• 한국식품위생안전성학회지
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• 제31권6호
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• pp.445-450
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• 2016

본 연구에서는 돈지육 및 돈육 조직 내에 열안정성 수용성 단백질의 존재 여부를 확인하고 항체 생산에 있어 항원으로의 사용 가능 여부를 확인하고자 하였다. 이를 위해 돈지육 및 돈육을 생(raw) 시료와 조리된(cooked) 시료로 구분하여 비열처리 및 열처리법으로 단백질을 추출한 후 단백질 존재여부를 단백질 정량과 SDS-PAGE로 확인하였다. 그 결과 돈지육과 돈육 모두 생 시료를 비열처리법으로 추출한 시료의 경우 25~100 kDa 사이의 다양한 단백질이 확인된 반면 시료를 가열하거나 추출 시 열처리를 한 경우 돈지육에는 100 kDa 이상의 단백질과 30 kDa 및 15 kDa 이하의 일부 단백질이, 돈육에는 100 kDa 이상과 30 kDa 이하의 단백질이 확인되어 돈지육과 돈육에 열안정성 수용성 단백질이 존재하는 것으로 확인되었다. 이들 열안정성 수용성 단백질을 마우스에 면역 후 항혈청 역가를 측정한 결과 면역한 모든 마우스에서 높은 역가를 나타내었고, 생산된 혈청은 돈지육과 돈육에 각각 특이적인 반응성을 보인 반면 다른 축육과 지방육에 대해서는 반응성이 상대적으로 낮았다. 이러한 연구결과를 볼 때 돈지육 및 돈육에 존재하는 열안정성 수용성 단백질이 돈지육과 돈육에 특이적으로 반응하는 항체를 개발하는데 유용한 마커로서 활용이 가능하며, 열안정성 수용성 단백질에 대한 항체개발은 열처리된 축육 가공품 중 돈지육 및 돈육의 분석에도 매우 유용하게 활용할 수 있을 것으로 판단된다.

• 한국축산식품학회지
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• 제43권6호
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• pp.989-1001
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• 2023

Processed foods containing pork fat tissue to improve flavor and gain economic benefit may cause severe issues for Muslims, Jews, and vegetarians. This study aimed to develop an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA) based on a monoclonal antibody specific to thermal stable-soluble protein in pork fat tissue and apply it to detect pork fat tissue in heat-processed (autoclave, steam, roast, and fry) beef meatballs. To develop a sensitive iELISA, the optimal sample pre-cooking time, coating conditions, primary and secondary dilution time, and various buffer systems were tested. The change in the iELISA sensitivity with different 96-well microtiter microplates was confirmed. The detection limit of iELISA performed with an appropriate microplate was 0.015% (w/w) pork fat in raw and heat-treated beef. No cross-reactions to other meats or fats were shown. These results mean that the iELISA can be used as an analytical method to detect trace amounts of pork fat mixed in beef.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제32권1호
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• pp.75-81
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• 2017

본 연구에서는 고등어 어육을 고감도로 보다 신속하게 검출하기 위하여 고등어 어육 중 TSSP를 이용해 단클론성 항체를 개발하고 이를 이용하여 간접 효소면역분석법(iELISA)과 western blot의 검출한계를 확인하였다. 먼저 비 열처리와 열처리를 한 고등어 어육 중 존재하는 TSSP를 확인하고, 단백질 추출에 주로 사용되는 버퍼의 종류에 따른 추출법 효율을 확인하기 위하여 전기영동과 단백질 정량을 실시하였다. 그 결과 열처리한 추출물은 비 열처리한 추출물보다 TSSP가 2배 정도 많이 추출되었으며, TSSP로 추측되는 37 kDa 부근에 형성된 밴드의 선명함과 굵기를 육안으로 비교한 결과 carbonate buffer로 추출하였을 때 밴드가 가장 두드러지게 형성되었고, 단백질 정량 결과에서도 carbonate buffer를 이용한 추출물의 단백질 농도가 가장 높은 것을 확인하였다. 이후, 생 고등어 어육을 열처리법으로 추출하여 항원을 준비하고 6주령 BALB/c mouse에 면역한 후 세포융합 및 클로닝을 통해 3A5-1번, 2번, 9번 및 16번 4종의 hybridoma cell을 확보하였다. 이렇게 개발된 항체는 수산물, 축산물, 농산물과의 교차반응성확인을 통하여 고등어 단백질에만 특이성을 가지는 것을 확인하였다. iELISA와 western blot법의 검출한계를 확인한 결과 고등어가 1% 첨가된 수준까지 검출할 수 있으며, 특히 3A5-2와 3A5-9번 항체는 1%에서도 높은 흡광도를 나타내어 민감도가 매우 높은 항체로 확인되었다. 따라서, 개발된 고등어 TSSP 특이항체를 이용한 iELISA법과 western blot법은 가공품에 혼입될 수 있는 식품 알레르겐인 고등어를 보다 신속하고 민감하게 분석할 수 있는 분석 도구로서 활용이 가능할 것으로 판단되며, 개발된 항체는 고감도 바이오센서 개발에 충분히 활용이 가능한 바이오인자로 확인되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제33권9호
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• pp.1170-1178
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• 2023

Food allergy represents a severe problem for many societies, including sensitive populations, academies, health authorities, and the food industry. Peanut allergy occupies a special place in the food allergy spectrum. To prevent consumption by consumers suffering from a peanut allergy, a rapid and sensitive detection method is essential to identify unintended peanut adulteration in processed foods. In this study, we produced four monoclonal antibodies (MAbs; RO 3A1-12, PB 4C12-10, PB 5F9-23, and PB 6G4-30) specific to thermo-stable and soluble proteins (TSSPs) of peanut and developed an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on the MAbs. Among them, PB 5F9-23 MAb was firmly bound to Ara h 1, and other MAbs strongly reacted to Ara h 3 in the Western blot analysis. An antibody cocktail solution of the MAbs was used to enhance the sensitivity of an indirect ELISA, and the limit of detection of the indirect ELISA based on the antibody cocktail solution was 1 ng/ml and improved compared to the indirect ELISA based on the single MAb (11 ng/ml). The cross-reaction analysis revealed the high specificity of developed MAbs to peanut TSSPs without cross-reaction to other food allergens, including nuts. Subsequently, analyzing processed foods by indirect ELISA, all foods labeled as containing peanuts in the product description were confirmed to be positive. The results indicate that the developed antibodies exhibit high specificity and sensitivity to peanuts and can be used as bio-receptors in immunoassays or biosensors to detect intentional or unintentional adulteration of peanuts in processed foods, particularly heat-processed foods.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제33권3호
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• pp.185-192
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• 2018

본 연구에서는 수산가공품 중 고등어 어육을 신속하게 검출하기 위하여 고등어 어육 중 열 안정-수용성 단백질에 특이한 단클론성 항체(3A5-2)를 이용하여 indirect ELISA 법을 개발하였다. Indirect ELISA을 개발하기에 앞서 먼저 시료 전처리는 이전 연구의 결과를 바탕으로 진행되었다. 이전 연구에서는 3A5-2 항체가 37 kDa 부근의 열 안정-수용성 단백질과 반응하였고, 0.05 M carbonate buffer로 추출하였을 때 흡광도가 가장 두드러지게 증가한 것을 확인하였다. 따라서 indirect ELISA의 시료 전처리는 0.05 M carbonate buffer를 이용한 열처리 추출법으로 추출한 후 0.05 M PBS로 희석하는 것으로 확립하였고, indirect ELISA 법을 최적화하였다. 개발된 indirect ELISA법에 실험실에서 임의로 열처리한 고등어 샘플을 적용한 결과 indirect ELISA법은 0.001% (0% 흡광도 표준편차 양의 값: $0.0003{\times}3$)의 검출한계를 확인하였으며, 꽁치 중 고등어는 0.002%(0% 흡광도 표준편차 양의 값: $0.0006{\times}3$)까지 검출이 가능하였다. 또한 조리($100^{\circ}C$, 30분)와 멸균($121^{\circ}C$, 30분) 처리된 고등어의 검출이 가능한 것으로 확인되었고, 멸균된 제품에서도 고등어에 특이적으로 반응하여 고등어의 혼입여부 판별도 가능한 것으로 판단되었다. 시판되는 고등어 가공품에 대해서는 양성결과를 나타내었고 다른 수산물에서는 음성으로 판단되어 개발된 분석법은 가공품에 혼입될 수 있는 알레르겐인 고등어를 보다 신속하고 민감하게 분석할 수 있고, 점차 가격이 증가하고 있는 고등어의 혼입여부를 확인할 수 있는 분석 도구로서 활용이 가능할 것으로 판단된다.