한국산 표고버섯(Lentinus edodes SR-1) 균사체를 액체배양한 후 균사체로부터 추출, 정제한 PBP의 항암효과 및 면역학적 특성에 대하여 실험하였다. PBP의 항암효과는 in vitro 배양에서 암세포의 배수시간을 2배로 연장하는 활성단위 1 unit은 mouse leukemic cell인 $P_{388}$과 $L_{1210}$의 경우 1 mg 정도였으며, 인체의 장암세포인 HCT-48, HRT-18, HT-29 및 간암세포인 Hep G2의 경우 각각 4.4, 3.6, 6.6, 2.6 mg이었다. 그리고 $P_{388}$과 $L_{1210}$의 경우 배지 1 mL당 4 mg 정도, HRT-18 및 HT-29, Hep G2의 경우 9 mg의 PBP를 첨가했을 때 암세포를 사멸시키는 것으로 나타났다. $P_{388}$과 $L_{1210}$, HCT-48, Hep G-2의 PBP 처리에 따른 암세포의 크기 분포도 변화는 PBP를 처리하지 않은 대조군에 비하여 시간이 경과함에 따라, 그리고 PBP의 농도가 증가함에 따라 비례적으로 적은 쪽으로 이동하였다. In vivo 실험에서 대조군보다 PBP를 첨가한 군에서 비장의 무게가 증가하였으며, 용혈반 형성실험에서 PBP를 투여한 군이 대조군에 비하여 항체 형성세포가 2배로 증가하였다.
연구는 버섯을 이용한 기능성식품 개발 및 버섯가공 산업 육성에 기초자료를 제공하고자 표고버섯 및 느타리버섯 자실체, 균사체 및 폐상의 조단백다당체 분말을 0, 5, 25 mg/kg 농도로 생리식염수에 용해시켜 마우스(DBA/2와 ICR)에 주사하여 i) 백혈병$(L_{1210})$, 간암$(H_{22}),\;mouser{\;}sarcoma180\;(S_{180})$에 대한 항암효과, ii) 면역기전에 관련된 장기중량변화, 용혈반 형성 세포수 변화 등 조단백다당이 면역에 미치는 영향, 그리고 in vitro 세포독성실험을 수행하였다. 본 실험에서 사용한 모든 조단백다당류는 백혈병에 대해 항암효과를 보였는데 그 중 표고버섯자실체 25 mg/kg 처리구가 가장 높은 저지율(86%)을 보였다. 간암$(H_{22})$에 대한 항암효과는 표고버섯균사체 5 mg/kg 처리구를 제외하고 모든 처리구에서 저지효과를 보였는데, 그 중 느타리버섯 폐상 25 mg/kg 처리구가 가장 높은 저지율(87.6%)을 보였으며, 다음은 표고버섯자실체 25 mg/kg 처리구(71%)였다. Sarcoma180에 대한 항암효과는 표고버섯균사체와 자실체 25 mg/kg 처리구에서 각각 30.9,와 33.9%의 저지율을 보였다. In vitro 세포독성검사에서 각 시료의 최종농도 $50,\;100,\;200,\;400\;{\mu}g/{\mu}L$에서 $L_{1210}$에 대한 유의적 세포사망률은 보이지 않았다. 면역효과 실험에서 간장과 비장중량은 농도증가에 따라 증가하는 추세이나 현저한 차이는 없었다. 표고버섯균사체와 자실체 처리시 항체생성능력을 지닌 용혈반 형성 세포수는 대조군에 비해 현저히 높게 나타났다.
토용분(士龍粉)의 영양효과(營養效果)를 알아보고자 평군 체중 (male)72.3${\pm}$1.7g, (female)71.8${\pm}$1.4g인 흰쥐를 암수 구별하여 대조군(對照群), 2% 토용분(土龍粉)을 3일(日)마다 첨가급식군(添加給食群), 2% 토용분(土龍粉)을 매일첨가급식군(每日添加給食群)으로 나누어 6주간(週間) 사육하면서 사료섭취량, 체중증가(體重增加), 식이효율(食餌效率), 단백질효율(蛋白質效率), 장기중량(臟器重量) 등과 혈액중(血液中)의 hematocrit, hemoglobin, total protein, albumin, A/G ratio, glucose, total cholesterol 함량(含量)등의 변화를 관찰(觀察)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 사료섭취량은 암쥐의 매일토용분(每日土龍粉) 첨가급식군(添加給食群)이 대조군(對照群)에 비해 높은(p<0.05) 경향을 보였다. 2. 체중증가량(體重培加量)은 숫쥐의 매일토용분(每日土龍粉) 첨가급식군(添加給貪群)이 대조군(對照群)에 비해 높았다(p<0.05). 3. 식이효율(食餌效率), 단백질효율(蛋白質效率)은 암수 모두 2% 토용분(土龍粉) 첨가급식(添加絡食)으로는 큰 영향을 미치지 않았다. 4. 숫쥐에서 매일토용분첨가급식군(每日土龍粉添加緖食群)의 심장(心臟)과 폐(肺)의 중량(重量)이 대조군(對照群)에 비해 높은(p<0.05) 경향을 보였으나 간(肝), 신장(腎臟), 비장(脚臟)은 대조군(對照群)과 비슷한 경향이었다. 5. Hematocrit 치(値)는 암쥐에서 실험군(實驗群)들이 대조군(對照群)에 비해 높은 (p<0.05) 경향을 보였고, 숫쥐에서는 대조군(對照群)과 비슷한 경향이었다. 6. 혈액중(血液中) hemoglobin과 혈청중(血淸中) total protein, albumin, A/G ratio, total cholesterol, glucose 등은 대조군(對照群)과 실험군(實驗群)들이 비슷한 함량을 보였다.
In vitro 항산화 활성이 확인된 참취가 생체 내에서도 활성을 나타내는 지를 확인하기 위해 대조군과 5%및 10% 참취 분말을 첨가한 식이를 4주간 횐쥐에 투여하면서 마지막 1주간 알콜로 산화적 스트레스를 유발한 후 희생시킨 흰쥐의 체중 증가량과 함께 체중에 대한 장기의 상대 중량, 간, 신장에서의 지질과산화, 항산화효소 활성, glutathione 및 혈청 알부민의 함량을 분석하였다. 4주간의 사육 후 체중 증가량은 대조군, 5% 참취첨가군 그리고 10% 참취첨가군의 순으로 높았으나 유의적인 차이는 없었으며 체중에 대한 상대적인 장기 중량 중에서 간, 비장은 대조군에 비해 참취 첨가군의 경우 더 낮은 비율을 나타내었다. 간에서 지질과산화로 생성되는 TBARS 함량은 대조군(66 $\mu\textrm{g}$)에 비해 5%(45 $\mu\textrm{g}$) 및 10% 참취 분말 식이군(35 $\mu\textrm{g}$)에서 참취 첨가량이 증가할수록 낮았다. Mn-SOD와 catalase활성은 참취 첨가군들에서 대조군보다 낮았으나 Cu, Zn-SOD와 glutathione peroxidase 활성 및 glutathione 함량은 실험군들간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 신장에서는 Mn-SOD와 glutathione peroxidase 활성이 대조군보다 참취 첨가군에서 유사하거나 낮은 경향을 나타내었으나 Cu, Zn-SOD와 catalase의 활성 및 TBARS, glutathione의 함량은 실험군들간에 유의적인 차이를 보이지 않았다. 한편, 혈청 알부민의 함량은 실험군들간에 큰 차이가 없었다. 이상과 같은 실험 결과를 종합할 때 참취는 에탄올에 의해 유발된 산화적인 스트레스를 적절하게 방어하여 특히 간장에서의 지질과산화 및 Mn-SOD활성의 감소를 가져왔으며 그 효과는 참취의 첨가량에 비례하는 경향을 나타내었으므로 생체 안에서 알코올과 같은 산화적 스트레스에 대한 항산화제로서의 역할을 효과적으로 수행할 수 있을 것으로 기대된다.
Antifibrotic drugs could be delayed or inhibited massive collagen deposition in liver tissue or inhibited collagen synthesis. we investigated antifibrotic effects by several herbs(Schisnadra chinensis, Ganoderma japonicum, Sedum sarmentosum, Alisma canaliculatum, Plantago asiatica) extract with observations of collagen accumulation in liver tissue and collagen synthesis in sera. Rats were used for experimental animal that were devided 3 groups(sham control, BDL/S, BDL/S-ER). Rats were operated for inducing liver fibrosis(cirrhosis) by bile duct obstruction. Several herbs were prepared by water extraction and were applicated p. o. $3ml/day$ during 4 weeks. After observation period, rats were sacrificed and liver tissue and sera were collected. In result, the mortality of rats was 35% in BDL/S group and 20% in BDL/S-ER The color of bile juice in BDL/S-ER was bright yellow and murky yellow in BDL/S group. The significantly lower weight of liver($16.21g{\pm}5.3,\;20.58{\pm}2.4$) and spleen($1.96g{\pm}0.96,\;3.93{\pm}0.21$) were shown in BDL/S-ER than that of BDL/S(p<0.05) group. The value of collagen in liver tissue(25.7%) in BDL/S-ER was observed significantly lower than that of BDL/S group (Tab. 2). AST. ALT, ALP, t-bilirubin, BUN levels were low in BDL/S-ER as compared with those of BDL/S group, but the significance was not proven. The trichrome stained liver tissue in BDL/S-ER group was observed mild bile duct proliferation and fibrosis compared with BDL/S group. In conclusion, natural products inhibited new collagen synthesis and delayed massive collagen deposition in liver tissue, so that they have noticeable antifibrotic effects in experimental liver fibrosis(cirrhosis).
단백자원(蛋白資源)의 이용증가(利用增加)에 도움을 주기 위하여 현재 정부가 장려하고 있는 해바라기 씨에 함유된 단백질을 택하여 고급단백질과의 비교 실험으로 그 대치가 가능한 가를 알아보기 위하여 이 실험에 착수하였다. 출산후 $40{\pm}5$일(日)된 Sprague-Dawley계(系) 흰쥐(male)를 15일간(日間) 저단백사료(기초사료)에 적응시킨 다음 체중이 $50{\sim}60\;g$ 인 36마리를 한 군당(群當) 9마리씩 표준사료군(casein첨가), 해바라기 유박30%첨가사료군, 해바라기 유박(油粕) 20%첨가사료군 및 저단백사료군(기초 사료군)의 4군(群)으로 나누어 7주간(週間)으로 사육하면서 사료섭취량, 체중증가율, 단백질효율, 사료효율, 휴식시대사율 그리고 실험최종일에 적혈구상 및 몇가지 장기중량을 측정하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 사료에 함유된 단백질이 질이 좋거나 함량이 많을수록 성장률 및 사료효율(7주간(週間)의 평균치(平均値))은 좋았고 체중 100g당(當) 1일(日) 사료섭취량은 반대로 적었다. 2. 단백질효율의 7주간(週間) 평균치(平均値)는 casein이 함유된 표준사료가 가장 좋았고 기타 사료에서는 비슷한 성적을 보였다. 3. 휴식시대사율은 사료의 종류가 달라도 의의 있는 변동(變動)을 나타내지 않았다. 4. 적혈구수, 혈색소량, 및 hematorcit치(値)는 사료에 함유된 단백질의 질이 좋거나 함량이 많을수록 좋은 성적을 나타내었으나 적혈구항수에는 유의차(有意差)가 없었다. 5. 실험최종일에 측정한 심장, 신장 및 비장의 무게(g/100g B.Wt.)는 각군간에 유의차가 없었으나 간장의 경우만 유박첨가사료군이 표준사료군과 저단백사료군보다 조금 낮은 성적을 보였다.
홍삼 정(精) 600 mg/Kg diet, 홍삼 분(粉) 1,200 mg/Kg diet, 홍삼 차(茶) 6,000 mg/Kg diet와 홍삼 정 기준군의 5배, 10배, 20배에 해당되는 양으로써, 홍삼 정 3.000 mg/Kg diet, 홍삼 정 6,000 mg/Kg diet, 홍삼 정 12,000 mg/Kg diet의 과량을 각각 정상 식이에 첨가하여 이유 후의 체중 $76{\sim}81\;g$정도의 Sprague-Dawley strain의 웅성(雄性) 백쥐 42마리를 6마리씩 7군으로 나누어 10주간 사육하였다. 10주 사육 후에 체중 증가율, 사료 효율, 장기무게 hematocrit value, serum cholesterol 농도, serum GOT, GPT 활성 등을 측정하여 정상식이군과 비교한 결과 체중 증가율, 시료 효율, 장기 무게, hematocrit value 등은 모두 정상 식이군에 비해서 실험군이 통계적인 유의차를 보이지 않았으며, S-cholesterol 농도 및 S-GPT 활성은 실험군이 정상 식이군에 비해 다소 낮은 경향이였으나, 통계적인 유의차는 없었고, S-GOT 활성은 홍삼 정 10배군 만이 대조군에 비해 유의적으로 낮았으나, 그의 모든 실험군은 정상 식이군에 비해 통계적으로 유의차가 없었다. 백쥐 각 군의 간, 신장, 비장등의 조직 세포를 검사한 결과 하등의 이상 조직을 발견하지 못하였다.
본 연구는 급원이 다른 n-3 지방산 섭취가 휜쥐에서 면역반응과 PGE$_2$ 및 LTB$_4$ 생성에 미치는 영항을 알아보기 위해 시도되었다. 실험동물은 생후 4주 정도의 Sp-rague-Dawley종 수컷을 사용하였으며 실험식 이를 4 주간 섭취 시 킨 후 희생하여 면역 실험을 행하였다. 실험 군간의 식이 섭취량, 체중 증가량, 식이 효율, 비장무게는 유의적인 차이가 없었다. 비장세포의 ConA와 PWM에 대한 증식능력 실험 결과는 ConA의 경우, 대조군과 FO군의 증식비율은 비슷하였고 PO군이 약간 높게 나타났으나 유의적인 차이는 없었다. PW의 경우는 대조군 보다 FO군과 PO군이 높게 나타나 n-3 지방산을 섭취한 군들이 증식 능력이 높은 유의적인 차이를 보였다. 그리고 PGE$_2$의 농도는 대조군이 FO군과 PO군에 비해 유의적으로 높았으며, LTB$_4$의 농도는 실험군간의 차이가 나타나지 않았다. 그러므로 비장세포의 PWM에 대한 증식능력이 n-3 지방산을 섭취한 경우에 대조군보다 높았던 것이 PGE$_2$ 농도와 관련이 있는 것으로 보이며 들기름과 어유는 같은 정도의 효과를 가지는 것으로 나타났다.
질경이 추출물을 농축하여 동결 건조해서 실험동물인 SD계 수컷 흰쥐의 실험식이에 0.5% 수준으로 첨가하여 7주간 사육하면서 체중은 7일 간격으로 섭취는 2일 간격으로 오전 9시에 측정하였으며, 활성산소 및 항산화 활성 측정은 2회 측정하였다. 또한 실험이 종료된 후 실험동물을 단두 도살하여 혈청 중 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, 중성지방, 혈당, 인지질을 측정하여 지질함량에 미치는 영향을 측정 하였다. 질경이 추출물을 SD계 수컷 흰쥐 에 질경이 추출물이 함유된 식이를 급여 후 식이섭취량, 체중 증가량을 측정한 결과 질경이 추출물을 섭취한 rat이 대조군에 비해 모두 증가하였지만 군간 유의적 차이를 보이지 않았다. 질경이 추출물 급여 후 적출 된 실험동물의 장기에서 대조군과 실험군의 무게 차이는 보이지 않았다. 사육 기간동안 측정한 혈액 중 항산화에서는 7주째 질경이가 대조군에 비해 유의적으로 수치가 높게 나왔으며, 활성산소는 유의적인 차이를 보이지 않았다. 실험식이 종료 후 살험동물에서 적출한 장기의 무게를 측정한 결과 심장, 신장, 장, 간 모두 차이를 보이지 않았다. 또한, 혈청 중의 총콜레스테롤 함량 측정 결과 질경이 추출물 급여군이 대조군에 비해 낮은 함량을 나타내었고, HDL-콜레스테롤 함량에서는 대조군에 비해 높은 함량을 나타내었지만 유의적으로 증가하지는 않았다. HDL-cholesterol/Total cholesterol의 비율에서도 질경이 추출물 급여군이 유의적으로 증가하였다. LDL-cholesterol 함량은 질경이 추출물 급여군이 대조군에 비해 낮은 함량을 나타내었으나 유의적인 차이는 아니었다. 중성지방 함량은 질경이 추출물 급여군이 대조군에 비해 낮은 수치를 보였으며, 혈당 함량과 인지질 함량은 대조군에 비해 높은 수치였으나 유의적인 차이가 없었다. 이상에서와 같이 질경이 추출물 급여한 흰쥐를 이용한 동물실험에서 항산화능 및 혈청의 지질대사 개선 효과가 확인할 수 있었다. 이는 천연물의 조추출물을 이용한 기반연구로서 향후 질경이의 항산화 효과와 지질개선에 대한 분자생물학적 조직병리학적 후속연구가 필요하다고 사료되며, 이 연구의 결과를 바탕으로 질경이의 항산화 식품이나 지질개선 기능성 식품 소재로의 활용이 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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