Objectives: This study was carried out to evaluate the effects of embryonic stage, cryoprotectant, and freezing-thawing method on the rates of survival and development of the cryopreserved mouse early embryo and finally to establish the cryopreservation method of surplus embryos obtained during assisted reproductive technology (ART). Materials and Methods: Two to eight cell embryos were obtained from oviducts of mated $F_1$ hybrid female mice superovulated by pregnant mare's serum gonadotropin (PMSG) and human chorionic gonadotropin (hCG). Two-step 1,2-propanediol (PROH), dimethylsulfoxide (DMSO) and 4-step PROH DMSO were used as cryoprotectant and dehydration and rehydration method of embryos, and slow-cooling or rapid-cooling method was used as frozen program. The survival rates of embryos were measured after thawing and rehydration, and the developmental rates of embryos were compared and observed during culturing embryos for 24, 48, 72, 96 hrs. Results: As for the survival and development rates of embryos according to embryonic stage, the survival rate of 2 cell stage in PROH and DMSO was significantly higher than 4-8 cell (64.5% versus 62.1 %,79.7% versus 73.2%) (p<0.01, p<0.01), but the development rates of 4-8 cell embryos in PROH and DMSO were significantly higher than 2 cell embryos for whole culture period (p<0.01) and the development rates of 4-8 cell embryos in PROH were significantly higher than 2 cell embryos in DMSO (p<0.01). As for the survival and development rates of embryos according to cryoprotectant, the survival rate of 2 cell embryo in DMSO was significantly higher than that in PROH (74.4% versus 64.5%) (p<0.01), whereas the development rate of embryos was not differ till 24 hrs. The developmen1 rate from morular to hatching blastocyst, however, was significantly higher in PROH than in DMSO during 48 hr (p<0.01). The survival rate of 4-8 cell embryo was 62.1% in PROH and 73.2% in DMSO. The development rates of embryo in PROH were significantly higher for whole culture periods (p<0.01, 0.05). In respect to the effect of freezing and thawing program on the survival and development rates of embryos, method of slow cooling and rapid thawing was more effective than that of rapid cooling and rapid thawing. Conclusions: The survival rate of embryo in 2 cell stage was higher than in 4-8 cell stage, and PROH appears more effective cryoprotectant than DMSO because PROH showed better development rates of embryos in 2 and 4-8 cell stage. Moreover, slow cooling and rapid thawing method was considered as the best cryopreservation program.
본 연구는 생선회 맛의 관능적 품질향상 및 생선회로서의 품질수명을 연장시키기 위하여 우리나라에서 고급횟감으로 널리 소비되고 있는 넙치를 시료로 하여 동결속도 및 해동방법에 따른 근육의 물리화학적 및 조직학적 변화를 살펴보았다. 1. 넙치를 chunk 형태로 급속동격 (액체질소동결) 및 완만동결 ($-15^{\circ}C$ 동결하였을때 최대 빙결정생성대의 통과시간은 각각 10분이내와 110분이었다. 해동방법에 다른 해동소요시간은 $25^{\circ}C$ 수도수. $15^{\circ}C$ 수도수 $10^{\circ}C$ 수도수. $25^{\circ}C$ 공기. $5^{\circ}C$ 수도수. $0^{\circ}C$ 수도수 순으로 짧았다. 2. 근육의 파괴강도는 급속동결하여 급속해동한 것이 완만동결하여 완만해동한 것에 비하여 높았으며. 조리형태에 따른 파괴강도는 급속동결한 것은 조리형태에 따라 큰 차이를 나타내지 않았으나, 완만동결한 것은 slice형태로 처리한 것이 높은 값을 나타내었다. 4. ATP의 잔존량은 동결속도에 큰 영향을 받지 않았으며, 급속해동한 것이 완만해동한 것에 비하여 높은 경향을 나타내었다. 그리고 IMP가 동결-해동후의 ATP관련화합물의 대부분을 차지하고 있었다. 5. 근육의 표본조직을 광학현미경 (LM)으로 관찰한 결과 즉살직후에는 근섬유간의 간격이 관찰되지 않았으며. 급속동결하여 해동방법을 달리한 근육에 있어서도 근섬유간의 간격이 거의 관찰되지 않았다. 그러나 완만동결하여 해동한 것은 근섬유간의 간격이 현저하게 관찰되었다.
PRA 검사는 치료 가능한 고혈압 질환 중 하나인 일차성 알도스테론증의 선별 진단에 이용되는 검사 중 하나이다. 혈장의 레닌은 체외에서 변형이 쉬운 물질이며 온도 변화에 민감한 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 검체의 보관온도와 해동온도에 차이를 두어 각각의 결과 차이를 비교 분석하고, PRA 검사의 정확한 결과 보고를 위한 치침의 마련과 재현성을 높일 수 있는 방안을 마련하고자 하였다. 본원에 의뢰된 PRA 검체 43건에 대하여 냉동보관 혈장 분리 자검체와 냉장보관 EDTA tube의 혈장을 재검사 실시하였다. 본검사를 기준으로 회귀분석과 bland-altman plot, 백분율을 비교하여 결과를 분석하였다. 또한, 해동온도에 따른 결과 비교를 위하여 PRA 검체 13건에 대하여 각각 실온해동과 냉장해동을 실시하였다. 실험을 마친 뒤, 다시 얼리고 2차 실온해동과 냉장해동을 실시하여 본검사를 기준으로 결과를 회귀분석하였다. 혈장 분리된 자검체 재검사를 시행한 결과는 y = 1.2048x + 1.046(R=0.8501, n=43)이며, 냉장보관 EDTA tube의 혈장으로 재검사한 결과는 y = 1.0594x + 0.1365 (R=0.9966, n=41)였다. Bland-altman plot에서 본실험과 차이에 대한 평균이 EDTA tube 혈장 재검사한 결과가 0.24, 냉동보관 자검체 재검사한 결과가 1.4로 냉장 보관 EDTA tube의 혈장이 높은 상관관계를 나타내었다. 해동온도에 차이를 두고 비교실험 한 결과, 1차 실온해동한 결과보다 2차 실온해동한 결과의 평균 백분율이 증가한 것으로 나타났다. 동일하게, 1차 냉장해동 결과보다 2차 냉장해동 결과의 평균 백분율이 증가하였다. 본 연구를 통해 PRA 검체의 보관 방법과 해동 온도에 따른 결과변화를 비교 분석한 결과, 냉장 보관된 원검체 EDTA tube 혈장의 재검사 결과가 더 높은 상관관계를 나타내었다. 또한, 해동 시 온도에 상관없이 혈장분리 자검체의 반복적인 얼림과 녹임이 PRA 결과에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 따라서 PRA의 재검사 시에는 냉장 보관 중인 원검체 EDTA tube에서 혈장을 다시 채취하여 검사하는 것이 검사 결과의 오차를 줄이고 재현성을 높일 수 있을 것으로 사료된다.
The objective of this experiment was to study some possibilities to simplify freezing, thawing and transfer procedure of one-step straw method comparing with the conventional methods using bovine embryos. The previous work are also designed to investigate the thawing effect by development stage and its quality using the embryos. Results obtained were summarized as follows: 1. A total of 87 embryos from 14 donor cows were frozen-thawed and an average of frozen embryo/donor was 6.2. 2. The survival rates of morula stage(65.4%) were higher than those of blastocyst stage(57.l%) and vice versa in rate of morphological recovery (80% vs 95.4%). However. no significant difference was denoted between them. 3. In difference between the groups of good quality and poor quality. good quality was resulted in a significantly higher embryo survival rate(75%) and recovery rates(95%) than poor quality(P<0.0l). 4. In effects of non-permeable sugar dilution in added to l.0M glycerol. higher survival rates were orderd in sucrose. lactose, raffinose and xylose. But lactose-raffinose, sucrose-trehalose and xylose in added to 2.OM glycerol. 5. The highest survival rates were obtained by direct plunge into the liquid nitrogen with 3.OM concentration both of glycerol and trehalose. 6. The survival rates in vitro condition of one-step and direct plunge methods(75%-87.5%) were significantly higher than those of multiple steps (21.4-52.6%) in in vitro (P<0.0l). However, the results of single-step were critical in comparing to other steps of final pregnant conformation.
원형 구조물의 보수/보강 및 FRP를 구조부재로 활용한 신설 구조물 시공을 위해서는 일정한 곡률반경을 갖는 곡면 FRP 부재가 요구된다. 그러나 현재까지 FRP 곡면부재는 수작업 (hand-lay-up) 또는 필라멘트 와인딩 (filament winding) 작업에 의해서만 생산이 가능하였으며, 대량 연속생산에는 한계가 있다. 또한 일반적으로 인발성형법 (pultrusion method)으로 생산된 FRP 부재가 상대적으로 물리적 특성이 우수한 것으로 알려져 있다. 따라서 FRP 부재를 일정곡률을 유지하며 인발로 뽑아낼 수 있는 신개념의 곡면 FRP 부재 인발성형법 제안 및 성형장비를 개발, 곡면 FRP 제품을 생산하였으며, 본 연구에서는 곡면 FRP 부재를 이용한 구조물 보수/보강시 야기될 수 있는 FRP와 콘크리트 부착면의 동결융해 영향을 분석하였다.
Le, Minh Tam;Nguyen, Thai Thanh Thi;Nguyen, Tung Thanh;Nguyen, Trung Van;Nguyen, Tam An Thi;Nguyen, Quoc Huy Vu;Cao, Thanh Ngoc
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제46권2호
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pp.67-75
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2019
Objective: Sperm cryopreservation has been widely used in assisted reproductive technology, as it offers great potential for the treatment of some types of male infertility. However, cryopreservation may result in changes in membrane lipid composition and acrosome status, as well as reductions in sperm motility and viability. This study aimed to evaluate sperm DNA fragmentation damage caused by conventional freezing using the sperm chromatin dispersion test. Methods: In total, 120 fresh human semen samples were frozen by conventional methods, using SpermFreeze Solution as a cryoprotectant. Routine semen analysis and a Halosperm test (using the Halosperm kit) were performed on each sample before freezing and after thawing. Semen parameters and sperm DNA fragmentation were compared between these groups. Results: There was a significant decrease in sperm progressive motility, viability, and normal morphology after conventional freezing (32.78%, 79.58%, and 3.87% vs. 16%, 55.99%, and 2.55%, respectively). The sperm head, midpiece, and tail defect rate increased slightly after freezing. Furthermore, the DNA fragmentation index (DFI) was significantly higher after thawing than before freezing (19.21% prior to freezing vs. 22.23% after thawing). Significant increases in the DFI after cryopreservation were observed in samples with both normal and abnormal motility and morphology, as well as in those with normal viability. Conclusion: Conventional freezing seems to damage some sperm parameters, in particular causing a reduction in sperm DNA integrity.
Solubilization pretreatments were conducted to enhance the anaerobic digestion of the waste activated sludge. Four pretreatment techniques including heating, sonication freezing and thawing, and enzyme addition were employed to solubilize the waste activated sludge under various conditions. Thermal pretreatment by heating showed the highest efficiency compared with other methods, and freezing and thawing was confirmed as a feasible alternative of solubilization as well as the pretreatment of dewatering. There is a clear correlation between the solubilization efficiency of the waste activated sludge and the gas production. Batch digestion results showed the cumulative gas production as much as four times after thermal pretreatment as compared with that by the control sludge without pretreatment. As a result, hydrolysis or solubilization pretreatment might play a significant role in the high rate digestion of the waste activated sludge.
This experiment was carried out to investigate effects of DMSO or ethylene glycol as a cryopotectant and of freezing methods on survival rate of forozen-thawed rat 2-cell embryos by morphological observation. 2-cell embryos were recovered from oviducts of Sprague Dawley females mated with males of same strain on day 2 of pregnancy after inducing superovulation by intrapertioneal injection of PMSG and HCG. In slow freezing and thawing groups, embryos were frozen to -79$^{\circ}C$ or -196$^{\circ}C$ in a glass test tube containing 0.2ml PBI with 1.5M DMSO or 1.2M ethylene glycol at a rate of 0.3-1.0C/min. and thawed slowly. When samples were frozen to -79$^{\circ}C$, higher survival rate was obtained in the medium containing DMSO (43.9%) than ethylene glycol (41%). And similar result was obtained (32.5% in DMSO vs. 31.4% in ethylene glycol) when samples were frozen. In rapid freezing and thawing groups, embryos were frozen to -79 or -196$^{\circ}C$ in a glass test tube containing 0.2ml of PBI with 1.5M DMSO or 1.2M ethylene glycol by rapid cooling, and thawed rapidly. When samples were frozen to -79$^{\circ}C$, 1.5M DMSO (13.2%) was more effective than 1.2M ethylene glycol (6.1%). When the storage temperature was -196$^{\circ}C$, survival rates were 9.8% in 1.5M and 5.4% in 1.2M ethylene glycol.
적설한랭지의 경우, 동절기의 동해 및 적설에 의한 교통통행의 원활을 기하기 위하여 제설제를 사용한다. 이와 같은 제설염의 사용은 동결융해 및 염화물에 의해 콘크리트의 급속한 스케일링 피해를 야기시킨다. 이에 대한 피해로 인하여 콘크리트 포장은 콘크리트의 피복두께 감소에 따른 조기 열화 및 사용자의 안정성 등 여러 가지 문제를 발생시킨다. 이에 따라 국외적으로 이와 같은 현상에 대하여 평가를 하기 위해 다양한 시험 및 평가 방법이 제시되고 있다. 하지만 국내에서는 아직 평가방법에 대한 규정은 없으며, 관련 연구 또한 미미한 수준이다. 따라서 본 논문에서는 각 기관 및 나라에서 제시되고 있는 평가방법을 조사하고, 각각의 규정에 따라 실험을 수행하여 결과를 도출하여 비교 분석하였다. 나아가 이와 같은 실험방법과 실험결과의 고찰을 통하여 국내현장에 맞는 실험법을 제안하고자 한다.
한국산 가금육(육계, 재래닭, 오골계 및 꿩의 다리살과 가슴살)을 냉동후 $5^{\circ}C$, $20^{\circ}C$ 및 microwave로 해동하고, 해동방법에 따른 품질변화를 검토하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 해동 후 pH는 각 해동조건에서 냉동 전보다 모두 낮아졌으며 microwave 해동시의 pH 변화가 제일 적었고, 가슴살이 다리살 보다 큰 pH의 변화를 보였다. 또한 가금육의 품종별 비교에 있어서 pH의 저하는 오골계의 경우 가장 컸으며, 꿩에서 가장 적었다. 2. 해동후의 육즙 발생율은 microwave 해동시 가장 적었으며 부위별로는 다리살이 9~11%, 가슴살이 11~14%로 다리살의 경우 다소 낮아 보수력은 좋게 나타났다. 또한 품종별로는 육계 및 꿩에서의 육즙 발생율이 적었고 오골계에서 가장 많았다. 3. pH와 보수력은 1차함수의 관계로 pH가 낮아짐에 따라 육즙발생이 많이 생겨 보수력이 떨어지는 경향을 보였다. 이때 r값은 -0.82~-0.91의 값을 나타내었다. 4. 모든 가금육에 있어서 가슴살보다 다리살의 전단력이 컸으며, microwave 해동과 $5^{\circ}C$ 해동에 있어서는 비슷한 경향을 보였으며, $20^{\circ}C$ 해동에 있어서는 전단력의 큰 변화를 보여주었다. 5. 전단력과 pH는 1차 함수의 관계로 pH가 내려감에 따라 전단력이 저하하는 경향을 보였으며 이때 r값은 0.80~0.96의 값을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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