From a cluster of structural rRNA genes which has previsouly been cloned (Hwang and Kim, in submission; J. Microbiol. Biotechnol.), a 1.0-kb Eco RI fragment of DNA which shows significant homology to the 25S and rRNA s of Tricholoma matsutake was used for sequence analysis. Nucleotide sequence was bidirectionally determined using delection series of the DNA fragment. Comparing the resultant 1016-base sequence with sequences in the database, both the 3'end of 25S-rRNA gene and 5S rRNA gene were searched. The 5S rRNA gene is 118-bp in length and is located 158-bp downstream of 3'end of the 25S rRNA gene. IGSI and IGS2 (partial) sequences are also contained in the fragment. Multiple alignment of the 5S rRNA sequences was carried out with 5S rRNA sequences from some members of the subdivision Basidiomycotina obtained from the database. Polygenetic analysis with distance matrix established by Kimura's 2-parameter method and phylogenetic tree by UPGMA method proposed that T. matsutake is closely related to efibulobasidium allbescens. Secondary structure of 5S rRNA was also hypothesized to show similar topology with its generally accepted eukaryotic counterpart.
The spore of Tricholoma matsutake is considered to be the starting point of the mushroom growth cycle, but the mechanism of mycelial development from the spore stage is not yet clarified. In this study, we tried to measure how far the spores of T. matsutake disperse from a fruiting body located at a Pinus densiflora stand in Korea. We established 16 slide glasses coated with glycerin near a fruiting body in four directions separated by four different distance intervals within a mushroom productive stand after removing all other fruiting bodies from three plots. The number of dispersed spores increased with time from the first day (475 $spores/cm^2$) to the fourth day (836 $spores/cm^2$) after the pileus opened. The number of spores dispersed downward was about 1.5 times greater than that dispersed toward the ride. The number of dispersed spores decreased exponentially as the distance from each fruiting body increased. More than 95% of the spores dropped within a meter from the fruiting body, with 75% dropping within 0.5 m. Even so, the number of spores dispersed over 5 m from the fruiting body was more than 50 million when considering the total number of spores produced by a fruiting body is about 5 billion.
In order to confirm the presence of putative glucoamylase gene in Tricholoma matsutake genome, the genomic DNA was prepared from T. matsutake NBRC30773 strain and was used as template to clone the glucoamylases gene (TmGlu1). We obtained the nucleotide sequence of TmGlu1 and its franking region. The coding region (from ATG to stop codon) is 2,186 bp. The locations of exons and introns were determined from the nucleotide sequences of 3'- and 5'-RACE PCR and RT-PCR products. On the other hand, to investigate the relationship between composition of medium and glucoamylase expression, we checked the expression level of glucoamylase gene by realtime reverse transcription PCR and measurement of glucoamylase enzyme activity. It was found that enzyme activity of glucoamylase was very low in different medium. Expression of glucoamylases gene appeared to not be affected by different carbon source.
In this study, the optimum conditions for mycelium culture of the mushroom Tricholoma matsutake and the inhibitory effect of the mycelium extracts no tyrosinase activity have been examined. When the extracts of the Tricholoma matsutake mycelia were tested for inhibitory activity on tyrosinase, it was found that the components extracted with ethyl acetate and water showed the highest inhibitory activity. The effect of antioxidants on the growth of mycelium and tyrosinase-inhibiting activity was also investigated. The results showed that tocopherol inhibited the growth in a concentration-dependent manner. In terms of tyrosinase-inhibiting activity, however, tocopherol was found to enhance the inhibitory activity.
Endophytes play an important role in the growth and development of the host. However, the study of endophytes is mostly focused on plants, and reports on bacteria associated with fungi are relatively rare. We studied the bacteria associated with fruiting bodies of Tricholoma matsutake picked from seven main T. matsutake-producing areas in Sichuan, China, by barcoded pyrosequencing. About 8,272 reads were obtained per sample, representing 40 phyla, 103 classes, and 495 genera of bacteria and archaea, and 361-797 operational taxonomic units were observed at a 97% similarity level. The bacterial community was always both more abundant and more diverse than the archaeal community. UniFrac analysis showed there were some difference of bacterial communities among the samples sites. Three bacterial phyla, Proteobacteria, Bacteroidetes, and Firmicutes, were dominant in all samples. Correlation analysis showed there was a significant correlation between some soil properties and bacterial community associated with T. matsutake. This study demonstrated that the bacteria associated with T. matsutake fruiting bodies were diversified. Among these bacteria, we may find some strains that can promote the growth of T. matsutake.
Kim, Miae;Yoon, Hyeokjun;You, Young-Hyun;Kim, Ye-Eun;Woo, Ju-Ri;Seo, Yeonggyo;Lee, Gyeong-Min;Kim, Young Ja;Kong, Won-Sik;Kim, Jong-Guk
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.23
no.10
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pp.1347-1356
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2013
Tricholoma matsutake, an ectomycorrhiza that has mutual relationships with the rootlet of Pinus denisflora, forms a fruiting body that serves as a valuable food in Asia. However, the artificial culture of this fungus has not been successful. Soil fungi, including T. matsutake, coexist with many other microorganisms and plants; therefore, complex microbial communities have an influence on the fruiting body formation of T. matsutake. Here, we report on the structures of fungal communities associated with the fairy ring of T. matsutake through the pyrosequencing method. Soil samples were collected inside the fairy ring zone, in the fairy ring zone, and outside the fairy ring zone. A total of 37,125 sequencing reads were obtained and 728 to 1,962 operational taxonomic units (OTUs) were observed in the sampling zones. The fairy ring zone had the lowest OTUs and the lowest fungal diversity of all sampling zones. The number of OTUs and fungal taxa inside and outside the fairy ring zone was, respectively, about 2 times and 1.5 times higher than the fairy ring. Taxonomic analysis showed that each sampling zone has different fungal communities. In particular, out of 209 genera total, 6 genera in the fairy ring zone, such as Hemimycena, were uniquely present and 31 genera, such as Mycena, Boletopsis, and Repetophragma, were specifically absent. The results of metagenomic analysis based on the pyrosequencing indicate a decrease of fungal communities in the fairy ring zone and changes of fungal communities depending on the fairy ring growth of T. matsutake.
The purpose of this study is to understand spatio-temporal changes of active fungal biomass and water in Tricholoma matsutake soil colonies during the mushroom fruiting season. The active fungal biomass was estimated by analyzing ergosterol content at four different points within four replicated locations in a single circular T. matsutake colony at Ssanggok valley in the Sogri Mt. National Park in Korea during 2003 to 2005. The four points were the ahead of the colony, the front edge of the colony and 20 cm and 40 cm back from the front edge of the colony. Ergosterol content was 0.0 to 0.7 ${\mu}g$ per gram dried soil at the ahead, 2.5 to 4.8 ${\mu}g$ at the front edge, 0.5 to 1.8 ${\mu}g$ at the 20 cm back and 0.3 to 0.8 ${\mu}g$ at the 40 cm back. The ergosterol content was very high at the front edge where the T. matsutake hyphae were most active. However, ergosterol content did not significantly change during the fruiting season, September to October. Soil water contents were lower at the front edge and 20 cm back from the front edge of the colony than at the ahead and 40 cm back during the fruiting season. Soil water content ranged from 12 to 19% at the ahead, 10 to 11% at the edge, 9 to 11% at the 20 cm back and 11 to 15% at the 40 cm back. Our results suggest that the active front edge of the T. matsutake soil colony could be managed in terms of water relation and T. matsutake ectomycorrhizal root development.
Ka, Kang-Hyeon;Kim, Hee-Su;Hur, Tae-Chul;Park, Hyun;Jeon, Sung-Min;Ryoo, Rhim;Jang, Yeongseon
The Korean Journal of Mycology
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v.46
no.1
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pp.34-42
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2018
Tricholoma matsutake (Pine mushroom) is expensive, and its artificial cultivation has been tried in several countries. Until date, the only successful cultivation of artificial pine mushroom in pine forests uses matsutake-infected pine trees. The National Institute of Forest Science in Korea has been restudying this method since 2000. Success in fruit production and reproduction was achieved in 2010 and 2017, respectively, in the same locale. The successes proved that pine mushrooms could be cultivated artificially in the field using matsutake-infected pine trees. The fruiting of pine mushroom in October 2010 occurred 6 years, 6 months after the transplantation of matsutake-infected pine trees. Five pine mushrooms reoccurred in September 2017, 13 years, 5 months and 15 years, 5 months after the transplantation of the respective matsutake-infected pine trees. The distance between the matsutake-infected pine tree and the pine mushrooms was 12 cm at 6.6 years, 90~115 cm at 13.5 years, and 95 cm at 15.5 years. Fruiting bodies occurred 13~16 days after the underground temperature declined to below $19^{\circ}C$. In conclusion, the use of matsutake-infected pine trees remains the only way to artificially cultivate pine mushrooms. More knowledge of the environmental factors affecting matsutake fruiting would be beneficial.
Kim, Seong-Sam;Lim, Kyu-Sang;kim, Hae-Ja;Chong, Myong-Soo;Cho, Hwa-Eun;Choi, Yun-Hee;Lee, Ki-Nam
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
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v.22
no.2
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pp.365-370
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2008
This study was performed to investigate the influence of extracts from mixed culture with Tricholoma matsutake mycelium and Cordyceps militaris mycelium on hypoglycemia in streptozotocin-induced diabetic rats. Experimental animals were divided into 7 groups : normal control group(NC), diabetes control group (DC), positive control group(PC), non-fermented OCM(oriental medicine & cereal medium) extracts group (UM), crude polysaccharide of non-fermented OCM extracts group (UME), fermented OCM extracts group (UF), crude polysaccharide of fermented OCM extracts group (UFE). NC, DC groups were orally administered saline, PC group was orally administered acarbose. UM, UME, UF, UFE groups were orally administered each extract once a day for 14days. Blood glucose level was lower in the all administering OCM extract groups (UM, UME, UF, UFE) than in the diabetes group(p<0.05), and specially UF, UFE groups were similar to tendency of PC group. ALT, ALP activity in OCM groups were not significantly lowered than PC group(p<0.05). AST activity was not different with PC group. The results of this study show that extracts from mixed culture with Tricholoma matsutake mycelium and Cordyceps militaris mycelium may have a beneficial effect on the hypoglycemia.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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