Using Bacillus subtilis spore display system, with cotG as an anchoring motif, levansucrase from Zymomonas mobilis, was displayed on the outer surface of Bacillus subtilis spore. Flow cytometry of DB104 (pSDJH-cotG-levU) spore, proved the surface localization of CotG-LevU fusion protein on the spore compared to that of DB104. Enzymatic activity of DB104 (pSDJH-cotG-levU) spore showed more than 1.5 times higher levansucrase specific activity compared to that of the host spore, which is a remarkable increase of enzymatic activity considering the existence of sacA (sucrase) and sacB (levansucrase) in the Bacillus subtilis chromosome. The spore integrity, revealed by sporulation frequency test after heat and lysozyme treatment of spore, did not changed at all in spite of the CotG-LevU fusion protein incorporation into the spore coat layer during spore formation process. These data prove again that Bacillus subtilis spore could be considered as good live immobilization vehicle for efficient bioconversion process.
Using tetrameric ${\beta}$-galactosidase as a model protein, anchoring motives were screened in Bacillus subtilis spore display system. Eleven spore coat proteins were selected considering their expression levels and the location in the spore coat layer. After chromosomal single-copy homologous integration in the amyE site of Bacillus subtilis chromosome, cotE and cotG were chosen as possible spore surface anchoring motives with their higher whole cell ${\beta}$-galactosidase activity. PAGE and Wester blot of extracted fraction of outer layer of purified spore, which express CotE-LacZ or CotG-LacZ fusion verified the existence of exact size of fusion protein and its location in outer coat layer of purified spore. ${\beta}$-galactosidase activity of spore with CotE-LacZ or CotG-LacZ fusion reached its highest value around 16~20 h of culture time in terms of whole cell and purified spore. After intensive spore purification with lysozyme treatment and renografin treatment, spore of BJH135, which expresses CotE-LacZ, retained only 1~2% of its whole cell ${\beta}$-galactosidase activity. Whereas spore of BJH136, which has cotG-lacZ cassette in the chromosome, retained 10~15% of its whole cell ${\beta}$-galactosidase activity, proving minor perturbation of CotG-LacZ, when incorporated in the spore coat layer of Bacillus subtilis compared to CotE-LacZ. Usage of Bacillus subtilis WB700, of which 7 proteases are knocked-out and thereby resulting in 99.7% decrease in protease activity of the host, did not prevent the proteolytic degradation of spore surface expressed CotG-LacZ fusion protein.
This study was carried out to establish the optimum condition of cell disruption with a sonicator for the detection of the spore, Bacillus anthracis ${\Delta}$-sterne for the purpose of developing automatic fluorometer. The efficiency of sonication on the ${\Delta}$-sterne spore disruption was very weak. The ${\Delta}$-sterne spore with zirconia bead showed greater disruption than the ${\Delta}$-sterne spore alone when sonificated. The volumn of the zirconia bead added in the spore solution has little effect on the disruption efficiency. The detection limit of the ${\Delta}$-sterne spore with zirconia bead and the ${\Delta}$-sterne spore alone was $10^6$ CFU/mL and $5{\times}10^7$ CFU/mL respectively, when sample was sonicated for 20 seconds with a sonicator probe of 13 mm diameter.
In the production of a low cost bacterial insecticide, it is important to produce a high spore concentration using low price substrates. Experiments were carried out to investigate the effects of the addition of mineral salts and glucose, and of dissolved oxygen concentration on the cell growth and spore formation of Bacillus thuringiensis var aizawai using a cheap wheat and soybean meal in the batch culture. The maximum viable cell number was 1.2${\times}$109 CFU/mL at 12 hr culture and spore yield was 54.2% at 74 hr culture using an industrial medium containing 20 g/L wheat meal and 30 g/L soybean meal under 1.0 vvm aeration and 200 rpm agitation. The cell growth and the spore formation were not enhanced by the addition of mineral salts in industrial medium, whereas th addition of 10g/L glucose decreased the cell growth and spore formation. We could obtain a maximum viable cell number of 2.2${\times}$109 CFU/mL and spore number of 1.9${\times}$109 CFU/mL at the dissolved oxygen concentration of 60% of saturation. The spore concentration was enhanced approximately by 2 times as compared to the dissolved oxygen concentration of 50%. In the bench-scale culture, the maximum viable cell and spore number were 2.5${\times}$109 CFU/mL, and 2.2${\times}$109 CFU/mL, respectively under 1.0 vvm aeration and 400 rpm agitation. The spore yield was 88% based on the maximum viable cell number. As a result, it was confirmed that the production of high spore concentration could be obtained by a bench-scale culture using an industrial medium.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
/
제18권2호
/
pp.83-89
/
2009
Multiplication and spore production of three microsporidia(Nosema bombycis, Nosema sp. 1 and Nosema sp. 2) in selected tissues of pupa and adult of silkworm, Bombyx mori L. were studied in two seasons (SI, SII) with distinct temperature (SI: $20.1{\pm}0.8^{\circ}C$ and SII: $25.1{\pm}0.7^{\circ}C$) regimes. Multiplication of the microsporidia followed a logistic pattern with a lag phase, an exponential phase and a stationary phase. In SII, spore production was significantly (P<0.01) higher in various tissues. Highest spore production was observed 30 days post inoculation (p.i.) in SI and in SII, it was $21{\sim}23$ days p.i. Spore production was significantly (P<0.01) higher in the gut tissues than other tissues. Nosema sp. 2 registered significantly (P<0.01) higher spore production in both the seasons compared to Nosema bombycis and Nosema sp. 1. Results indicate that the multiplication and spore production of microsporidia are tissue specific and extremely sensitive to the temperature at which the host is reared. Through this study, the precise day that the spore numbers of the microsporidia are maximized can be predicted in both pupa and adult in case the infection is initiated in the first instar.
Mohanan N. Madana;Krishnan N.;Mitra P.;Das K.K.;Saratchandra B.;Haldar D.P.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
/
제12권2호
/
pp.87-93
/
2006
Multiplication and spore production of three microsporidia viz., Nosema bombycis, Nosema sp. 1 and Nosema sp. 2 in fifth instar larval tissues of silkworm, Bombyx mori L. in two seasons with distinct temperature regimes were studied. Nosema sp. 2 produced significantly (P < 0.01) higher number of spores in various tissues. Among the tissues, spore production was highest in silk gland, followed by fat body and gut. Spore production was significantly (P < 0.01) higher in season-II (Average temperature $29.4{\pm}1.1^{\circ}C$). Maximum spore production was observed 25 days post inoculation (p. i.) in season-I (Average temperature $18.9{\pm}1.1^{\circ}C$), whereas in season-II, it was 14 days p. i. In season-I, spore production was low up to 21 days p. i., then increased sharply. In season-II, there was a steady increase in spore production. The results indicate that the microsporidian multiplication is tissue specific and extremely sensitive to temperature at which the host is reared. It also reveals that, silk gland, fat body and gut are the most appropriate tissues for microscopic identification of microsporidia in the larval stage.
자연상태하에서 잎도열병 병반으로부터 포자의 량을 측정하기 위하여 4종의 포자탐집기(금의 원형, 금의 개량형, 길야의 원형, 금$\cdot$길야의 개량형)를 검토한 결과, 원골한 포자형성 및 이탈, 포자채집, 검경에 있어서 한 두가지의 결점이 발견되었다. 따라서 위의 결점을 보완할 수 있는 새로운 포자채집기를 고찰, 성능을 검토하여 상기 4종의 채집기의 결점을 보충할 수 있는 결과를 얻었으므로 금후 자연상태하에서 포자이탈량 조사에 유용할 것으로 생각된다.
Application of fertilizers such as urea, diammonium phosphate (DAP) and muriate of potash in soil adversely affected the spore germination of Arthrobotrys dactyloides. Amendment of soil with urea at the concentrations of 1.0%, 0.5% and 0.1 % completely inhibited spore germination and direct trap formation on the conidium, whereas muriate of potash delayed and reduced the spore germination even at the lowest concentration. DAP also inhibited spore germination at 1.0% concentration, while at lower concentration the percentage of spore germination was reduced. Application of neem cake at the concentration of 0.5% also inhibited spore germination after 24 h of amendment. The inhibitory effect of neem cake was reduced after 15 days of amendment, while after 30 days after amendment the inhibitory effect was completely lost and the spore germinated by direct trap as in unamended soil. Nematodes were not attracted to ungerminated spores after 24 h of amendment. After 15 days of amendment nematodes were attracted to agar blocks containing fewer germinated spores after 24 h of incubation but after 48 h of incubation large number of nematodes were attracted and trapped by the germinated spores with direct traps. After 30 days of amendment, larger number of nematodes were attracted and trapped by direct traps.
Analysis of leaf exudates of Vicia faba using paper chromatography to identify individual amino acids and sugars qualitatively was investigated. The results revealed that the number of identified amino acids detected in the leaf exudates of the susceptible plants was more than those of resistant plants. The results also showed an increase in the number of amino acids exuded by infected leaves, but no marked difference in sugars of infected and non infected plants. Lithium chloride application led to decrease in amino acid and sugar contents. The number of amino acids and sugars was also decreased with leaf age. Botrytis fabae and the selected fungal species(Alternaria alternata, Fusarium oxysporum and Aspergillus niger) were used to show the effect of individual amino acid and sugar on their spore germination. It was observed that all amino acids stimulated the fungal spore germination except serine which inhibited its spore germination. In case of A. alternata, spore germination was stimulated by all amino acids except serine, alanine, glutamic acid, arginine and methionine which caused the inhibition. In case of F. oxysporum, aspartic and glutamic acids inhibited spore germination but the other amino acids stimulated its spore germination. Aspartic acid and phenyl alanine inhibited the spore germination of A. niger. All the identified sugars(galactose, glucose, fructose and rhamnose) stimulated spore germination of all tested fungi.
Bacillus thuringiensis를 생물농약으로 이용하기 위해서는 고농도의 포자형성에 의한 높은 살충성의 8 -endotoxin를 생산하는 것이 중요하다. 따라서 본 연구에서는 B. thuringiensis의 고농도 배양에 의한 높은 포자형성 수율을 얻기 위하여 40%의 용존산 소량과 $28^{\circ}C$에서 여랴 가지 방법의 유가식 배양법을 검토하였다. 최종 배양액의 glucose 농도가 50 g/L가 되도록 하는 경우의 유가식 배양에서는 continuos fed-batch culture의 linear gradient f feeding 법에 의하여 $9.37{\times}109$ cell/mL의 최대 생존 세포 수와 8 8.33 X 109 spore/mL의 최대 포자 수를 얻었으며, 이때의 포자 형 성율은 88.9% 이었다 최종 배양액의 glucose 농도가 100 m/L가 되도록 하는 경우의 유가식 배양에서는 intermittent fed-batch culture의 pH-stat 법에 의하여 $1.35{\times}1010$cell/mL의 최대 생존 세포 수와 $1.35{\times}1010$ spore/mL의 최대 포자 수를얻었으며, 이 때의 포자 형성율은 97.8% 이엇다.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.