Oilseed rape (Brassica napus L.) is an important crop due to its high oil content in the seed. Recently, the demand for the improvement of crop for biodisel energy source is increased as oil prices in the world has increased dramatically. Until now, oilseed rape breeding was carried out by cross-hybridization between different varieties and related germplasms. However, like as many other crops, the application of tissue culture and gene transformation systems has been introduced into oilseed rape breeding program including the development of transgenic canola plants. In this study, we reviewed a history of tissue culture and genetic transformation research in oilseed rape plants and indicated some important aspects for the production of transgenic oilseed rape plants.
This report describes recent advances in tissue culture, genetic transformation of commercial rose (Rosa hybrida) and in development of new rose cultivars by molecular breeding. Rose is one of major cut-flowers in global horticulture industry. Successful progresses were made in development of new cultivars for pathogen resistant, environmental stress resistant and petal color modification by molecular breeding. New cultivars, however, has not reported yet in korea, although lots of progresses were achieved in each field of conventional breeding, tissue culture and genetic transformation. Cooperation in these research fields will promote screening of useful genes to have specific traits on rose and exploiting of processes to improve in the efficiency of tissue culture and genetic transformation of rose, therefore, we hopefully expect that new rose cultivars by molecular breeding will be released in the near future.
Potato is one of the most important crops in the world. Due to vegetative propagation of this crop, techniques of plant tissue culture and genetic transformation are often applied for potato researches and a lot of progress has been made in the breeding programs using these techniques during the last decades. In potato, there have been several trials to introduce GM potato varieties to the world market, but they so far failed due to the changed legislation and unwillingness of large processors to process GM potatoes. These issues are highly associated with the general acceptances of the public and other political decisions. In addition to these, there are still obstacles to overcome to achieve the development of commercial potato variety and several factors to improve horticulturally important traits. In this study, therefore, we reviewed recent advances and research status on tissue culture and genetic transformation in potato and discussed future perspective.
Plant tissue culture is a technique that has invariably been used for various purposes such as obtaining transgenic plants for crop improvement or functional analysis of genes. However, this process can be associated with a variety of genetic and epigenetic instabilities in regenerated plants, termed as somaclonal variation. In this study, we investigated mutation spectrum, chromosomal distributions of nucleotide substitution types of single-nucleotide polymorphisms (SNPs) and insertions/deletions (InDels) by whole genome re-sequencing between Dongjin and Nipponbare along with regenerated plants of Dongjin from different induction periods. Results indicated that molecular spectrum of mutations in regenerated rice against Dongjin genome ranged from $9.14{\times}10^{-5}$ to $1.37{\times}10^{-4}$ during one- to three-month callus inductions, while natural mutation rate between Dongjin and Nipponbare genomes was $6.97{\times}10^{-4}$. Non-random chromosome distribution of SNP and InDel was observed in both regenerants and Dongjin genomes, with the highest densities on chromosome 11. The transition to transversion ratio was 2.25 in common SNPs of regenerants against Dongjin genome with the highest C/T transition frequency, which was similar to that of Dongjin against Nipponbare genome.
Efficient protocol for plant shoot regeneration of Brassica juncea L. CZERN was established by using organic media components and growth stimulating factors of the vermicompost and coelomic fluids. Formulated organic plant tissue culture media (Vermicompost (30%) extracts supplemented with 20 mL/L coelomic fluid) have shown maximum shoot regeneration when compared with the Murashige and Skoog (MS) medium, which were supplemented with 1 mg/L 6-benzyladenine (BA) and 0.1 mg/L of Naphthaleneacetic acid (NAA). Cotyledon explants produced the highest shoot regeneration frequency from fourday-old germinated seedlings in comparison with non-germinated seedlings. The vermicompost extracts have proved to be the best organic plant growth media to induce shoots from cotyledons compared to the MS media. Statistically significant difference (P = 0.008) for the root length, shoot length (P=0.000350) and the leaves (P=0.375) of the mustard plantlets were analyzed successfully. The survival rate was 98% in the mustard cotyledons on the Vermicompost extract media and 63% on MS media respectively. The coelomic fluid also is much suitable to induce shoots from cotyledons at lower concentrations. It was also shown that the vermicompost extract, which comprised of humic acids along with coelomic fluid, affected shoot regeneration from the cotyledons. An efficient and organic shoot regeneration study was standardized and it can be applicable in the improvement of the economically important crops.
To study the capacity of callus and shoot formation on seedling stage in soybean, excised hypocotyl, epicotyl, shoot tip, cotyledonary node and primary leaf were cultured on artificial media (MS and B$_{5}$ medium) supplemented with several hormones. Regeneration of shoots was fairly successful from shoot tip and cotyledonary node tissues in soybean. These shoots could be rooted in vitro through tissue culture technique and transplanted normally into soil. Hypocotyl and epicotyl tissues formed only callus, of which growth and appearance were different according to the kinds of media and additives. A small number of shoots were formed from primary leaf tissues, but they did not develop further.r.
In mass production of seed-potato plantlets, the processes for in vitro propagation and ex vitro acclimatization with a high cost should be improved by a culture system with environmental control using scaled-up culture vessels. The experiment was conducted to design a hydroponic culture system for enhancement of growth and development of seed-potato (Solanum tuberosum) plantlets cultured under photoautotrophic (without sugar in culture medium) conditions with controlled light intensity and ventilation rate. The culture system was consisted of scaled-up culture vessels, ventilation pipes, a multi-cell tray and an environmental control system (ECS) for optimum controlling in temperature, light intensity, ventilation rate, and culture-medium supply. Growth and development of the plantlets was significantly increased under the ECS compared with a conventional culture system (CCS) of photomixotrophic culture (with sugar in culture medium) using small scale vessels. For 21 days, leaf area of the plantlets was expanded more than 2 times, and number of internodes also approximately 4 times greate. under the ECS. In addition, the photoautotrophic growth in sweetpotato (Ipomoea batatas) and chrysanthemum (Chrysanthemum morifolium) plantlets was greater more than 2 times compared with the CCS.
Epithelial-mesenchymal interaction plays a important role in cell growth and differentiation. This interaction is already well known to have an importance during the organ development as well as cell growth and differentiation. However, in vitro experimental model is not well developed to reproduce in vivo cellular microenvironment which provide a epithelial-mesenchymal interaction. Because conventional monolayer culture lacks epithelial-mensenchymal interaction, cultivated cells have an morphologic, biochemical, and functional characteristics differ from in vivo tissue. Moreover, it's condition is not able to induce cellular differention due to submerged culture condition. Therefore, the aims of this study were to develop and evaualte the in vitro experimental model that maintains epithelial-mesenchymal interaction by organotypic raft culture, and to characterize biologic properties of three-dimensionally reconstituted oral keratinocytes by histological and immunohistochemical analysis. The results were as follow; 1. Gingival keratinocytes reconstituted by three-dimensional organotypic culture revealed similar morphologic characteristics to biopsied patient specimen showing stratification, hyperkeratinosis, matutation of epithelial architecture. 2. Connective tissue structure was matured, and there is no difference during stratification period of epithelial 3-dimensional culture. 3. The longer of air-exposure culture on three-dimensionally reconstituted cells, the more epithelial maturation, increased epithelial thickness and surface keratinization 4. In reconstitued mucosa, the whole epidermis was positively stained by anti-involucrin antibody, and there is no difference according to air-exposured culture period. 5. The Hsp was expressed in the epithelial layer of three-dimensionally cultured cells, especially basal layer of epidermis. The change of Hsp expression was not significant by culture stratification. 6. Connexin 43, marker of cell-cell communication was revealed mild immunodeposition in reconstitued epithelium, and there is no significant expression change during stratification. These results suggest that three-dimensional oragnotypic co-culture of normal gingival keratinocytes with dermal equivalent consisting type I collagen and gingival fibroblasts results in similar morphologic and immunohistochemical characteristics to in vivo patient specimens. And this culture system seems to provide adequate micro-environment for in vitro tissue reconstitution. Therefore, further study will be focused to study of in vitro gingivitis model, development of novel perioodntal disease therapeutics and epithelial-mensenchymal interaction.
The bioreactor system for the large-scale plant tissue culture was developed to control the pH concentration and DO (dissolved oxygen), and air flowrate. The system controlling the proper air flow rate for each bulblet growth stage and monitoring the contamination of bioreactor using the pH change was controled by computer program. For the uniform bulblet distribution in bioreactor, the proper air flow rate was 300 cc/min at the beginning of bulblet culture, 400 cc/min after 20 days, 500 cc/min after 40 days, 600 cc/min after 60days, and 700 cc/min after 80 days. It was possible to maintain the pH concentration within 5.5$\pm$0.5 during the culture by control system of bioreactor.
In order to develop the biotechnological methods for the mass production of anticancer compounds from tissue culture of Panax ginseng C.A. Mayer, these studies were carried out for the selection of ginseng cell lines containing higher concentration of polyacetylene compounds and optimal condition for their biosynthesis. Panaxynol, one of ginseng polyacetylene, was not detected in any callus induced from ginseng superior cell lines cultured on MS medium supplemented with $\beta$-chlorophenoxy acetic acid (CPA). Panaxydol, another one of polyacetylene and anticancer compounds, were detected in calli of 5 cell lines by thin layer chromatogram and gas chromatogram. Among the 18 ginseng superior lines, the cell line 30201 has higher content of panaxydol. Especially, panaxydol was not detected in the callus induced from cell line 10301 which cultured on the medium containing CPA only, however, it was detected on the same callus cultured on mixed medium containing CAP 2 mg/L and BA 0.05 mg/L. SH medium was better than MS medium for ginseng callus growth and biosynthesis of polyacetylene, and also found that it was not effected by NAA and sucrose concentration in the culture medium.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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