The present study was conducted to establish primary bovine muscle satellite cell (MSC) culture conditions and to investigate the effects of various steroid hormones on transcription of the genes involved in muscle cell proliferation and differentiation. Of three different types of proteases (type II collagenase, pronase and trypsin-EDTA) used to hydrolyze the myogenic satellite cells from muscle tissues, trypsin-EDTA treatment yielded the highest number of cells. The cells separated by hydrolysis with type II collagenase and incubated on gelatin-coated plates showed an enhanced cell attachment onto the culture plate and cell proliferation at an initial stage of cell growth. In this study, the bovine MSCs were maintained in vitro up to passage 16 without revealing any significant morphological change, and even to when the cells died at passage 21 with decreased or almost no cell growth or deformities. When the cells were incubated in a steroid-depleted environment (DMEM(-)/10% CDFBS (charcoal-dextran stripped FBS)), they grew slowly initially, and were widened and deformed. In addition, when the cells were transferred to an incubation medium containing steroid (DMEM(+)/10% FBS), the deformed cells resumed their growth and returned to a normal morphology, suggesting that steroid hormones are crucial in maintaining normal MSC morphology and growth. The results demonstrated that treatments with 19-nortestosterone and testosterone significantly increased AR gene expression (p<0.05), implying that both testosterone and 19-nortestosterone bind with AR and that the hormone bound-AR complex up-regulates the genes of its own receptor (AR) plus other genes involved in satellite cell growth and differentiation in bovine muscle.
대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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pp.346.1-346.1
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2002
FXR (farnesoid X-activated receptor) is a member of nuclear steroid hormone receptor superfamily and especially a orphan receptor, which are able to control mevalonate pathway upon activation by binding of the specific ligands. We. have launched our study for development of FXR specific ligands getting on in lead discovery. A promising lead stilbene analog was obtained through the screening of a set of library compounds which was previously targeted for other nuclear receptors. And then synthetic modilication of the lead was perfoumde. In addition. fishing a new pharmacophore was fried by UNITT aearch. which brought new structural features.
A question whether abnormal responsiveness of hypothalamic catecholaminergic nervous system to ovarian steoid hormones in spontaneously hypertensive rats (SHR) exist was investigated. Four groups of experimental animals were prepared for SHR and normotensive Wistar rats (NW) respectively: 1) intact, 2) ovariectomized (OVX+V), 3) ovariectomized and estrogen treated (OVX+E), 4) ovariectomized and estrogen plus progesterone treated (OVX+E+P) groups. Hypothalami from experimental animals were dissected out and used for determination of .alpha.-adrenergic receptor binding characteristics and catecholamine contents. Norepinephrine(NE) content and B$_{max}$ of $\alpha_1$-adrenergic receptors in hypothalami were greater in intact SHR than in intact NW, but dopamine(DA) content was lower in SHR than in NW. Neither contents of NE and DA nor binding characteristics of $\alpha_1$-adrenergic receptors were different in OVX+V and OVX+E group from intact group of both SHR and NW. Kd and B$_{max}$ of $\alpha_1$-adrenergic receptors in OVX+E+P was lower than that in intact SHR but not in NW. DA content was lower in OVX+E+P than in intact group of SHR and NW. The result of the present study indicates that there is an abnormal responsiveness of hypothalamic catecholaminergic nervous system to ovarian steroid hormones in SHR which may be one of genetically-determined factors probably not responsible for the development of hypertension.
여성호르몬으로 잘 알려진 estrogen은 난소의 granulosa 세포와 정소의 Sertoli 세포에서 주로 생성되는 것으로 알려져 있으며 최근엔 사람의 지방, 근육, 뇌, 뼈세포 등에서의 합성 가능성과 각 조직에서 생성되는 estrogen 의 생리학적인 기능에 관해 많은 관심이 모여져 왔다. 다른 steroid처럼 지방친화적인 (lipophilic) estrogen은 세포막과 핵막을 쉽게 통과하여 목표세포 (target cell)의 핵에 존재하는 estrogen receptor (ER)에 결합하여 특정 유전자를 발현에 관여하는 것으로 알려져 있다. Cytochrome P450 Aromatase (간략히, aromatase)는 steroid hormone을 합성하는 마지막 단계에서 androgens을 estrogens으로 전환시키는데 관여하는 효소이다. Aromatase의 substrate (기질)로 사용되는 androgen에는 androstenedione과 testosterone 등이 있으며, 최종 산물로써 estrone(E1)이나 17$\beta$-estradiol(E2) 등의 estrogen이 생성된다. Aromatase는 steroidogenic tissues의 세포내 골지체에 존재하는 것으로 알려져 있으며, NADPH-cytochrome P450 reductase와 함께 복합체로써 존재한다. NADPH-cytochrome P450 reductase는 다른 steroid hormone에 관여하는 효소들과도 복합체를 형성하여 다른 steroid hormone을 합성할 수 있으므로, 어떤 조직에서 여성호르몬이 만들어질 수 있느냐 하는 것은 그 조직에서 aromatase 단백질이 만들어지느냐에 따라서 결정된다.
Ginsenosides $Rh_1$ and $Rh_2$ Induced the differentiation of F9 teratocarcinoma stem cells. These agents are structurally similar to the steroid hormones, therefore, we speculated that the steroid receptor (s) or novel nuclear receptor (s) could be involved in the differentiation process induces by them. Based on this speculation, we tried to alone new nuclear receptors with reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) method by isolating RNA from F9 teratocarcinoma cells induced by ginsenosides. By using RT-PCR with degenerated primers from highly conserved DNA binding domain of nuclear receptors, we identified several nuclear receptors. In northern blot analysis we found that these clones are transcriptionally regulated by ginsenoside Rhl or Rh2 treatment. Further characterizations of these clones are needed to identify the mechanism of gene expression, which has an important role in the differentiation of F9 cells induced by ginsenosides.
Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) are orphan nuclear hormone receptors that are known to control the expression of genes that are involved in lipid homeostasis and energy balance. PPARs activate gene transcription in response to a variety of compounds, including hypolipidemic drugs. Most of these compounds have high affinity to the ligand-binding domain (LBD) of PPARs and cause a conformational change within PPARs. As a result, the receptor is converted to an activated mode that promotes the recruitment fo co-activators such as the steroid receptor co-activator-1 (SRC-1). Based on the activation mechanism of PPARs (the ligand binding to $PPAR{\gamma}$ induces interactions of the receptor with transcriptional co-activators), we performed Western blot and ELISA. These showed that the indomethacin, a $PPAR{\gamma}$ ligand, increased the binding between $PPAR{\gamma}$ and SRC-1 in a ligand dose-dependent manner. These results suggested that the in vitro conformational change of $PPAR{\gamma}$ by ligands was also induced, and increased the levels of the ligand-dependent interaction with SRC-1. Collectively, we developed a novel and useful ELISA system for the mass screening of $PPAR{\gamma}$ ligands. This screening system (based on the interaction between $PPAR{\gamma}$ and SRC-1) may be a promising system in the development of drugs for metabolic disorders.
Kim, Juhye;Cha, Sunyeong;Lee, Min Young;Hwang, Yeon Jeong;Yang, Eunhyeok;Choi, Donchan;Lee, Sung-Ho;Cheon, Yong-Pil
한국발생생물학회지:발생과생식
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제23권3호
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pp.263-275
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2019
Based on our preliminary results, we examined the possible role of low-dose and chronic-exposing of the chemicals those are known as endocrine disrupting chemical (EDC), on the proliferation of uterine endometrium and the localization of steroid receptors. Immunohistochemical or immunofluorochemical methodology were employed to evaluate the localization of antigen identified by monoclonal antibody Ki 67 protein (MKI67), estrogen receptor 1 (ESR1), estrogen receptor 2 (ESR2), and progesterone receptor (PGR). In $133{\mu}g/L$ and $1,330{\mu}g/L$ di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) and $50{\mu}g/L$ nonylphenol (NP) groups, the ratio of MKI67 positive stromal cells was significantly increased but not in $500{\mu}g/L$ NP group. The ratios of MKI67 positive glandular and luminal epithelial cells were also changed by the chronic administration of NP and DEHP in tissue with dose specific manner. ESR1 signals were localized in nucleus in glandular and luminal epithelia of control group but its localization was mainly in cytoplasm in DEHP and NP administered groups. On the other hand, it was decreased at nucleus of stromal cells in $1,330{\mu}g/L$ DEHP group. The colocalization patterns of these nuclear receptors were also modified by the administration of these chemicals. Such a tissue specific and dose specific localization of ESR2 and PGR were detected as ESR1 in all the uterine endometrial tissues. These results show that the chronic lows-dose exposing of NP or DEHP modify the localization and colocalization of ESRs and PGR, and of the proliferation patterns of the endometrial tissues.
Pivotal roles of steroid hormones in uterine endometrial function are well established from the mouse models carrying the null mutation of their receptors. Literally androgen belongs to male but interestingly it also detected in female. The fluctuations of androgen levels are observed during reproductive cycle and pregnancy, and the functional androgen receptor is expressed in reproductive organs including uterus. Using high throughput methodology, the downstream genes of androgen have been isolated and revealed correlations between other steroid hormones. In androgen-deficient mice, uterine responses to exogenous gonadotropins are impaired and the number of pups per litter is reduced dramatically. As expected androgen has important role in decidual differentiation through AR. It regulates specific gene network during those cellular responses. Recently we examined the effects of steroid hormonal complex containing high level of androgen. Interestingly, on the contrary to the androgen-alone administration, the hormonal complex did not disturb the decidual reaction and the pubs did not show any morphological abnormality. It is suspected that the complexity of communication between other steroid hormone and their receptors are the reasons. In summary, androgen exists in female blood and it suggests the importance of androgen in female reproduction. However, the complex interactions with other hormones are not fully understood compared with estrogen and progesterone. The further studies to evaluate the possible role of androgen are needed and important to provide the in vivo rational for the prevention of associated pregnancy complications and help human's health.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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