In order to elucidate the mechanism of the leaf-burning disease of ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer), the relationships between thylakoid membrane peroxidation and chlorophyll bleaching were investigated in comparison with the ones of soybean (Glycine max L). When I measured the rate of lipid peroxidation in the thylakoids of ginseng and soybean by irradiation of light(60 w.m-2), it was identified that, the remarkably lower rate of lipid peroxidation was found in the ginseng thylakoid than the case of soybean. When lipid peroxidation of ginseng thylakoid was induced in the dark, chlorophyll contents of thylakoid was not changed. The results suggest that lipid peroxidation does not affect the chlorophyll bleaching in ginseng thylakoid. Thylakoid membrane peroxidation as well as chlorophyll bleaching was closely related with photosynthetic electron transport. But, according to the quenching experiment active oxygen species induced lipid peroxidation may be different species in the case of chlorophyll bleaching.
Pigments and thylakoid membrane proteins were investigated in wild type and PS I- mutants from Synechocystis sp. PCC6803 Comparing morphological features, B2 was less fluorescent than the other strains. The contents of chlorophyll a were propotional to the FNR activity in thylakoid membrane. The FNR activity of mutants was lower than that of wild type. In the result of pigments analysis, mutants had smaller cholophyll a than that of wild type. The major carotenoid was found to he $\beta$-caroene, but aeaxanthin was barely detected in thylakoid membrane of mutants. The polypeptide, 14.8kD was detected by electrophoresis in mutants. It was considered to be the modification of 15.4kD in wild type. Membrane polypeptides of 17.6 and 19.7kD were not detected in mutants. In the result of western blotting, subunit I was detected in all strains, but subunit II was barely detected in mutants. Subunit II was not detected in B2 at all. In view of the results so far achieved, the changes of contents of chlorophyll and zeaxanthin were affected by the defficiency or modification of functional domain in subunit I. Also the modification in subunit I affected the subunit II- binding site in PS I. As the result, efficiency of photosynthesis was decreased. Key words: Synechoystis sp. PCC6803, PS I - mutant, Photosynthetic efficiency, Pigment,Thylakoid membrane proteins, Subunit I, II.
Environmental Sciences Bulletin of The Korean Environmental Sciences Society
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v.4
no.2
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pp.85-94
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2000
The effects of ozone on chloroplast development in barley seedlings during greening was investigated based on ultrastructural changes in the chloroplasts and band pattern changes in the chloroplast thylakoid membrane proteins. In this analysis of the chloroplast thylakoid membrane thylakoid protein band pattern by SDS-PAGE, none of the 24-hour greening bands included were clearer than the control. This means that the ozone treatment produced a dealy in chloroplast development and decreased the amount of thylakoid membrane proteins. LHC II chloroplast band of developing barley seedlings treated with 0.5 and 1.0 ppm ozone during the last 4 hours of the 24-hour greening period was weaker than the other bands. This result indicates that ozone affects the LHC II protein complex of the chloroplast thylakoid membrane. When investigating the ultastructural changes in ozone-treated chloroplast, the main site affected by 0.5 ppm ozone was the chloroplast grana, thereby explaining the delayed chloroplast development during the early phase of greening. In addition, there was also a structural change in the stromal grana of the ozone treated chloroplast during the middle phase of greening. The effects of ozone on the chloroplast of barley seedlings during the last phase of 48-hour greening were more functionally inhibiting than structural changes.
The formation of osmiophilic globules related to the granal lysis has been investigated with a shade plant ginseng (Panax ginseng C. A. Meyer) exposed to full sunlight. The changes of chloroplast were examined as a function of time over 9 days under full sunlight exposure. The ultrastructure of ginseng leaf showed swelling of the granal thylakoid during an early stage of the light exposure. The thylakoid membrane faded and small electron-opaque dots were aggregated on the edges of the granal thylakoid membrane when the exposure time was increased over 1 day. Then, the sahpe of the grana changed into round. After the exposure over 3 days, there appeared many osmiophilic globules with multi-lamellated concentric structure. The globules at this stage were partly accumulated with osmiophilic substances. The outermost membrane of these multi-lamellated osmiophilic globules was attached to the stromal thylakoid membrane connecting to the deforming grana. The osmiophilic globules were elongated after 9 days. In this stage, the multi-lamellated structure was difficult to identify due to severe accumulation of osmiophilic substances. The number of the osmiophilic globules also increased along with the full sunlight exposure time. This observation leads us to believe that the multi-lamellated osmiophilic globules came from the deformation of grana.
The effects of light on the pigment production and chloroplast development were examined on ginseng hairy roots cultured in 1/2MS liquid medium. The chlorophyll and carotenoid production were increased from 1,000 to 3,500 lux condition, but decreased drastically in 7,000 lux condition. The anthocyanin production was significantly increased with increment light intensity(1,000∼7,000 lux). The thylakoid membrane of chloroplast was proplastid in dark condition and it began to develop into thylakoid membrane in 1,000 lux condition and then intact thylakoid membrane was developed in 3,500 lux condition. However, the development of thylakoid membrane in 7,000 lux condition was inhibited comparing to 3,500 lux condition. The total chlorophyll production in blue light condition were high comparing to other wavelength and same as 40% of total chlorophyll on white light(3,500 lux) condition. The chlorophyll and carotenoid production by sucrose concentration were high in 3% sucrose condition and anthocyanin production was high in 4% condition. The production of chlorophyll and carotenoid by light periods was high when explants were cultured in dark condition for 1 week and then transferred to light condition for 4 weeks. Our results suggest that pigment production and chloroplast development could be accelerated by light Intensity of specific wavelength in cultures of ginseng hairy root.
Cyanobacteria Synechocystis PCC 6803 or the extracted thylakoid membrane from this strain was appled to photosynthetic bio-electrochemical fuel cell(PBEFC) for the production of hydrogen under the illumination of 48Klux using halogen lamp. PBEFC was composed of anode, cathode and membrane between them. Electrode material was carbon paper while electron mediator and receptor were added phenazine methosulfate(PMS) and potassium ferricyanide respectively. When water and 50 mM tricine buffer and $300{\mu}M$ PMS were added to the anode under the light condition, PBEFC produced the current density $4.4{\times}10^{-5}\;mA/cm^2$, $1.4{\times}10^{-4}\;mA/cm^2$ and $2.4{\times}10^{-4}\;mA/cm^2$, respectively. And the addition of the thylakoid membrane to the system increased current density to $1.3{\times}10^{-3}\;mA/cm^2$. Two times increase of the thylakoid membrane into the anode doubled the current density to $2.6{\times}10^{-3}\;mA/cm^2$. But the current density was not increased proportionally to the amount of thylakoid membrane increased. The system was unstable to measure the electricity output due to the foam production in the anode. Addition of triton X-100 and tween 80 stabilized the system to measure the electricity output but the current density was not increased higher than $8.4{\times}10^{-4}\;mA/cm^2$ and $2.3{\times}10^{-3}\;mA/cm^2$. When the thylakoid membrane was substituted to Synechocystis PCC 6803 cells of four-day culture which has chlorophyll contents $20.5{\mu}g/m{\ell}$, maximum current density was $1.3{\times}10^{-3}\;mA/cm^2$ with $1\;k{\Omega}$ resistance.
The effect of growth regulators (NAA, BA and $ extrm{GA}_3$) and light (blue, red and far-red) on the changes in total protein and thylakoid membrane protein pattern of callus from intergeneric protoplast fusion between Nicotiana tabacum and Solanum nigrw were investigated. When the callus were irradiated with different wavelengths of light, blue and red light accelerated the synthesis of total proteins and thylakoid membrane proteins. Particularly, red light led to an increase in the protein synthesis compared to blue light. When the callus were subjected to various combinations of growth regulators, NAA+$ extrm{GA}_3$ and NAA+BA treatments induced remarkable increase of total proteins and thylakoid membrane proteins accumulation, particularly in the combination of NAA+$ extrm{GA}_3$. NAA.$ extrm{GA}_3$ treatment with irradiation of red ligh showed highest value in the accumulation of total proteins and thylakoid membrane proteins. We conclude that simultaneous application of red light and NAA+$ extrm{GA}_3$ treatment may induce synergistic effect in the synthesis of total proteins and thylakoid membrane Proteins.
Ultrastructural changes in Panax ginseng C. A. Meyer mesophyll chloroplasts and variation of thylakoid membrane protein in responce to the light intensity were studied in leaves of two-y-old plants exposed to two different light intensities under field coditions. The leaves were allowed to function for three months after emergence under two contrasting light conditions. The ginseng chloroplasts of 5% light were filled with highly stacked grana of condensely arrayed thylakoids, so that the stroma space was hardly observed. In contrast, chloroplasts from leaves at 100% sunlight had fewer thylakoid membranes and smaller grana stacks. The number of osmiophilic globules increased. Total Chl content and Chl b content were lower at 100% sunlight than 5% sunlight. The thylakoid membrane proteins in the leaves grown at 100% sunlight showed lower CPIa, LHCII and CP29 than those with 5% sunlight. This effect was most obvious for LHCII. Polypeptides showed major bands at 90, 64, 29-30, 22 and 14 kD, and minor bands at 59, 58, 54, 52, 49, 46, 44, 35, 23, 21 and 18-19 kD. All these bands were lower in intensity in the leaves exposed to 100% sunlight. Moreover, the bands at 58-59, 46-47 and 23 kD disappeared.
The response of Spirulina (Arthrospira) platensis to high salt stress was investigated by incubating the cells in light of moderate intensity in the presence of 0.8 M NaCl. NaCl caused a decrease in photosystem II (PSII) mediated oxygen evolution activity and increase in photosystem I (PSI) activity and the amount of P700. Similarly maximal efficiency of PSII (Fv/Fm) and variable fluorescence (Fv/Fo) were also declined in salt-stressed cells. Western blot analysis reveal that the inhibition in PSII activity is due to a 40% loss of a thylakoid membrane protein, known as D1, which is located in PSII reaction center. NaCl treatment of cells also resulted in the alterations of other thylakoid membrane proteins: most prominently, a dramatic diminishment of the 47-kDa chlorophyll protein (CP) and 94-kDa protein, and accumulation of a 17-kDa protein band were observed in SDS-PAGE. The changes in 47-kDa and 94-kDa proteins lead to the decreased energy transfer from light harvesting antenna to PSII, which was accompanied by alterations in the chlorophyll fluorescence emission spectra of whole cells and isolated thylakoids. Therefore we conclude that salt stress has various effects on photosynthetic electron transport activities due to the marked alterations in the composition of thylakoid membrane proteins.
For searching the photosynthetic electron transport(PET) inhibitors, bio-rational screening system using thylakoid membranes extracted from wild and mutant cyanobacteria(Anacystis nidulans $R_2$) was developed. Generally, thylakoid membrane was more sensitive to the tested herbicides than the chloroplast from spinach in the Hill reaction. Higher resistant characteristics appeared in mutant D-5, Di-22 to diuron and mutant G-264 to atrazine as compared to wild type. To test the reaction of thylakoid membrane to herbicides, diuron and atrazine were applied simultaneously. Diuron and atrazine competed each other for binding with substituted amino acids, while diuron and dinoseb were non-competitive, and inhibiting activity was increased. Conclusively, bio-rational screening system using cyanobacteria was proved to be fast and efficient screening method for the development of PET inhibitors.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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