• Applied Biological Chemistry
• /
• 제35권4호
• /
• pp.300-307
• /
• 1992

파인애플의 과육과 줄기로부터 fruit-bromelain을 정제도 18배와 수율 23%, stem-bromelain을 정제도 46배와 수율 23%로 각각 전기영동적으로 균일하게 정제하였다. 두 효소의 분자량을 Sephadex G-200에 의해 측정한 결과, fruit-와 stem-bromelain의 분자량은 32.5 KDa와 37 KDa이었으며, 이들은 공히 1개의 subunit로 구성된 효소단백질이었다. Fruit-bromelain은 pH 8.0과 $70^{\circ}C$, stem-bromelain은 pH 7.0과 $60^{\circ}C$ 에서 각각 최대 활성을 나타내었다. 동 식물 유래의 천연단백질을 중심으로 기질 특이성을 검토한 결과 동물성 단백질보다는 밀단백 또는 ISP와 같은 식물성 단백질에 높은 기질 특이성을 보였으며, casein에 대한 fruit와 stem-bromelain의 또 $K_m$값은 0.18 mM와 0.34 mM이었다. pCMB는 경쟁적 저해제로서 fruit와 stem-bromelain의 $K_i$값은 0.18 mM과 0.10 mM이었다. pCMB에 의해 저하된 두 효소의 활성은 cysteine에 의해 재활성화 되었으며 또한 과량의 cysteine 첨가에 의해 활성화됨으로써 이 효소들은 전형적인 thiol계 단백분해효소임을 알 수 있었다.

• The Korean Journal of Physiology
• /
• 제24권2호
• /
• pp.345-352
• /
• 1990

To determine the role of sulfhydryl group in transport of organic ions across the basolateral membrane of renal proximal tubules, effect of p-chloromercuribenzoic acid (PCMB) on the transport of tetraethylammonium (TEA) and p-aminohippurate (PAH) was studied in rabbit renal cortical slices. PCMB caused irreversible inhibition of TEA and PAH uptake in a dose-dependent manner, with $I_{50}$ value (concentration for 50% inhibition) of $30\;{\mu}M$ for TEA and $75\;{\mu}M$ for PAH. Kinetic analysis of TEA and PAH uptakes showed that PCMB decreased Vmax $(62.35\;vs.\;28.32\;n\;mole/g{\cdot}min\;fur\;TEA:\;385.24\;vs.\;170.36\;n\;mole/g{\cdot}min\;for\;PAH)$ without changing Km. The inhibitory action of PCMB on TEA and PAH uptakes was independent of pH of the pretreatment medium. The inhibitory effect of PCMB on the uptake of TEA or PAH was prevented by dithiothreitol, but not by the substrate. PCMB inhibited Na-K-ATPase activity in a dose-dependent manner with $I_{50}$ value of $50\;{\mu}M$, which is similar to those for TEA and PAH uptake. These results suggest that PCMB inhibits the transport of organic cations and anions in the renal basolateral membrane by directly affecting the SH-group in the transporter molecules or secondly by altering the Na-K-ATPase activity.

• The Korean Journal of Physiology
• /
• 제7권2호
• /
• pp.9-16
• /
• 1973

마우스 간조직(肝組織)을 수종(數種) 농도(濃度)의 GSH 용액중(溶液中)에서 각각(各各) 4 C, 25 C 및 37 C의 온도(溫度)속에서 incubate하고, 5분(分), 30분(分) 및 60분(分)에서 각각(各各) NP-SH 및 NP-SS의 양(量)을 정량(定量)하여 정상(正常) 및 대조군(對照群)의 그것들과 비교(比較)한 결과(結果) 다음의 결과(結果)를 얻었다. 1) 4 C에서 incubate한 군(群)에서는 대조군(對照群) 및 GSH 10 gm/100 ml KRP의 농도(濃度)에서 대체(大體)로 정상치(正常値)에 비(比)하여 대차(大差)없는 NP-SH 및 NP-SS를 나타내고 GSH의 농도(濃度)가 높아져도 SH 기(基)의 증가(增加)는 현저(顯著)치 않았다. 2) 25 C에서 incubate한 군(群)에서의 NP-SH및 NP-SS는 GSH 20 mg/100 mg KRP 및 GSH 30 mg/100 mg KRP 의 양군(兩群)에서 GSH의 농도(濃度)와 시간경과(時間經過)에 비례(比例)해서 증가(增加)하였고, GSH 10 mg/100 ml KRP 군(群)에서는 incubation 30분(分)에서 최고치(最高値)를 나타내고 60분(分)에서는 오히려 약간(若干) 저하(低下)되는 경향(傾向)을 나타내었다. 3) 37 C에서 incubate 한 군(群)에서는 GSH 농도(濃度)와 incubation의 시간(時間)에 비례(比例)해서 NP-SH 및 NP-SS가 대체(大體)로 증가(增加)하고 증가(增加)의 율(率)도 가장 현저(顯著)하였다.

• 한국연초학회지
• /
• 제15권1호
• /
• pp.3-14
• /
• 1993

공기중에 존재하는 여러 산화성 물질들은 호흡기의 손상과 관련이 있는 것으로 알려지고 있으며 이와같은 산화성 물질에 의한 손상은 폐에 존재하는 항산화 물질이나 항산화 효소들에 의해 감소 또는 예방될 수 있다. 저자들은 폐의 항산화방어 기전에 대한 흡연의 영향을 흰쥐에서 관찰하였다. 횐쥐를 6개피의 담배연기에 일일 20분씩 90일간 전신 폭로했을때 조직내의 catalase와 superoxlde dismutase(SOD)의 활성이 유의하게 증가되었다(p<0.05) 그러나 glutathione peroxidase의 활성도는 변화되지 않았고 thiol 화합물의 함량은 흡연 시작후 15일에 44%까지 감소되었으나 그후 정상으로 회복되었다. 한편, 횐쥐를 1, 3, 5, 10 및 20개피의 담배연기에 같은 방법으로 15일간 노출시켰을때, catalase는 개피수에 따라서 증가되었고 총 SOD의 활성도는 5개피 이하에서만 특이하게 증가되었으며 대부분 Zn-SOD이었다. 폐에는 한 종의 Cu, Zn-SOD (pI 4.9)와 CN에 내성이 있는 두종의 Mn-SOD(pI 4.7, pI 7.9)가 존재하였고, 등전점이 4.7인 Zn-SOD가 주된 동위효소로써 흡연에 의해 유도되는 형태였다. 이 결과들은 흡연으로부터 폐의 보호는 초기에는 항산화 물질들의 소모로, 그리고 만성 흡연의 경우는 항산화 효소들의 유도로 이루어지며. 특히 Zn-SOD (pI 4.7)와 catalase가 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제11권3호
• /
• pp.205-210
• /
• 1983

유포자 유산균인 Lactobacillus sporogenes에 의한 extracellular $\beta$-galactosidase의 생산에 관한 연구에 이어 본 효소의 효소학적 일반성질을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. L. sporosenes $\beta$-glactosidase는 o-nitrophenyl-$\beta$-d-glaactopyranoside(ONPG)를 가수분해 할때에 0.05M-sodium phosphate buffer를 사용하여 pH6.8과 반응온도 6$0^{\circ}C$에서 가장 높은 효소활성을 나타냈으며 또한 이 효소반응의 activation enery는 50~6$0^{\circ}C$에서는 11,300ca1/mo1e, $50^{\circ}C$이하에서는 16,000ca1/mo1이었다. 효소활성에 미치는 금속 이온의 효과는 거의 없었으나 L-cysteine 10mM 첨가로 뚜렷한 첨가 효과를 나타내므로서 sulfhydryl enzyme의 특징을 보였다. 한편 lactose와 ONPG에 대한 Michaelis constant가 각각 6.45$\times$$10^{-2}$M, 1.48$\times$$10^{-3}$M을 나타냄으로서 본 효소는 ONPG에 휠씬 큰 친화성을 나타냈다. 또 ONPG분해반응은 lactose, galactose, glucose등의 당류첨가에 의해 그 반응속도가 현저히 감소되며 lactose는 특이하게 noncompe titive저해 양식을 나타내었으며 Ki값은 17.8mM galactose는 Ki값이 13.3mM, competitive inhibition glucose는 11.4mM의 Ki값에 uncompetitive inhibition을 나타냈다. 특히 본 효소는 중성부의 pH와 6$0^{\circ}C$에서 180분간 가열후에도 70%이상의 효소활성을 나타냄으로서 상당히 높은 열안정을 나타냄과 동시에 균체외 효소라는 장점도 아울러 가지고 있어 식품공업에의 그 이용 가능성이 매우 높다고 하겠다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제13권4호
• /
• pp.355-359
• /
• 1985

L. sporogenes가 생산하는 $\beta$-galactosidase의 효소학적 성질을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. ONPG를 기질로 하였을 때 0.05M 인산염 완충용액을 사용하여 pH 7.0과 반응온도 6$0^{\circ}C$에서 가장 높은 효소활성을 나타냈으며 또한 본 효소반응의 activation energy는 50-6$0^{\circ}C$에서 5,800cal/mole 이었다. 효소활성에 미치는 무기염류의 효과는 어느 것도 뚜렷한 첨가효과를 나타내지 않았으나 L-cy-steine 10mM 첨가했을 때 효소활성이 약 6.7배정도 증가됨으로써 본 효소는 sulfhydryl enzyme 특징을 보였다. 한편 lactose와 ONPG에 대한 Michaelis constant는 각각 33.3mM, 1.2mM을 나타냈다. 특히 본 효소는 중성 범위의 pH와 6$0^{\circ}C$에서 30분간 열처리 후에도 약 90%정도의 잔존활성을 나타낼 뿐만 아니라 시유와 10% skim milk 용액에 10units/$m\ell$의 효소를 첨가, 6$0^{\circ}C$에서 1시간 처리 후에 유당 분해 율이 90%, 2units/$m\ell$ 첨가하여 4시간 반응 후에 유당 분해 율이 85%정도 가수분해시킴과 동시에 균체외 효소라는 장점도 아울러 가지고 있어 식품공업에의 그 이용 가능성이 매우 높다고 하겠다.

• Journal of Preventive Medicine and Public Health
• /
• 제32권2호
• /
• pp.170-176
• /
• 1999

본 연구는 EMT-6 세포를 이용하여 무기수은, 유기수은 및 카드뮴의 세포독성에 대한 glutathione(GSH)의 방어효과를 알아보고자 하였다. 무기수은, 유기수은 및 카드뮴을 첨가한 배양조건에서 EMT-6 세포의 세포생존율, ${NO_2}^-$ 및 ATP 생성량은 첨가한 중금속의 농도가 증가할수록 용량의존적으로 감소하였다. GSH, OTC 및 BSO를 단독 첨가한 배양조건은 세포의 세포생존율과 NO2- 및 ${NO_2}^-$ 생성량에 영향을 주지 않았다. 수은화합물 및 카드뮴과 GSH를 동시 첨가한 배양조건에서는 세포생존율이 90% 이상 유지되었고, ${NO_2}^-$ 및 ATP 생성량은 기본배양조건과 비슷한 수준으로 나타났다. $16{\mu}M$의 무기 및 유기수은과 $160{\mu}M$의 카드뮴을 첨가한 실험조건에 GSH를 동시 첨가했을 경우 방어효과는 GSH의 농도에 따라 용량의존적으로 증가하였다. 세포내에서 수은 및 카드뮴의 세포독성에 대한 GSH역할을 알아보고자 GSH, OTC, BSO 전처리 실험을 한 결과, GSH의 전처리는 이들이 세포막을 통과하지 못하기 때문에 대조군과 비슷한 양상으로 나타난 반면에 BSO를 전처리한 군에서는 세포내 GSH 농도의 감소로 수은의 세포 독성이 증가하여 대조군에 비하여 ${NO_2}^-$와 ATP 생성량이 현저히 감소하였다. 또한 세포내 GSH의 농도를 증가시키는 OTC를 전처리한 결과 수은의 독성에 대한 방어효과가 시간 및 용량 의존적으로 현저하게 증가하였다. 이러한 실험결과는 수은의 세포독성에 대한 GSH의 방어효과가 GSH 세포내 농도와 밀접한 관련이 있음을 간접적으로 보여주고 있다. 본 연구의 결과는 수은 및 카드뮴의 독성에 대한 GSH의 방어작용이 단순히 -SH기와 중금속의 결합에 의한 결과가 아니라 세포내에서 GSH 분자가 갖는 고유의 기능으로 판단되며, 특히 중금속에 의한 에너지대사의 장애를 GSH가 회복시킬 수 있음을 보여준다.