• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제3권2호
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• pp.91-96
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• 1990

This experiment was designed to determine whether ${\alpha}$-aminoisobutyric acid (AIB) can be used to predict membrane function of spermatozoa by measuring the uptake of AIB by fresh, stored and frozen-thawed rooster spermatozoa. When spermatozoa were stored at low temperature ($0{\sim}3^{\circ}C$) for 24 h. no difference was found in AIB uptake compared with fresh spermatozoa, whereas storage for 48 h resulted in a slight increase in AIB uptake by spermatozoa. On the one hand, the uptake of AIB by frozen-thawed spermatozoa was less than that by fresh spermatozoa. This suggests possibility of a different membrane transport system between spermatozoa preserved at low temperature ($0{\sim}3^{\circ}C$) and those frozen-thawed. Glycerol used as cryoprotectant may modify rooster sperm membrane in a different manner from cold preservation. Ouabaine ($10^{-4}M$) caused a slight decrease in AIB uptake, but caffeine ($10^{-2}M$) did not influence spermatozoal AIB uptake. These results indicate a successful application of AIB to rooster spermatozoa as a mean for measuring sperm membrane function and suggest a possible alteration of membrane transport system in rooster spermatozoa between cold ($0{\sim}3^{\circ}C$) and cryopreservation ($-196^{\circ}C$).

• 한국동물학회지
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• 제36권1호
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• pp.51-66
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• 1993

한국산 관박쥐(Rhinolophusfemmequinum koran의 웅성생식 pattern을 알아보기 위하여, 1년 주기를 통한 정소상체 이부로의 정자유입, 정자저장 및 정자소멸에 따른 상피세포와의 상관관계를 조사하여, 다음과 같은 결론을 얻었다. 정소로부터 정자유입과 정자저장 및 정자소멸에 관련하여 볼때, 정소상체 미부는 2단계의 정화기간(cleaning time)을 가진다. 첫째로, 동면 각성시기인 4월부터 6월까지는 오래된 저장정자를 파괴시켜 새로운 정자를 받아들이기 위한 준비단계로서 둘째로, 정차과정은 7월에서 8월까지 계속되는[tl 이는 7월부터 새로운 정자와 함께 유임된 기형 정자세포,기형 정자 및 기타 잔여 노페물질을 제거하여 성숙된 정자만을 보유함으로서 곧 교미기를 맞이하기 위한 준비단계로서 정화기간을 가진다. 따라서, 1년 주기를 통한 정소상체 이부의 정화기간은 동면 각성기인 4월부터 8월까지 약 5개월에 걸쳐 이루어진다. 한편, 교미가 끝난 11월부터 동면기를 거쳐 동연 각성기 전까지의 긴 기간동안에 정소상체 미부내의 저장된 정자는 급격한 변화를 가져오지 않았다. 이는 동면동안의 낮은 물질대사율과 관련이 있다고 생각된다. 이상의 결과로 미루어 보아 정자유입, 정자저장 및 정자소멸에 따른 정소상체 미부의 조직변화는 정소상체 미부내 상피세포의 분비 및 흡수의 조절작용에 의해 변학되는것이라 여겨진다.

• 한국가축번식학회지
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• 제20권2호
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• pp.101-109
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• 1996

본 연구는 돼지 액상정액을 인공수정용 100ml 플라스틱 병에 보존하면서 Lactose-Egg yolk 희석액과 B tschwiler 희석액 간에 보존 온도별 차이를 조사하고, Lactose-Egg yolk 희석액에서의 글리세롤 농도의 효과를 조사하여 돼지 액상정액을 좀더 장기간 사용할 수 있는 방법을 찾고자 실시하였다. 돼지 액상정액을 5$^{\circ}C$ 냉장고에 보존하면서조사한 바에 의하면, 37$^{\circ}C$에서 0.5 및 2시간 배양 후의 정자 운동성은 전체 보존기간동안 Lactose-Egg yolk 희석액이 B tschwiler 희석액보다 유의하게 (P,0.05) 높게 나타났고, 정상첨체비율은 두 희석액간에 차이가 없었다. 돼지 액상정액을 15$^{\circ}C$에 보존하면서 조사한 바에 의하면, 3일부터 7일 보존시까지 정자 운동성과 정상첨체비율에 있어서 B tschwiler 희석액이 Lactose-Egg yolk 희석액보다 유의하데 높게 나타났다. Lactose-Egg yolk 희석액을 이용한 돼지 액상정액의 글리세롤 농도의 효과에 있어서는 최종 글리세롤 농도가 0, 1, 3 및 5%보다 2%일 때 가장 높은 정자 운동성과 정상첨체비유을 나타내었다. 분만율, 복당 생존자돈수 그리고 출생시 평균 생시체중은 Lactose-Egg yolk 희석액과 B tschwiler 희석액간에 차이가 없었다. 이상의 연구 결과를 종합해 볼 때 Lactose-Egg yolk 희석액은 5$^{\circ}C$에서 B tschwiler 희석액은 15$^{\circ}C$에서 6~7일 동안 돼지 액상정액을 보존할 수 있었다.

• 대한수의학회지
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• 제31권1호
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• pp.11-18
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• 1991

The purpose of this study was designed to investigate the methods for the functional elevations of sperm-host (utero-vaginal, U-V) glands in domestic hens. The laying hens were assigned to five groups of low-, medium-, high- fecundity, gonadotrophin-, and caffeinetreated hen groups, these group hens were sacrified at interval after last artificial inseminations (AI). Number of U-V gland observed in tissue preparation of each hen U-V region were investigated, and also the appearance rates of spermatozoa-contained U-V glands were calculated. 1. In low-fecundity hen groups, the appearance rates of spermatozoa-contained U-V glands were found to be 13.5, 15.6, 11.8, 13.6, 2.3, 0, and 0% respectively at the hens of 1, 3, 7, 10, 13, 16, and 19 days after AI. 2. In medium-fecunditiy hen groups, the appearance rates of spermatozoa-contained U-V glands were found to be 21.7, 22.7, 13.4, 10.4, 10.0, 7.7 and 0% respectively at the hens of 1, 3, 7, 10, 13, 16, and 19 days after AI. 3. In high-fecundity hen groups, the appearance rates of spermatozoa-contained U-V glands were found to be 30.8, 31.8, 28.9, 13.0, 10.3, 10.8, and 0.9 respectively at the hen of 1, 3, 7, 10, 13, 16, and 19 days after AI. 4. In gonadotrophin-treated hen groups, the appearance rates of spermatozoa-contained U-V glands were found to be 31.8, 33.7, 32.3, 17.3, 12.0, 5.0, and 1.0% respectively at hens of 1, 3, 7, 10, 13, 16, and 19 days after AI. 5. In caffeine-treated hen groups, the appearance rates of spermatozoa-contained U-V glands were found to be 33.2, 29.2, 22.4, 17.8, 12.7, 0, and 1.1% respectively at hens of 1, 3, 7, 10, 13, 16, and 19 days after AI. 6. The appearance rates of completely filled U-V glands and partially filled U-V glands of spermatozoa-contained U-V glands were found to be 3.8:1. So we suggested as follows: The appearance rates of spermatozoa-contained glands tend to be high from 1 day after AI to 7 days and tend to declined rapidly from 10 days. Also higher fecundity hen groups tend to be higher in the appearance rates and longer in spermatozoa-contained duration in U-V glands than in lower fecundity hen groups. Gonadotrophin hormone tend to increase the appearance rates of spermatozoa-contained U-V glands than those in control group, whereas caffeine tend to increase those rates at 1 day and to declined more rapidly from 3 day than in control group.

• 한국가축번식학회지
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• 제26권1호
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• pp.1-7
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• 2002

본 연구는 mTCM-199, mWaymouth MB 752/1 그리고 NCSU-23 성숙배지에서 성숙시킨 난포란을 mTBM 수정배지에서 액상정액의 정자를 이용하여 주입정자 농도별로 체외 수정시킴으로써 액상정액을 이용한 새로운 체외수정 방법을 개발하고자 실시하였다. 미성숙 난포란은 0.5 $m\ell$의 성숙배지에 각 well 당 30~40개씩 적하하였다. 액상정액 제조용 정액은 90% 이상의 운동성을 가진 농후정자부분을 사용하였으며 정액채취 후 2시간 동안에 22~24$^{\circ}C$의 실온까지 냉각시켰다. 실온까지 냉각한 정액은 BTS 희석액으로 2$\times$$10^{8}$ $m\ell$ 정자농도로 조정하여 100$m\ell$ 플라스틱병에 30 $m\ell$씩 주입하여 17$^{\circ}C$에서 5일 보관하였다. 5일 보관후 운동성이 70% 이상인 정자를 체외수정에 이용하였다. 38.5$^{\circ}C$, 5% $CO_2$, 95% 공기로 조절된 CO2 배양기에서 44시간 성숙 후 cumulus cell들이 제거된 성숙 난포란은 0.5 $m\ell$의 mTBM 수정배지에 30~40개씩 적하하고 최종정자농도를 1, 2, 4, 6 그리고 10$\times$$10^{6}$$m\ell$되도록하여 주입하고 6시간 동안 수정시켰다. 체외수정시킨 수정란들은 수정 후 6시간 동안 0.5$m\ell$의 NCSU-23 배양배지에서 배양한 후 정자침입율, 다정자침입율 그리고 웅성전핵 형성율을 조사하였다. mTCM-199, mWaymouth MB 752/1 그리고 NCSU­23 성숙배지에서 성숙시킨 난포란을 mTBM 수정배지에서 액상정 액으로 체외수정 한 결과 NCSU-23 성숙배지에서 성숙한 난포란이 웅성전핵형성율이 높았고 다정자침입율이 낮았다. NCSU-23 성숙배지에서 성숙한 난포란을 mTBM 수정배지에서 수정할 경우 최적정자농도는 2~4$\times$$10^{6}$$m\ell$이었으며, 정자침입율은 50.8~50.9%, 다정자침입율은 13.3~19.5% 그리고 웅성전핵형 성율은 43.9~45.4%였다. 결론적으로 NCSU-23 성숙배지에서 성숙되고 mTBM 수정배지에서 수정된 난포란은 mTCM-199이나 mWaymouth MB 752/1 성숙배지에서 성숙되고 mTBM 수정배지에서 수정된 난포란보다 우수한 체외수정 결과를 나타내었다. 17$^{\circ}C$에서 5일 동안 보존한 액상정액으로 NCSU-23 배지에서 성숙한 난포란을 체외수정하기 위한 최적정자농도는 2~4$\times$$10^{6}$$m\ell$이었다.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제21권9호
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• pp.57-63
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• 2020

말 정자의 첨체 손상도를 간단하게 분석하는 기술을 개발하기 위하여 Coomassie brilliant blue G 또는 R 염색 시약을 이용하여 정자 도말 슬라이드에 대한 염색도를 조사하였고, 3.7% paraformaldehyde (PF)과 35% methanol (MT) 고정제가 첨체 염색에 미치는 영향을 연구하였다. PF로 고정한 후 말 정자 도말 슬라이드를 0.05, 0.1 및 0.2 % 농도 CBB에 각 2분간 염색을 실시하여 첨체를 관찰하면 0.05%의 경우 완전한 첨체 염색도가 G형에서 62.6%, R형은 61.5%로 관찰되었으나, 0.1 및 0.2%의 경우, 80.2 및 79.7%로 (G 형), 78.1 및 76.0%로 (R 형) 관찰되어 유의적 차이가 나타났다. 그러나 MT 고정제를 이용할 경우, 첨체 외막이 느슨해진 정자의 비율은 3.5%로 관찰되어 PF 고정제를 사용하면 9.0%로 관찰되어 유의적으로 낮게 관찰되었다. 이러한 결과는 말정자첨체손상도를 관찰하기 위하여 CBB G 또는 R형 염색시약을 0.1~0.2% 농도로 이용될 수 있음을 증명한다. 또한, 말 정자 슬라이드 도말을 고정하는데 있어 고정제의 선택이 중요하며 MT보다 PF를 활용하는 것이 첨체 변화 과정 중인 정자를 관찰하는데 중요하다는 보여 준다. 이러한 방법은 말의 인공수정을 위한 정액의 저온저장 또는 동결보존과정 중에서 정자첨체손상율을 정확하게 판별하는데 이용될 수 있음을 증명한다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제39권4호
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• pp.117-125
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• 2015

Iron is required for cell viability but is toxic in excess. While the iron-mediated malfunction of testicular cells is well appreciated, the underlying mechanism(s) of this effect and its relationship with fertility are poorly understood. Ferritin is a ubiquitous intracellular protein that controls iron storage, ferroxidase activity, immune response, and stress response in cells. Ferritin light chain protein (FTL) is the light subunit of the Ferritin. Previously, we had identified the FTL in bovine spermatozoa following capacitation. In present study, to investigate the role of Ferritin in sperm function, mice spermatozoa were incubated with multiple doses (1, 10 and $100{\mu}M$) of sodium nitroprusside (SNP), an iron donor. SNP was increased Ferritin levels in a dose-dependent manner. The Ferritin was detected on the acrosome in spermatozoa by immunocytochemistry. Short-term exposure of spermatozoa to SNP increased tyrosine phosphorylation and the acrosome reaction (AR). Finally, SNP affected a significant decrease in the rate of fertilization as well as blastocyst formation during early embryonic development. On the basis of these results, we propose that the effects of Ferritin on the AR may reduce overall sperm function leads to poor fertility in males and compromised embryonic development.

• Animal Bioscience
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• 제34권2호
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• pp.198-204
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• 2021

Objective: The aim of this study was to ascertain the effects of adding green tea extract (GTE) to skim milk-egg yolk (SM-EY) extender on both the quality of post-thawed bull semen and the pregnancy rates of the recipient cows. Methods: Twelve ejaculates from four Simmental bulls, aged 3 to 5 years and weighing 900 to 950 kg, were diluted SM-EY extender, added with 0, 0.05, 0.1, and 0.15 mg GTE/100 mL extender and then frozen. After four weeks storage in liquid nitrogen, the sperm were thawed and evaluated for viability, motility, intact plasma membrane (IPM), and DNA fragmentation. Meanwhile, the estrus cycles of 48 recipient cows were synchronized by intramuscular administration of a single injection of 5 mg prostaglandin F2α. Estrus cows were divided into four equal groups and inseminated artificially 18 to 20 h after the onset of estrus by using semen from each extender group. Pregnancy was diagnosed by measuring serum progesterone levels at 21 days, followed by transrectal palpation 90 days after insemination. Results: The findings revealed that adding 0.1 mg of GTE/100 mL extender produced the highest percentages of sperm viability (70.67%±1.75%), motility (69.17%±1.47%), and IPM (69.23%±1.21%) and the lowest percentage of DNA fragmentation (3.00%±0.50%). The pregnancy diagnosis revealed that all cows (36/36) inseminated using frozen semen in GTE addition extender were pregnant (pregnancy rate 100%), whereas the pregnancy rate of the control group was 83.33% (10/12). Conclusion: It may be concluded that 0.1 mg GTE/100 mL extender yields the best quality of spermatozoa and that all variants doses of GTE in extender produce a higher pregnancy rate among recipient cows.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제24권10호
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• pp.1348-1357
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• 2011

The objective of this study was to compare the effect of Butylated Hydroxy Toluene (BHT), Pentoxifylline (PTX) and ${\alpha}$-tocopherol (Vit E) on semen quality parameters of Karan Fries bulls. The fortification of extender by various semen additives improves motility as well as fertility of spermatozoa. Split samples of 24 ejaculates of four Karan Fries bulls were extended in extender with or without various additives such as BHT, PTX and Vit E, and performance was evaluated at an interval of 0, 24, 48 and 72 h at refrigerated temperature (4-$7^{\circ}C$). Results of the present study revealed that addition of BHT, PTX and Vit E in extender improved sperm cell function, such as motility, viability, HOST, and acrosome integrity, as compared to the control during liquid storage up to 48 h of preservation at refrigerated temperature. There was no significant (p<0.05) difference between any of the additives up to 48 h of preservation. Overall, the results showed a significant (p<0.05) deterioration in motility after each storage interval. The results showed a significant deterioration in the acrosome integrity and plasma membrane integrity up to 48 h; subsequently, there was not much degradation of both the semen quality parameters. There was a significant increase in spermatozoal tail and total abnormality after each storage interval at refrigerator temperature (4 to $7^{\circ}C$); however, the head and mid-piece abnormalities were almost unaffected. Tail and total abnormality were least in extender fortified with BHT, PTX and Vit E at different hours of incubation as compared to the control. The addition of 1.5 mM BHT, 3.6 mM PTX and 1 mg/ml Vit E in the semen extender has more beneficial effect in terms of semen quality and preservability of spermatozoa.

• 한국가축번식학회지
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• 제26권1호
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• pp.17-23
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• 2002

본 연구는 지금까지 돼지 난포란 성숙을 위해서 많이 사용하고 있는 mTCM-199, mWaymouth MB 752/1 그리고 NCSU-23 성숙배지를 비교하고 액상정액을 이용한 체외수정 방법을 개발하고자 실시하였다. 미성숙 난포란은 0.5 $m\ell$의 성숙배지에 각 well 당 30~40개씩 적하하였고, 38.5$^{\circ}C$, 5% CO2, 95% 공기로 조절된 CO2 배양기에서 44시간 성숙 시켰다. 미성숙 난포란을 mTCM-199, mWaymouth MB 752/l 그리고 NCSU-23 성숙배지에서 44시간 배양한 결과 CVBD 발생율은 각각 95.6, 94.1 그리고 94.9%였으며, MH단계까지의 성숙율은 각각 92.5, 90.1 그리고 91.1%였다. 성숙배지별, GVBD 발생율과 MH까지의 성숙율간에 유의성은 인정되지 않았다. 액상정액의 제조용 정액은 90% 이상의 운동성을 가진 농후정자부분을 사용하였으며 정액 채취 후 2시간 동안에 22~24$^{\circ}C$의 실온까지 냉각시켰다.실온까지 냉각한 정액은 BTS 희석액으로 2$\times$$10^{8}$ $m\ell$ 정자농도로 조정하여 100 $m\ell$ 플라스틱병에 30 $m\ell$씩 주입하여 17$^{\circ}C$에서 5일간 보관하였다. 5일 보관 후 운동성이 70% 이상인 정자를 체외수정에 이용하였다. 성숙 후 cumulus cell들이 제거된 성숙난포란은 0.5 $m\ell$의 mTCM-199 또는mTBM 수정배지에 30~40개씩 적하하고, 최종정자농도를 2$\times$$10^{6}$$m\ell$되도록하여 6시간 동안 수정시켰다. 체외수정시킨 수정란들은 0.5 $m\ell$의 NCSU-23 배양배지에서 수정 후 6시간 배양하여 정자침입율, 다정자침입율 그리고 웅성전핵형성율을 조사하였고, 수정 후 45시간 배양하여 난할율을 조사하였다. NC-SU-23 성숙배지와 mTBM 수정배지를 이용하였을때 웅성전핵형성율이 48.0%로써 mTCM-199 성숙배지와 수정배지 또는 mWaymouth MB 752/1 성숙배지와 mTCM-199 수정배지를 이용하였을 때보다 웅성 전핵 형성율이 높았다. 2~4세포기까지의 난할율은 mTCM-199 성숙, 수정 및 배양배지에서 24.1%, mWaymouth 752/1 성숙배지, mTCM-199 수정 및 배양배지에서 43.6%, 그리고 NCSU-23 성숙배지, mTBM 수정배지 및 WCSU-23 배양배지를 이용한 것이 71.2%였다. 이상의 결과를 종합하면 BTS 희석액으로 17$^{\circ}C$에서 5일 보존한 액상정액으로 체외수정이 가능함을 입증하였고, NCSU-23 성숙배지, mTBM 수정배지 및 NCSU-223 배지가 미성숙 난포란의 성숙, 수정 및 배양에 우수한 배지임을 입증하였다.