• 제목/요약/키워드: whole-cell assay

검색결과 126건 처리시간 0.033초

Vitamin D Sufficiency: How should it be defined and what are its functional indicators?

  • Hollis Bruce W.
    • 한국영양학회:학술대회논문집
    • /
    • 한국영양학회 2004년도 추계학술대회
    • /
    • pp.22-33
    • /
    • 2004
  • It has been more than three decades since the first assay assessing circulating 25(OH)D in human subjects was performed. That publication as well as several that followed it defined 'normal' nutritional vitamin D status in human populations. Recently, the wisdom by which 'normal' circulating 25(OH)D levels in human subjects were assigned in the past has come under question. It appears that sampling human subjects, who appear to be free from disease, and assessing 'normal' circulating 25(OH)D levels by plotting a Gaussian distribution is grossly inaccurate. There are many reasons why this method is inaccurate, including race, lifestyle habits, sunscreen usage, age, latitude, and inappropriately low dietary recommendations for vitamin D. For instance, a 400IU/day. AI for vitamin D is insignificant when one considers that a 10-15 minute whole body exposure to peak summer sun will generate and release up to 20,000 IU vitamin $D_3$ into the circulation. Recent studies, which orally administered up to 10,000 IU/day vitamin $D_3$ to human subjects for several months, have successfully elevated circulating 25(OH)D levels to those observed in individuals from sun-rich environments. Further, we are now able to accurately assess sufficient circulating 25(OH)D levels utilizing specific biomarkers instead of guessing what an adequate level is. These biomarkers include intact parathyroid hormone (PTH), calcium absorption, bone mineral density (BMD), insulin resistance and pancreatic beta cell function. Using the data from these biomarkers, vitamin D deficiency should be defined as circulating levels of $25(OH)D{\leq}30ng/mL$. In certain cases, such as pregnancy and lactation, significantly higher circulating 25(OH)D levels would almost certainly be beneficial to both the mother and recipient fetus/infant.

  • PDF

Characteristics of Urease from Vibrio parahaemolyticus Possessing tah and the Genes Isolated in Korea

  • Kim, Young-Hee;Kim, Jong-Sook
    • Journal of Microbiology
    • /
    • 제39권4호
    • /
    • pp.279-285
    • /
    • 2001
  • Vibrio parahaemolyticus is a halophilic bacterium associated with seafood gastroenteritis. An unusual strain of Kanagawa-positive urease producing Vibrio parahaemolyticus O1:K1 was isolated from the environment and identified . A polymerase chain reaction assay revealed that this strain harbored both the tdh and the genes. The urease from this strain was studied. Maximum urease production was induced in LB medium containing 0.2% urea, 0.5% glucose, 2% NaCl and pH 5.5 with 6h of culti-vation at 37$\^{C}$ under aeration. Purification of urease was achieved by the process of whole cell lysate, 65% ammonium sulphate precipitation, DEAE-cellulose ion exchange column chromatography, Sepharose CL-6B gel filtration and oxirane activated Sepharose 6B-urea affinity chromatography with 203 fold purification and 2.2% yield. Analysis of the purified enzyme by SDS-PAGE demonstrated the presence of the subunits with a molecular weight of 85kDa, 59kDa, 41kDa and the molecular weight for the native enzyme by nondenaturing PAGE and gel filtration chromatography was 255kDa. The purified urease was stable at pH 7.5 and the opeimal pH in HEPES buffer was 8.0 The enzyme was stable at 60$\^{C}$ for 2 h with a residual activity of 32% . The addition of 10$\mu$M if NiCl$_2$maintained stability for 30 min. The Km value of the purified enzyme was 35.6 mM in urea substrate. The TD$\_$50/(median toxic dose) of the purified urease was 2.5$\mu\textrm{g}$/ml on human leukemia cells.

  • PDF

Antioxidant and Neuroprotective Effects of Doenjang Prepared with Rhizopus, Pichia, and Bacillus

  • Kang, Su Jin;Seo, Ji Yeon;Cho, Kye Man;Lee, Chang Kwon;Kim, Jeong Hwan;Kim, Jong-Sang
    • Preventive Nutrition and Food Science
    • /
    • 제21권3호
    • /
    • pp.221-226
    • /
    • 2016
  • A new type of doenjang was manufactured by mixing soaked soybean, koji (Rhizopus oryzae), cheonggukjang (Bacillus amyloliquefaciens MJ1-4 and B. amyloliquefaciens EMD17), and Pichia farinosa SY80 as a yeast, salt, and water, followed by fermentation with koji that was made by fermenting whole wheat with R. oryzae. The mixed culture doenjang was designed to have a more palatable flavor and stronger biological activities than the conventional product. The extract of mixed culture doenjang showed higher antioxidant activity than the commercial doenjang as evaluated by the ferric reducing antioxidant power assay although it was not significantly different from the commercial product in 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl and 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) radical scavenging activities. Further, the mixed culture doenjang reduced intracellular reactive oxygen species levels and protected cells from glutamate-induced cytotoxicity more efficiently in human hippocampal HT22 neuroblastoma cells than the commercial doenjang. In conclusion, a newly-developed mixed culture doenjang had a strong antioxidant activity in vitro and cultured cell model systems, exhibited a potential to prevent oxidative stress-associated disorders although animal and clinical studies are needed to confirm its in vivo efficacy.

Anti-oxidant, Anti-inflammatory, and Anti-obesity Effects of Ethanol Extracts from Ulmus divididiana var. japonica

  • Lee, Sung-Gyu;Kang, Hyun
    • 대한의생명과학회지
    • /
    • 제25권3호
    • /
    • pp.227-236
    • /
    • 2019
  • In this study, the anti-oxidant, anti-inflammatory, and anti-obesity activities of an ethanol extracts of Ulmus divididiana var. japonica (UDE) were investigated in vitro and in vivo. UDE anti-oxidant activity was evaluated with an Electron Spin Resonance (ESR) spectrometer, which measured 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) radical scavenging activity. Cell viabilities were estimated using 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay. LPS-stimulated BV-2 microglia were used to study the production of nitric oxide (NO). Cells stimulated with LPS produce more NO than normal control cells. However, cells treated with the UDE decreased this production in a concentration dependent manner (100, 250, 500, $1,000{\mu}g/mL$). Also, we investigated the anti-obese activity of UDE in SD rats. The SD rats were randomly divided into five groups: 10% low fat diet (N), 45% high fat diet (H), 45% high fat diet + garcinia extracts 200 mg/kg/day (HG200), high fat diet + UDE 200 mg/kg/day (HU200), high fat diet + UDE 400 mg/kg/day (HU400). UDE was found to lower whole body and abdominal and epididymal adipose tissue weights and lowered plasma levels of triglyceride (TG), compared to those in H group. Histological analyses of the liver and fat tissues of rat treated with UDE revealed significantly decreased number of lipid droplets and decreased size of adipocytes compared to the H group. These results suggest that UDE might be used to develop potent anti-oxidant, anti-inflammatory, and anti-obesity agents, and may be useful as ingredients for related new functional raw materials.

약용곤충 무당벌레류 추출물의 항산화활성과 Cyclooxygenase-2 Promoter 억제활성 비교 (Comparison of In Vitro Antioxidant Activity and Cyclooxygenase-2 Promoter Inhibitory Activity in Harmonia axyridis Pallas and Coccinella septempunctata $Linn\dot{e}$)

  • 허진철;박자영;황재삼;박해철;강석우;황석조;윤치영;권택규;이상한
    • 한국식품저장유통학회지
    • /
    • 제13권4호
    • /
    • pp.513-518
    • /
    • 2006
  • 최근 곤충자원은 약용 및 식용으로 활용하려고 많은 연구가 되고 있으며 미래의 자원으로 발전할 수 있는 가능성은 충분하다. 본 연구는 곤충자원 중 칠성무당벌레와 무당벌레를 이용하여 생물학적 활성과 함께 약용 및 식용으로의 활용가능성을 알아보고자 하였다. 생물학적 활성을 알아보기 위하여 이들 추출물을 이용하여 항산화관련 실험인 DPPH, FRAP, linoleic acid 산화 억제실험을 하였으며, 분자 염증에 관련된 유전자인 Cyclooxygenase-2(Cox-2)의 promoter의 유전자 발현의 억제 유무를 알아보았다. 항산화 효과에 있어서는 무당벌레의 DW추출물에서 높은 활성을 나타내었으며, Cox-2의 promoter 활성을 조사한 결과 DW 추출물에서 Cox-2의 promoter 활성을 약 25% 정도 억제하는 무당벌레의 DW추출물을 발견하였는데 추출물의 산업적인 활용가능성을 확인하기 위하여 보다 많은 연구가 필요하다.

3T3-L1 지방세포에 대한 와송 디클로로메탄 추출물의 지질 대사 개선에 관한 연구 (The Lipid Efflux Effects of Dichloromethane Extract from Orostachys japonicus in 3T3-L1 Adipocyte Cells)

  • 김수환;이형선
    • 대한임상검사과학회지
    • /
    • 제51권4호
    • /
    • pp.514-520
    • /
    • 2019
  • 본 연구는 와송 유기용매 추출물중 DCM층을 이용하여 지방세포로 유도된 3T3-L1세포에 대한 지질대사 개선효과를 확인하는 연구이다. 세포독성을 확인하기 위하여 MTS-assay를 이용하여 6가지 분획의 와송 유기용매 추출물(EtOH, Hexane, DCM, EToAc, BuOH, H2O)에 대한 독성검사를 실시하여 세포에 대한 안정성을 확인하였다. 그 결과 DCM추출물이 전 농도에 걸쳐 안정성이 있음을 확인하고, 지질대사 개선효과를 확인하기 위하여 DCM층을 사용하였다. 우선 지질대사 개선효과를 확인하기 위하여 지질 배출능을 측정하였다. 지방세포로 유도된 3T3-L1세포에 대하여 DCM추출물을 처리한 후 oil-red O염색을 실시하여 지질 축적량을 평가한 결과 지질 배출능이 개선된 것을 확인할 수 있었다. 또한 지질 배출능 분석을 위하여 지질수송 단백질인 ABCA1, ABCG1의 mRNA발현을 real-time PCR로 확인한 결과 DCM추출물 처리 시 유의적인 발현 증가가 나타났음을 확인 하였다. 따라서 본 연구를 통하여 와송 DCM추출물이 3T3-L1 지방세포에 대하여 지질대사 개선효과가 있음을 확인하였다.

대조 추출물분획이 치은 섬유아세포의 생물학적 활성화에 미치는 영향 (EFFECT OF ZIZYPHI FRUCTUS EXTRACT ON THE BIOLOGICAL ACTIVITY OF GINGIVAL FIBROBLAST)

  • 양창호;이용무;조기영;배기환;정종평
    • Journal of Periodontal and Implant Science
    • /
    • 제24권1호
    • /
    • pp.144-154
    • /
    • 1994
  • Final goal of periodontal treatment is to reconstruct the destructed periodontal tissue as well as to remove the necrotic pathologic elements. The purpose of this study is to investigate on the effect of Zizyphi extract to the inhibitory ability on collagenolytic activity of P gingivalis, biologic activity of gingival fibroblasts, and on the collagen and protein synthesis of gingival fibroblasts. Gingival fibroblast from giniva of first bicuspids from patient for orthodontic treatment were used and cultured. For the measurement of inhibitory ability of collagenolytic activity, crude enzyme was extracted and used on the basis of modified Ono's method. On the inhibition of collagenolytic enzyme from herbal extracts, collagenokit CLN-100 were used. The cellular activity of gingival fibroblast, were studied using MTT solution and measured optical density on 570mm by ELISA reader. To measure the effects on the ability of whole protein and collagen synthesis, cell membrane was destructed with ultrasonic grinder after culturing, centrifuged and counted by liquid scintilation counter. The inhibitory effects on producing of $IL-l{\beta}$ by monocyte, after promotion of producing $IL-l{\beta}$ by LPS, were compared with the mixture of herbal extracts and other drugs using thymocyte stimulation assay. About inhibitory effects of $PGF_2$. by gingival fibroblasts, herbal extract was compared with the addition of the other control groups using enzyme imunoassay. On the inhibition of collagenolytic activity by P. gingivalis, benzene extracts showed the most efficient inhibitory effects among the $19{\mu}g/ml$ of the compared extracts and 40.5% by Tetracycline. On the cellular activity promoting effects, compared extracts showed a bit of more effects than PDGF of $100{\mu}g/ml$ concentration and IGF of $20{\mu}g/ml$ concentration. All of the PDGF, IGF, Zizyphi Fructus extract should increase in collagen synthesis, but especially 70% ethylalcohol extracts of Zizyphi Fructus showed comparably high effects among the compared extracts. Effects on whole protein synthesis were slightly increased on every extract but especially 70% ethylalcohol extract showed significantly effective than any other estract. On the inhibitory effects of Zizyphi Fructus $IL-l{\beta}$ production by monocyte, compared extracts showed 70% of highly inhibitory effect than that of 60% inhibition effects on controlled group and each extracts showed no significant difference. In $PGF_2$ production inhibitroy effect of Zizyphi Fructus gingival fibroblasts, Herbal extracts showed 70% of inhibition comparing with tat of 90.2% of controlled group, but each extracts showed similar effects excluding the $H_2O$ extracts. These results suggested that Zizyphi Fructus might be useful medicine for inhibition of inflammatory mediator including $IL-l{\beta}$ and $PGF_2$.

  • PDF

방사선에 의한 폐 섬유화증에서 c-Jun N-terminal Kinase(JNK)의 역할 (The Role of c-Jun N-terminal Kinase in the Radiation-Induced Lung Fibrosis)

  • 어수택;홍기영;이영목;김기업;김도진;;김용훈;박춘식;염욱;김은석;최두호
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
    • /
    • 제50권4호
    • /
    • pp.450-461
    • /
    • 2001
  • 서 론 : 폐암의 치료에 사용되는 방사선 조사는 흉곽 및 여러장기에 다양한 합병증을 발생시키며, 특히 방사선 섬유화증과 방사선 폐렴을 일으킨다. 방사선 조사의 초기 효과는 보통 염증 세포들의 침윤, 간질 및 폐포 부종, 상피세포의 탈락에 의한 방사선 폐렴이며 후기 효과는 방사선 섬유화증을 초래한다. 방사선 조사는 폐장의 염증 세포에서 TGF-beta의 단백 합성 및 활성도를 증가시키고, 생체외 실험에서 TGF-beta는 mitogen activated protein kinases(MAPKs)를 활성화시킨다는 것이 알려져 있다. c-Jun N-terminal kinase(JNK)는 MAPKs중의 하나로 핵단백질인 c-Jun을 인산화(phosphorylation) 시켜 전사(transcription)를 증가시키는데 생체외 실험에서 자외선 조사후 대식 세포에서 JNK의 활성이 증가되는 것으로 알려져 있다. 하지만 현재 까지 생체내에서 JNK가 방사선 조사에 의해 활성화되는지 그리고 이들 활성화가 방사선 섬유화증의 병인에 관계하는 지는 알려진 바 없다. 본 연구는 흉부에 방사선을 조사한 백서를 이용하여 방사선 섬유화증의 병인에 JNK가 신호 전달 체계에서 주요한 역할을 담당하는 지를 알아보고자 시행하였다. 대상 및 방법 : C57BL/6 백서의 전 흉부에 14 Gy의 $^{60}CO{\gamma}$-ray를 조사한 후 일정한 간격(1주, 4주, 8주)으로 폐장의 세포 분석을 위한 기관지 폐포 세척술, elastin의 합성 정도를 측정하기 위한 Verhoeff stain, collagen 합성 양을 알기 위한 hydroxyproline의 측정, JNK 활성도를 알기 위한 in vitro JNK assay를 시행하였다. 결 과 : 폐장의 기관지 폐포 세척 소견상 총세포수는 방사선 조사 4주, 8주후에 증가하는 소견을 보였다. 세포의 감별 분석상 림프구는 4주후 증가되는 경향을 보였다. Verhoeff 염색상 폐포 조직의 특이 변화 소견은 없었으며 hydroxyproline의 양은 방사선 조사전에 비해 4주, 8주후에 증가하는 소견을 보였다. 방사선 조사 후 시간이 경과함에 따라 4주 후에 c-Jun N-terminal kinase(JNK)의 활성도가 가장 높았으며 8주 후에는 4주 후와 비슷한 활성도를 보였다. 결 론 : 흉곽에 방사선 조사 후 hydroxyproline양의 증가와 함께 JNK 활성도의 증가 소견을 보여 방사선 폐섬유화증의 병인에 JNK가 관여될 것으로 사료된다.

  • PDF

국내에서 분리된 포도상구균의 Vancomycin 내성빈도 및 특성 (Characterization and Frequency of Vancomycin Resistance in Staphylococcus aureus Isolated in Korea)

  • 박성언;김종배
    • 대한의생명과학회지
    • /
    • 제6권3호
    • /
    • pp.201-208
    • /
    • 2000
  • Vancomycin은 세포벽의 합성을 억제하여 세균에 대한 항균효과를 나타내는 glycopeptide 계 항생물질로서 그람양성세균으로 인한 감염치료에 광범위하게 사용되며, 특히 methicillin 내성 포도상구균의 선택적 치료제로 쓰이고 있다. 그러나 최근 임상검체에서도 중등도의 내성을 가지는 포도상구균 (Mu50: MIC 8 $\mu\textrm{g}$/ml)이 나타나기 시작하였고 여러 가지 여건상 국내에서도 내성균주가 분리될 가능성이 높다고 사료되어 임상검체 중 methcillin 내성 포도상구균을 대상으로 vancomycin 감수성 및 내성빈도 조사를 실시하고 이에 따른 내성기전을 알아보고자 하였다. 본 실험 결과 107주 (株)의 methicillin 내성균주 중 23.3%가 vancomycin에 대하여 내성을 보였으며 vancomycin 내성을 나타내는 표준균주인 Mu50과 Mu3의 중간 정도의 내성빈도를 보였다. 중합효소 연쇄반응을 통해 장구균의 vancomycin 내성에 관여하는 vanA, vanB, vanC1, vanC2, vanH 특이 유전자는 증폭되지 않았다. SDS-PAGE를 실시하여 81 kDa, 58 kDa, 33 kDa, 28 kDa 등의 주요 단백 분획을 확인하였고, Mu50에서 45 kDa의 특징적인 단백 분획을 관찰하였다. LDH enzyme assay에서는 한 개의 검체가 Mu50과 함께 높은 LDH 활성을 보였다.

  • PDF

방사선 유도 DNA 손상에 대한 인진쑥의 방어효과 (Protective Effects of a Herb, Artemisia capillaris, Against Radiation-induced DNA Damage)

  • 조성기;오헌;천의현;정우희;조남정
    • 한국식품영양과학회지
    • /
    • 제33권1호
    • /
    • pp.22-27
    • /
    • 2004
  • 인진쑥의 방사선에 의한 산화적 손상에 대한 DNA 방어효과를 확인하기 위하여 마우스 림프구에서 단세포전기영동법과 CHO 세포에서 미소핵 형성 시험 그리고 마우스의 간과 흉선 조직의 DNA에서 8-OHdG의 형성정도를 관찰하였다. 그 결과 단세포전기영동법 및 미소핵 형성 시험에서는 50 $\mu\textrm{g}$/mL의 농도에서 가장 높은 DNA 손상 억제 효과를 나타내었으며, 8-OHdG 형성 정도는 간과 흉선 모두 30 mg/kg 농도 투여군에서 높은 방어효과를 나타내었다. 이상의 결과에서 인진쑥 추출물은 DNA 상해를 효과적으로 방어하였고 특히, 기존에 알려진 방사선 방호물질에 비하여 독성이 적은 천연물이라는 관점에서 방사선 방어제로 적용이 가능할 것으로 사료된다.