• 한국식품과학회지
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• 제20권2호
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• pp.245-251
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• 1988

Thermolysin 을 Dowex MWA-1에 10% glutaraldehyde로 고정화하였으며, 이 고정화 thermolysin을 사용하여 연속적응유(連續的凝乳)를 행(行)하였다. Thermolysin의 고정화수율(固定化收率)은 25%이었다. 고정화 thermolysin은 1/200M $Ca^{++}\;ion$의 존재하에서 $60^{\circ}C$의 고온에서도 안정하였으며 이 온도에서의 half-life는 16일이었다. 원료 milk를 pH 7.0이 되도록 조정하여 $55^{\circ}C$로 유지된 고정화 thermolysin column을 통과 시 켜 분해시킨 후, Streptococcus cremoris를 접종하여 응유(凝乳)시켜 curd를 얻었으며, 이렇게 하므로써 미생물오염이 방지될 수 있었으며 연속적응유를 효과적으로 행할 수 있었다. 고정화 thermolysin을 사용하여 얻은 cheddar type의 cheese는 rennet을 사용한 전통적인 방법으로 만든 cheese 와 거의 비슷하였다.

• 한국식품과학회지
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• 제27권5호
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• pp.753-756
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• 1995

아스파탐 전구체의 보다 효율적인 효소적 합성 방법을 개발하기 위하여 thermolysin의 고정화 방법을 확립하고자 고정화 담체로서 다공성 수지인 Amberlite XAD-7을, 가교화제로서 glutaraldehyde를 사용하여 최적 고정화 조건을 조사하고자 하였다. Thermolysin이 Amberlite XAD-7에 흡착되는 속도는 초기에 빠른 것으로 나타났으며, $5^{\circ}C$에서 24시간후는 96%가 흡착되었다. Thermolysin에 대한 Amberlite XAD-7의 최대흡착량은 수지 l당 340g 이상이었으며, 투입한 thermolysin 양이 300g일 때까지는 흡착된 양의 증가하는 관계는 직선관계를 보여주었다. thermolysin의 가교화를 위한 효과적인 pH와 glutaraldehyde의 농도, 가교화시간은 각각 $pH\;6.0{\sim}7.0,\;6{\sim}12.5%$ 및 $3{\sim}7$시간이었다. 특히 glutaraldehyde 6%에서는 7시간, 12.5%에서 3시간의 가교화가 효소의 잔존역가와 가교화 정도를 현저히 높였다. 이때의 잔존역가는 30% 이상인 것으로 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권6호
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• pp.704-706
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• 1992

A model peptide, N-carbobenzoxy-L-phenylalanyl-L-phenylalanine methyl ester, was synthersized with free and immobilized thermolysin in a microaqueous system. The model peptide was formed mostly during the initial phase of the reaction. The yields of the compound with free and immobilized thermolysin after 4hr of reaction were 77.8 and 71.2, respectively.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1977년도 추계학술발표회 및 특별 강연초록
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• pp.197.5-198
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• 1977

일반적으로 protease는 고정화되면 저분자 기질에 대하여는 높은 활성을 내 주나 고분자 기질에 대하여는 낮은 활성을 나타내 줄다. 이것은 고정화된 Pretense의 구조적인 영향으로 생각된다. 본 실험에서 polysaccharide의 표면에 ac교lamide 및 N-hydroxysuccinmidyl acrylate (NHSA)을 graft 공중합 시킴으로서 긴축쇄에 활성 ester을 가지는 새로운 carrier을 합성하여 Bacillus thermoproteolyticus가 생산하는 중성 pretense인 thermolysin을 고정화시켰으며 아울러 고정화된 thermolysin의 몇가지 효소적 성질을 조사검토 하였다.(중략)

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제13권1호
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• pp.84-87
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• 2010

A peptide that inhibits HIV-1 protease was isolated from a hydrolysate of oyster (Crassostrea gigas) proteins digested with thermolysin. The peptide was using membrane filtration, gel permeation chromatography, ion exchange chromatography, and reverse-phase high performance liquid chromatography. Amino acid sequence of the peptide was determined to be Val-Phe-Glu-Leu. Chemically synthesized Val-Phe-Glu-Leu showed an $IC_{50}$ value of 106 ${\mu}M$.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제20권7호
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• pp.777-780
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• 1999

N-Chloroacetyl-N-hydroxy- β-Phe-NHMe and N-chloroacetyl-N-hydroxy-α-Phe-OMe were designed, synthe-sized and evaluated as irreversible inhibitors of thermolysin, a representative zinc protease. Analysis of kinetic data of the enzymic activity of thermolysin in the presence of these inhibitors revealed that they are indeed potent inactivators of thermolysin having the k(inact)/K(I ) values of 3.06 and 0.05 M (-1) s(-1) , respectively. We have established that the inhibitory activity of N-chloroacetyl-N-hydroxy-β-Phe-NHMe stems mainly from the (R)-enantiomer that belongs to the "L" series. The (R)-enantiomer is also responsible for the inactivation in the case of N-chloroacetyl-N-hydroxy-α-Phe-OMe, but this enantiomer belongs to the "D"-series.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권1호
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• pp.61-67
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• 1992

유기용매 이상계에서의 thermolysin을 사용하여 아스파탐 전구체 합성시 pH, 온도, 기질농도, 그리고 유기용매상에 대한 수용액상의 부비피 ($\alpha$)등의 변화에 따른 기질의 분해 반응, 효소의 안정성, 그리고 Z-APM 합성에 미치는 복합적인 영향을 조사함으로써 반응조건의 최적화를 도모하였다. 유기용매 이상계에서의 L-PM.HCL의 자연분해는 수용액에서보다 훨씬 느리게 일어나며, 또한 $\alpha$가 증가할 수록 분해속도가 감소하는 것을 알 수 있었다.

• 한국수산과학회지
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• 제35권5호
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• pp.529-533
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• 2002

바지락 단백질의 thermolysin 가수분해물로부터 분자량 한계범위가 10,000 da인 한외여과막을 통과한 저분자량의 물질을 Sephadex LH-20 column을 이용한 겔 크로마토그래피에서 ACE에 대하여 저해 활성을 가지는 3개의 획분을 분취하여 SP-Toyopearl 650S column과 SuperQ-Toyopearl 650S column을 이용한 이온 교환 크로마토그래피에 의하여 4개의 활성 획분을 얻었다. 이 중 가장 높은 절해 활성을 나타내는 획분의 아미노산 조성은 alanine, leucine, isoleucine 및 threonine의 함량이 많았고, 활성 발현에 있어 C 말단 아미노산 잔기로서 중요한 역할을 하는 proline의 함량도 $3.7\%$%인 것으로 나타났다. ACE 저해 활성은 $IC_{50}$ 값이 0.748 $\mu$g이었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권8호
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• pp.1281-1290
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• 2015

Thermolysin and its homologs are a group of metalloproteases that have been widely used in both therapeutic and biotechnological applications. We here report the identification and characterization of a novel thermolysin-like protease, BtsTLP1, from insect pathogen Bacillus thuringiensis serovar Sichuansis strain MC28. BtsTLP1 is extracellularly produced in Bacillus subtilis, and the active protein was purified via successive chromatographic steps. The mature form of BtsTLP1 has a molecule mass of 35.6 kDa as determined by mass spectrometry analyses. The biochemical characterization indicates that BtsTLP1 has an apparent K_m value of 1.57 mg/ml for azocasein and is active between 20℃ and 80℃. Unlike other reported neutral gram-positive thermolysin homologs with optimal pH around 7, BtsTLP1 exhibits an alkaline pH optimum around 10. The activity of BtsTLP1 is strongly inhibited by EDTA and a group of specific divalent ions, with Zn²⁺ and Cu²⁺ showing particular effects in promoting the enzyme autolysis. Furthermore, our data also indicate that BtsTLP1 has potential in cleaning applications.

• 한국식품과학회지
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• 제24권5호
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• pp.504-510
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• 1992

고정화 thermolysin에 의한 아스파탐 전구체의 하나인 N-Benzoylaspertame(BzAPM)의 합성을 효율적으로 할 수 있는 수용성 유기용매가 함유된 용매계를 산정하고자 하였다. BzAPM 및 L-phenylalanine(Phe)의 용해도는 methanol 45%가 함유된 용매계에서 각각 1.84 및 1.79%로 가장 높았으며, dimethyl sulfoxlilde(DMSO) 25%와 polyethylene glycol(PEG) 200 20%가 함유된 혼합 용매계도 비교적 높은 용해도를 보였다. BzAPM의 용해도는 ethylene glycol류의 분자량이 커질수록 용해도가 증가하였으나, Phe의 경우에는 이러한 경향을 나타내지 않았다. 고정화 thermolysin에 의한 BzAPM의 합성역가는 methanol 45% 및 DMSO 45%의 난일 유기용매계와 DMSO 25% 및 PEG 200 20%가 함유된 혼합 용매계에서 높게 나타났으며, 초기 합성속도도 빠른 것으로 나타났다. $40^{\circ}C$에서 42일간 고정화 효소를 보관하였을 때, thermolysin은 DMSO 25%와 PEG 200 20%가 함유된 용매계에서 가장 안정하였다. L-phenyalanine methyl ester의 비효소적 가수분해 속도는 methanol함유 용매계에서 가장 낮았고, DMSO 25%와 PEG 200이 함유된 용매계에서는 이들의 중간 정도인 것으로 확인되었다. 그리하여 고정화 thermolysin에 의한 BzAPM의 합성에 적합한 용매계로서 DMSO 25% 및 PEG 200 20%가 함유된 용매계를 선정하였다.