Purification of the bacteriocin from Lactococcus sp. 1112-1 was achieved by successive column chromatography on CM-Sephadex C-25 and Sephadex G-50, starting from cell disruption broth. 16.2% of the initial activity was recovered after this purification step and it was shown 123-fold increase in purification. Purified bacteriocin was shown a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. This substance was rather stable at heat treatment and alkaline pH relatively. The residual antimicrobial activity was 38% when the bacteriocin was treated by heat at $100^{\circ}C$ for 60 min. And 23% of the activity remained at pH 8.0 after standing for 48 hr. The amino acid composition of purified bacteriocin was made up 26 residues.
Aspergillus sp. (MK-24) producing a biological active substance that inhibited the venom proteinase activity was isolated from soil. The substance also inhibited the activity of trypsin and coagulation of blood, but did not inhibit papain, $\alpha$-chymotrypsin and pepsin. The substance was partially purified from culture filtrate by precipitaion with acetone, and by chromatography of DEAE-Sepadex A-50 column and Amberlite IRC-50 ion exchange. The inhibitory substance was stable in the wide pH range from 2.0 to 12.0 at 37$^{\circ}C$, but not stable at $65^{\circ}C$ in the alkaline pH. Only 12% of the activity was decreased by the heat treatment at 10$0^{\circ}C$ for two hours. The inhibition on venom proteinase (Agkistrodon bromohoffi brevicaudus) was a mixed type. The inhibitory activity depended on the preincubation time and completely depressed by cupric, zinc and cobalt ions. The inhibition on the venom proteinase was appeared strongly on casein but not on ovalbumin or hemoglobin as a substrate.
Min Sang-Jun;Lee Sung-Ryull;Kang Hyung-Won;Lyu Yeoung-Su;Jeon Chang-Hwan
Journal of Oriental Neuropsychiatry
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v.12
no.2
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pp.173-183
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2001
Substance P can stimulate secretion of tumor necrosis $factor-\;{\alpha}\;(TNF-\;{\alpha}\;)$ from astrocytes stimulated with lipopolysaccharide (LPS). Here I report that Chilbogeum can modulate cytokines secretion from primary cultures of rat astrocytes. Chilbogeum $(10\;{\mu}g/ml)$ significantly inhibited the $TNF-\;{\alpha}$ secretion by astrocytes stimulated with LPS and Substance P. Interleukin-1 (IL-1) has been shown to elevate $TNF-\;{\alpha}$ secretion from LPS-stimulated astrocytes while having no effect on astrocytes in the absence of LPS. Treatment of Chilbogeum $(10,\;100\;{\mu}g/ml)$ to astrocytes stimulated with both LPS and Substance P decreased IL-1 secretion significantly. The secretion of $TNF-\;{\alpha}$ by LPS and Substance P in astrocytes was progressively inhibited with increasing amount of IL-1 neutralizing antibody. Upon stimulation from various agents, these cells adopt a reactive phenotype, a morphological hallmark in Alzheimer's disease (AD) pathology, during which they themselves may produce still more inflammatory cytokines. Chilbogeum $(10,\;100\;{\mu}g/ml)$ significantly inhibited the $TNF-\;{\alpha}$ secretion by CCF-STTG1 astrocytoma cells stimulated with $A\;{\beta}$ and IL-1. These results suggest that Chilbogeum may inhibit $TNF-\;{\alpha}$ secretion by inhibiting IL-1 secretion and that Chilbogeum has an antiinflammatory activity in AD brain.
An actinomycete, AS-568, which produced an inhibitory substance against succinate dehydrogenase of Ehrlich ascites carcinoma and Sarcoma-180 cells of mouse, was isolated. The inhibitory activity was determined by SDI (Succinate Dehydrogenase Inhibition) method. The active substance was specific against carcinoma cells compared to normal cells in mouse; liver, kidney and brain. The inhibitory ratio was about 50% after one hr treatment at 37$^{\circ}C$ in vitro. Maximal productivity of active substance was recognized by 5 days culture in glucose-asparagine. The active component in cultural liquid was stable in neutral pH range and heat treatment reasonably, add it was recovered from precipitate by ammonium sulfate or non-dialyrable fraction in cellophane membrane as showing the behavior of high molecular substance.
A bacterium producing unique antistaphylococcal substance (ASS) was isolated from soil samples. The isolated strain KUH-001 was identified to belong to Pseudomonas species from the characteristic properties of its fluorescence and cellular 3-hydroxy fatty acid composition, etc. The ASS component was purified by procedures employing activated carbon adsorption, column chromatography with silica gel, preparative TLC and HPLC. This compound could also be purified mainly by repeating of trituration and precipitation with chilled ether. Purified ASS with a m.p. value of $140~142^{\circ}C$ showed marked stability at high temperature (at $121^{\circ}C$ for 10 min) and extreme pHs (in 1N HC1 and 1N NaOH for 1 day) without significant loss of antibiotic activity. From spectral data of UV, IR, NMR, and FAB-MS, the compound was elucidated as 2-heptyl-4-hydroxyquinoline N-oxide (HHQO). Under the conditions employed, HHQO exhibited a narrow antimicrobial spectrum. active particularly against Staphylococcus aureus including the methicillin resistant strain. Moreover, it did not induce resistance, and besides, interacted synergistically with certain antibiotics such as vancomycin or erythromycin.
This study was carried out to identify the three antifungal substances isolated from the culture medium of Pseudomonas sp. A-183 which is antagonistic against Phytophthora capsici. The substance A and B showed positive reactions at the Molish test and Anthrone test, but negative one at the Fehling test, strongly suggesting that both substance A and B had nonreducing sugar frameworks. The substance C only exhibited the phenomenon of the UV induced fluorescence. From the qualitative analysis with the spectroscopic techniques such as UV, Mass, IR and NMR, the substance A and B were known to be composed to sugar and fatty acid, and showed a base peak of 171(m/e). It was identified that substance A was $(2-O-L-rhamnosyl-{\alpha}-L-rhamnosyl-{\beta}-hydroxydecanoyl-{\beta}-hydroxy$ decanoic acid) and the substance B was $({\alpha}-L-rhamnosyl-{\beta}-hydroxydecanoyl-{\beta}-hydroxy$ decanoic acid). The substance C was identified as a phenazine from the results of qualitative analysis with the spectroscopic techniques such as UV, Mass, IR and NMR.
This study was carried out to characterize the antilisterial substances produced by Leuconostoc sp. W65 and to evaluate the effects of pH, temperature, and time on inhibitory activity using response surface methodology. Leucocin W65, an antilisterial substance produced by Leuconostoc sp. W65, markedly inhibited the growth of Listeria monocytogenes, L. innocua, and L. ivanovii, whereas other pathogens including Gram-negative bacteria were not susceptible. The pH was the most effective factor with regard to bacteriocin activity, while temperature and time of heat treatment had no significant effect. Fifty percent of inhibitory activity remained after 22.8 min at pH 4.2 and $121^{\circ}C$. Leucocin W65 was purified by ammonium sulfate precipitation, hydrophobic interaction chromatography, and tricine-SDS-PAGE. Compositional analysis originally estimated the peptide to be 56 amino acids in length without asparagine, glutamine, and tryptophane. The sequence of partial N-terminal amino acid residues of purified bacteriocin was identified as follows: $NH_{2}-XGXAGVXPXGGQQPXVPLXYP$.
We isolated microorganism secreting antimicrobial substance from tomato and identified as Enterococcus faecium. This substance was completely inactivated by pretense treatment and retained activity after catalase treatment. This result indicated that the antimicrobial activity of this substance was due to proteinaceous substance known as bacteriocin. The bacteriocin inhibited growth of Gram positive bacteria, such as Listeria monocytogenes, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus plantarum, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyrogenes, and Gram negative bacteria, such as Pseudomonas aeruginosa. Purification of the bacteriocin was achieved by ethanol precipitation, ion exchange chromatography on CM Sepharose CL-6B, and gel filtration on Sephacryl S-100 HR. After these purification steps, the specific activity of the bacteriocin was increased 35.8 fold compared with culture broth. Purified bacteriocin was shown single band on SDS-PAGE and molecular weight was estimated 51 kDa. The residual activity of this bacteriocin was 3.3% at 10$0^{\circ}C$ for 60 min, and this bacteriocin was stable at pH 2~7.
This study was designed to develope the antioxidative activity on oxidation of human low density lipoprotein(LDL) from marine microbials. Bacillus KS-96 producign antioxidant have been isolated and identified from seawater, Bacillus sp. KS-96. The optimal medium pH was 7.0 and incubation temperature was 30$^{\circ}C$. The antiosidant of potential substance produced extracellularly in the culture broth by Bacillus sp. KS-96 was obtained by elution of silica gel culumn chromatography with hexane, ethylacetate and water. The ethylacetate faction are shown at highest level of antioxidant activity using thiocyanate method among them. By IR, NMR, and GC/MS, antioxidant purified from ehtylacetate fraction was identified and named as 2,6-dimethoxyphenol. 2,6-dimethoxyphenol inhibited the metal mediated oxidation of human LDL at concentration of 50∼100 ${\mu}$g/mL in the presence of 5uM CuSO4 with macrophage or J774 cells.
Kim, Eun-Hee;Seo, Jung-Soo;Huh, Min-Do;Park, Nam-Gyu;Lee, Hyung-Ho;Chung, Joon-Ki
Journal of fish pathology
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v.14
no.1
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pp.46-53
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2001
The present study was undertaken to investigate and compare the effect and mode of action of tachykinins on isolated strip preparations of the intestinal smooth muscle from the nile tilapia, Oreochromis niloticus and the Israel carp, Cyprinus carpio. Both of neurokinin 1(NK-1) receptor agonist, substance P(SP) and neurokinin 2(NK-2) receptor agonist, neurokinin A(NKA) caused concentration-dependent contractions of intestinal smooth muscle in the nile tilapia and the israel carp. The efficiency and potency of these agonists varied between two fish species. In the nile tilapia intestine, the efficiency and potency of SP were greater than those of NKA. However, the efficiency and potency of SP were similar to those of NKA. In the nile tilapia intestine and the israel carp intestine, the contractile responses of SP and NKA were noncompetitively antagonized by NK-1 receptor antagonist, L-732, 138 but unaffected by NK-2 receptor antagonist, MDL 29913. In addition, SP-induced contractions in the both of preparation were significantly inhibited by muscarinic antagonist, atropine($5{\times}10^{-7}$M) and ganglionic inhibitor, tetrodotoxin($2{\times}10^{-7}$M) but NKA-induced contractions were unaffected by those. These results indicate that two tachykinin agonists, SP and NKA predominately modulate the mechanical activity of isolated preparation from the nile tilapia and the israle carp directly through the activation of NK-1 receptor on the intestinal smooth muscle cells, but in the case of SP action, the indirect action through activation of cholinergic nerve terminals seems to be also implicated.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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