• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제36권4호
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• pp.269-275
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• 1998

톡소포자충과 네오포자충 (Neospora caninum)의 충체 항원으로 톡소포자충 양성 혈청 및 톡소포자충증 환자의 혈청과 ELISA, western blot 및 면역형광법을 실시하였다. ELISA에서는 172명의 톡소포자충 양성 혈청에서 12명 （6.7％）이 두 항원에 모두 반응하였으며, 톡소포자충 음성인 110명의 혈청에서 1명이 네오포자충과 반응하였다. 교차반응을 보인 12 명의 혈청을 western blot으로 확인하였을 때, 톡소포자충 항원과는 다양한 양상으로 반응하였으나, 30 kDa (SAG1)과 22 kDa (SAG2) 항원과 강하게 반응하였다. 네오포자충과의 반응은 급격히 감소하였으나, 세 경우에서 43 kDa 단백질과 반응하였으며, 음성 혈청군의 1명도 43 kDa 단백질과 반응하였다. 면역형광법에서는 모든 양성 혈청이 톡소포자충의 세포막에 표지되었으나, 네오포자충과의 반응은 세포막, 세포 내 소기관, 혹은 둘 다를 표지하였다. 이로써, 톡소포자충과 네오포자충의 항원적 교차반응과 사람 혈청에서 네오포자충에 대한 항체의 존재를 확인하였으며, 네오포자충에 의한 인체감염 가능성에 대해서는 추후 연구가 필요할 것으로 판단된다. 또, N. caninum의 우리말 이름을 네오포자충으로 제안한다.

• KSBB Journal
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• 제26권3호
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• pp.199-205
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• 2011

Using tetrameric ${\beta}$-galactosidase as a model protein, anchoring motives were screened in Bacillus subtilis spore display system. Eleven spore coat proteins were selected considering their expression levels and the location in the spore coat layer. After chromosomal single-copy homologous integration in the amyE site of Bacillus subtilis chromosome, cotE and cotG were chosen as possible spore surface anchoring motives with their higher whole cell ${\beta}$-galactosidase activity. PAGE and Wester blot of extracted fraction of outer layer of purified spore, which express CotE-LacZ or CotG-LacZ fusion verified the existence of exact size of fusion protein and its location in outer coat layer of purified spore. ${\beta}$-galactosidase activity of spore with CotE-LacZ or CotG-LacZ fusion reached its highest value around 16~20 h of culture time in terms of whole cell and purified spore. After intensive spore purification with lysozyme treatment and renografin treatment, spore of BJH135, which expresses CotE-LacZ, retained only 1~2% of its whole cell ${\beta}$-galactosidase activity. Whereas spore of BJH136, which has cotG-lacZ cassette in the chromosome, retained 10~15% of its whole cell ${\beta}$-galactosidase activity, proving minor perturbation of CotG-LacZ, when incorporated in the spore coat layer of Bacillus subtilis compared to CotE-LacZ. Usage of Bacillus subtilis WB700, of which 7 proteases are knocked-out and thereby resulting in 99.7% decrease in protease activity of the host, did not prevent the proteolytic degradation of spore surface expressed CotG-LacZ fusion protein.