutans was cultured in the media containing culture supernatant of Lactococcus lactis 1370 cultured in M17 broth containing 0.5% yeast extract and 5% sucrose, the mean weight of produced artificial plaque was 8.0 mg on the wires, whereas being 125.4 mg in the media without culture supernatant of Lactococcus lactis 1370 (p<0.05). The viable cell didn't show the significant difference between them after culturing. 4. When Streptococcus mutans was cultured in the media containing soluble polymer produced by Lactococcus lactis 1370, the mean weight of produced artificial plaque was significantly reduced compared with being cultured in the media without soluble polymer (p<0.05). The viable cell didn't show the significant difference between them after culturing. 5. The soluble polymer produced by Lactococcus lactis 1370 was glucan. 6. The glucan produced by Lactococcus lactis 1370 was water-soluble glucan containing ${\alpha}$-1,6-glucose linkage as the main linkage. These results suggest that the artificial plaque formed by Streptococcus mutans is inhibited by water-soluble glucan produced by Lactococcus lactis 1370.
Toll-like receptors (TLRs) recognize molecular structures derived from microbes including bacteria, viruses, yeast, and fungi. TLRs have emerged as a major signaling component of the mammalian host defense. TLR4 is a member of the Toll family that senses lipopolysaccharide (LPS), a cell wall component of gram negative bacteria. LPS recognition by TLR4 requires an additional accessory molecule, MD-2. LPS induces the activation of NF-${\kappa}B$ and IRF3 through MyD88 or TRIF-dependent pathways. The activation of NF-${\kappa}B$ leads to the induction of inflammatory gene products including cytokines and cyclooxygenase-2 (COX-2). This study was carried out to investigate the anti-inflammatory effects of oak wood vinegar. Oak wood vinegar inhibits the NF-${\kappa}B$ activation and COX-2 expression induced by LPS. These results provide new ideas to understand the mechanism of oak wood vinegar for its anti-bacterial and anti-inflammatory activities.
은어 자어 배합사료에 효모의 첨가효과를 조사하기 위해 K. fragilis, protoplasted K. fragilis, C. utilis, protoplasted C. utilis 및 맥주효모를 각각 $5{\%}씩$ 첨가한 6종류의 실험사료를 미립자 크럼블 형태로 제조하여 평균체중 l00 mg 전후의 자어를 대상으로 사육 실험하였다. 사료별 3반복으로 7주간 사육 실험한 후의 생존율은 protoplasted K. fragilis, C. utilis 및 protoplasted C. utilis 첨가구가 $93{\~}94{\%}$로 효모 무첨가구인 대조구의 $87{\%}$보다 유의하게 높은 경향이었으며 (P<0.05), K. fragilis 및 맥주효모 첨가구는 대조구와 유의한 차이를 보이지 않았다 (P>0.05). 증체율은 protoplasted K. fragilis 첨가구가 $149{\%}$로 대조구의 $78{\%}$보다 유의하게 높았고 (P<0.05), 그 외 실험구들과는 유의한 차이가 없었다 (P>0.05). 전어체의 단백질과 회분 함량은 모든 실험구간에 유의한 차이는 없었고 (P>0.05), 지질 함량은 K. fragilis와 맥주효모 첨가구들이 대조구보다 낮은 값을 보였다 (P<0.05). 전어체의 아미노산 조성중 Asp는 효모 첨가구들이 대조구보다 유의하게 높은 값을 보였으며 (P<0.05), 그 외 아미노산들은 실험구간에 유의한 차이가 없었다 (P>0.05). 이상의 결과로부터 C. utilis보다는 K. fragilis를 외벽 처리하여 첨가하는 것이 은어 자어의 성장과 어체 지질 성분을 더 개선시킬 수 있을 것으로 전망된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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