The objectives of this research are to establish the criteria of peel occurrence considering the shape of bond terminus and to compare the strength properties of some adhesive joints. The criteria of feel occurrence at the bond terminus was suggested. Peel loads of some adhesive joint(butt joint, T -shape specimen, single lap joint) were determined from tensile tests. Principal stress distributions of these joints were determined from finite element method analysis. Then, peel occurrence was estimated with intensity of stress singularity ' $K_{prin.}$' when the terminus shape was square, with average principal stress when the terminus shape was rounded. The conclusions are summarized as follows; (1) In the non-filleted model(e.g., butt joint, T-shape specimen), principal stress shows singularity at the bond terminus, intensity of stress(principal stress) singularity ' $K_{prin.}$&apso; can use as the criteria of peel occurrence at the bond terminus. (2) In the filleted model(e.g., single lap joint), principal stress doesn't show singularity at the bond terminus. Average principal stress can use as the criteria of peel occurrence at the bond terminus.'t show singularity at the bond terminus. Average principal stress can use as the criteria of peel occurrence at the bond terminus.
The objects of this research are to establish the criteria of peel occurrence considering the shape of bond terminus and to compare the strength properties of adhesive joint of different three type such as butt joint, T-shape, and single lap Joints. The criteria of peel occurrence at the bond terminus was suggested. Peel loads of three type adhesive joint (butt Joint, T-shape specimen, single lap joint) were determined from tensile tests. Principal stress distributions of these joints were determined from finite element method analysis. Then, peel occurrence was estimated with stress singularity factor$(K_{prin})$ when the terminus shape was square, with average principal stress when the terminus shape was rounded. The conclusions are summarized as follows; (1) In the non-filleted model(e.g., butt joint, T-shape specimen), principal stress shows singularity at the bond terminus, intensity of stress(principal stress) singularity $(K_{prin})$ can use as the criteria of peel occurrence at the bond terminus. (2) In the filleted model(e.g., single lap joint), principal stress has not affected singularity at the bond terminus. Average principal stress$(K_{av})$ can use as the criteria of peel occurrence at the bond terminus.
The (Na, K) ATPase is a membrane ion transporting ATPase composed of an ${\alpha}$ catalytic subunit and a ${\beta}$ glycoprotein subunit. The topology of the rat ${\alpha}$1 and ${\beta}$1 subunits has been studied by insertion of epitope(s) : at the NH2-terminus and COOH-terminus and between Glu117 and Glul18, Lys828 and Arg829, Gln900 and Trp901, and Va1939 and Phe940 of the ${\alpha}$ subunit; and at the NH2-terminus and COOH-terminus and between Glu228 and Tyr229 of the ${\beta}$ subunit. The epitope-tagged ${\alpha}$l, constructs were expressed in HeLa cells to select for stable cell lines expressing a functional (Na, K)ATPase. All constructs, except for the one tagged between Gln900 and Trp901, resulted in ouabain-resistant colonies indicating that modified proteins retained functional integrity. The epitope-tagged ${\beta}$ constructs were transiently expressed in Cos-7 cells. The orientation of the epitopes with respect to the cell membrane was revealed by indirect immunofluorescence performed on permeabilized and non-permeabilized cells expressing the (Na, K)ATPase chains. The results indicate that the ${\alpha}$ subunit has 4 transmembrane segments in the COOH terminal membrane bound domain between residues 760 and 938, and that both the NH2-terminus and the COOH-terminus are in the cytosol; it was not determined whether there are more transmembrane segments between residue 938 and the COOH-terminus. The ${\beta}$ subunit has only one transmembrane spanning region with the NH2-terminus in the cytosol and the COOH-terminus on the extracytoplasmic surface of the plasma membrane.
C-terminus specific immobilization often results in a increased structural stability resistant to various denaturation factors. In order to elucidate the immobilization effect on the c-terminus in molecular level, we made over 200 protein data set from Protein Data Bank(PDB), analyzed c-terminus structure of each protein, and investigated the structural relationship with the stabilizing factors such as hydrogen bond, ion pairs, cation pi, disulfide bond, solvation free energy, surface area, flexibility and so on.
Archivillin, a muscle-specific isoform of supervillin, is a component of the costameric cytoskeleton of muscle cells. The purpose of this study was to determine which protein in the skeletal muscle collaborates with archvillin C-terminus. For this purpose, a yeast two-hybrid screening of human skeletal muscle cDNA library was performed using the C-terminal region of archvillin as bait. This study shows that seven human skeletal muscle proteins, namely, nebulin, xeplin, archvillin, GAPDH, TOX4, PITRM1, and YME1L1 interact with archvillin C-terminus. Especially, xeplin is a newly discovered protein interacts with archvillin C-terminus. These results indicate that archvillin C-terminus acts as a bridge between nebulin and xeplin at costameres. Archvillin C-terminal region interacts with nebulin C-terminal region at Z-discs and interacts with xeplin at the vicinity of sarcolemma. I propose that these interactions may contribute to formation of costameric structure and muscle contraction.
Park, Eun-Ran;Kim, Hyun-Suk;Choi, Jun-Hyuk;Lee, Yeong-Mi;Choi, Jae-Kyoung;Joo, Young-Mi;Ahn, Seung-Ju;Min, Byung-In;Kim, Chong-Rak
대한의생명과학회지
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제13권4호
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pp.263-272
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2007
Nebulin is a giant actin binding protein (600-900 kDa) which is specific to skeletal muscle. This protein is known to regulate thin filaments length in sarcomere as a molecular template. The C-terminus of nebulin is located in the Z-disc of muscle sarcomere and is bound to other proteins such like myopalladin, titin, archvillin, and desmin. The N-terminus of nebulin binds to tropomodulin at the pointed ends of the thin filaments. In recent research, nebulin not only found in brain but also expressed in heart, stomach, and liver. So, the roles of nebulin in non-muscle tissue have been studied. However, lack of information or studies on nebulin binding proteins and nebulin function in brain are available so far. Therefore, the current study have investigated a novel binding partner of Nebulin C-terminus by using yeast two-hybrid screening with human brain cDNA library. Nebulin C-terminus, containing simple repeats, serine rich and SH3 domain, interacts with osteonectin C-terminal region. The specific interaction of nebulin and osteonectin were confirmed in vitro by using GST pull-down assay and reconfirmed in vivo by using transfected COS-7 cells with EGFP-tagged nebulin and DsRed-tagged osteonectin. Consequently, this study identified SH3 domain in nebulin C-terminus specifically binds to extracellular Ca-binding (EeC domain in osteonectin. Also, nebulin C-terminus fusion protein colocalized with osteonectin EC domain fusion protein in transfected COS-7 cells. The current study found the interaction between nebulin and osteonectin in human brain for the first time and suggested the nebulin in brain may be associated with osteonectin, as a regulator of cell cycle progression and mitosis.
Turnip yellow mosaic virus (TYMV) is a positive strand RNA virus. We have modified TYMV coat protein (CP) by inserting a c-Myc epitope peptide at the N- or C-terminus of the CP, and have examined its effect on assembly. We introduced the recombinant CP constructs into Nicotiana benthamiana leaves by agroinfiltration. Examination of the leaf extracts by agarose gel electrophoresis and Western blot analysis showed that the CP modified at the N-terminus produced a band co-migrating with wild-type virions. With C-terminal modification, however, the detected bands moved faster than the wild-type virions. To further examine the effect, TYMV constructs producing the modified CPs were prepared. With N-terminal modification, viral RNAs were protected from RNase A. In contrast, the viral RNAs were not protected with C-terminal modification. Overall, the results suggest that virion assembly and RNA packaging occur properly when the N-terminus of CP is modified, but not when the C-terminus is modified.
Bacillus licheniformis SK-1 naturally produces chitinase 72 (CHI72) with two truncation derivatives at the C-terminus, one with deletion of the chitin binding domain (ChBD), and the other with deletions of both fibronectin type III domain (FnIIID) and ChBD. We constructed deletions mutants of CHI72 with deletion of ChBD (CHI72${\Delta}$ChBD) and deletions of both FnIIID and ChBD (CHI72${\Delta}$FnIIID${\Delta}$ChBD), and studied their activity on soluble, amorphous and crystalline substrates. Interestingly, when equivalent amount of specific activity of each enzyme on soluble substrate was used, the product yield from CHI72-${\Delta}$ChBD and CHI72${\Delta}$FnIIID${\Delta}$ChBD on colloidal chitin was 2.5 and 1.6 fold higher than CHI72, respectively. In contrast, the product yield from CHI72${\Delta}$ChBD and CHI72${\Delta}$FnIIID-${\Delta}$ChBD on ${\beta}$-chitin reduced to 0.7 and 0.5 fold of CHI72, respectively. These results suggest that CHI72 can modulate its substrate specificities through truncations of the functional domains at the C-terminus, producing a mixture of enzymes with elevated efficiency of hydrolysis.
Lipoxygenase (LOX) is an industrial enzyme with wide applications in food and pharmaceutical industries. The available structure information indicates that eukaryotic LOXs consist of N terminus β-barrel and C terminus catalytic domains. However, the latest crystal structure of Pseudomonas aeruginosa LOX shows it is significantly different from those of eukaryotic LOXs, including the N-terminal helix domain. In this paper, the functions of this N-terminal helix domain in the soluble expression and catalysis of P. aeruginosa LOX were analyzed. Genetic truncation of this helix domain resulted in an insoluble P. aeruginosa LOX mutant. The active C-terminal domain was obtained by dispase digestion of the P. aeruginosa LOX derivative containing the genetically introduced dispase recognition sites. This functional C-terminal domain showed raised substrate affinity but reduced catalytic activity and thermostability. Crystal structure analyses demonstrate that the broken polar contacts connecting the two domains and the exposed hydrophobic substrate binding pocket may contribute to the insoluble expression of the C terminus domain and the changes in the enzyme properties. Our data suggest that the N terminus domain of P. aeruginosa LOX is required for its soluble expression in E. coli, which is different from that of the eukaryotic LOXs. Besides this, this N-terminal domain is not necessary for catalysis but shows positive effects on the enzyme properties. The results presented here provide new and valuable information on the functions of the N terminus helix domain of P. aeruginosa LOX and further improvement of its enzyme properties by molecular modification.
The purpose of this study is to get a more fundamental definition of the term Architecture and Geonchuk through analyzing the origin and reception of the terminus technicus Architektonike. In Latin world the greek term Architektonike was adopted and replaced the term Constructio by Vitruvius and has played a significant role in the history of architecture. In the late 19th Century however, the word Architecture was translated into Geonchuk(建築) and has been dominantly used in countries such as Korea, Japan, and China. But the difference of the denotation between them has not yet been fully evaluated. The term Geonchuk signifies much the same as the Tektonik and remains as such in the architectural discourse. In this context, this study goes back to refer to the philosophy of Metaphysics by Aristotle. In his book the term Architektonike was defined for the first time as terminus technicus, and the philosophies in later Ages of Leibniz or of Kant adopted it to signify the world view in accordance with the time. However, the original thought of the Architektonike disappeared in architectural practice and has been used in most cases as a substitute for Oikodomike which denotes house-building. The usage of this word in later time shows that it lost its foundation to be interpreted not only in terms of principium cognoscendi, but also in terms of principium reale. From this the literal usage of the term architecture and Geonchuk has seldom to do with its original meaning and denotation of Architektonike and also they lost the status of terminus technicus for the discourse of arche which encompasses the meaning of both principle and universal order.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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