Efficient protocol for plant shoot regeneration of Brassica juncea L. CZERN was established by using organic media components and growth stimulating factors of the vermicompost and coelomic fluids. Formulated organic plant tissue culture media (Vermicompost (30%) extracts supplemented with 20 mL/L coelomic fluid) have shown maximum shoot regeneration when compared with the Murashige and Skoog (MS) medium, which were supplemented with 1 mg/L 6-benzyladenine (BA) and 0.1 mg/L of Naphthaleneacetic acid (NAA). Cotyledon explants produced the highest shoot regeneration frequency from fourday-old germinated seedlings in comparison with non-germinated seedlings. The vermicompost extracts have proved to be the best organic plant growth media to induce shoots from cotyledons compared to the MS media. Statistically significant difference (P = 0.008) for the root length, shoot length (P=0.000350) and the leaves (P=0.375) of the mustard plantlets were analyzed successfully. The survival rate was 98% in the mustard cotyledons on the Vermicompost extract media and 63% on MS media respectively. The coelomic fluid also is much suitable to induce shoots from cotyledons at lower concentrations. It was also shown that the vermicompost extract, which comprised of humic acids along with coelomic fluid, affected shoot regeneration from the cotyledons. An efficient and organic shoot regeneration study was standardized and it can be applicable in the improvement of the economically important crops.
Plantlet regeneration from the shoot apex was studied in three different genotypes of the chinese yam (Dioscorea opposita Thunb) cv. Jnagma and Danma, Dunggunma. The effects of plant growth regulators and inorganic salts concentration of the culture medium on bud induction and shoot growth were examined. The combinations of 0.2 mg/L BAP + 0.2mg/L kinetin, 0.01mg/L NAA + 0.2 mg/L kinetin and a single treatment of 0.2mg/L BAP were equally effective for bud and shoot formation from the shoot apices in the three cultivars. Auxin (2,4-D, NAA) treatment enhanced calli formation from the cultured apices. Also, the shoot apices of the cv. Dunggunma produced more callus and buds on the culture medium (MS) containing 0.05mg/L NAA and 0.5-1.0mg/L SAP. Lower salt strength of medium inhibited shoot elongation but did not have much effect on the shoot and bud induction from the shoot apices. These results will be useful to obtain disease-free plants of the Chinese yam.
생장점배양하여 얻어진 소수의 식물체를 기내 재배양하여 건전 우량마늘을 대량으로 증식시킬 수 있었다. MS 기본배지에 서당 8%, NAA 0.1 mg.L 첨가된 배지에 지엽을 뚫고 나온 직후의 주아 생장점을 5월 중순에 치상하면 shoot의 형성 없이 기내인경이 직접 형성되어 배양 기간 및 노력을 절약할 수 있었다. 또한 총포 내의 미숙주아 및 receptacle을 6월 상순경에 0.1 mg/L NAA+2mg/L BA 혹은 1 mg/L NAA + 10 mg/L BA가 첨가된 MS 기본배지에 배양하면 multiple shoot가 유도되었다. 특히 여러 화기 재료중 receptacle에서 평균 5.8개의 shoot가 분화되어 1개의 총포 내에서 50개 이상 분화되었다. 따라서 총포배양에 의한 식물체 생산은 우량마늘의 대량번식 체계의 한 수단으로 이용할 수 있었다.
지황 기내 식물체의 줄기 조직을 재료로 생물반응기에서 부정아 발생 과정을 통하여 기내 종묘를 생산하기 위해 본 실험을 수행하였다. 공기부양형 생물반응기가 교반형에 생물반응기의비해 신초 형성에 유리하였다. 2.5L 규모의 생물반응기에서 적절한 배양 밀도는 배지 1.5L에 시료 50g(줄기절편 90개)이었고, 이 때 공기의 주입량은 0.5 v.v.m으로 조절하는 것이 효과적이었다. 신초의 생산 효율을 높이기 위해 배지에 pH 완충제인 MES를 첨가한 결과, 생성된 신초의 수가 증가하였다. 유리화 억제제를 5g/1의 농도로 배지에 첨가하였을 경우 신초의 유리화 현상이 뚜렷하게 억제됨과 동시에 신초의 형성도 증가되었다.
당근의 기내 증식에 있어서 계대배양을 반복하더라도 분열능과 재분화능에 차이가 없고 변이가 생기지 않는 순 원기배양법을 확립코자 하였다. 엽 원기 2개가 붙은 경정조직을 BA 2.0 mg/L 와 NAA 0.2 mg/L 를 첨가한 MS 기본 액체배지에 치상하고 24시간 강한 광선 아래 2rpm으로 수직 회전배양하였을 때 순 원기가 유기되고 덩어리로 자라났다. 순 원기 유기는 공여친의 유전자형과 재배 계절 및 발육단계의 영향을 거의 받지 않는 것으로 판단되었다. 이 순 원기 덩어리는 사방 2~3 mm정도의 크기로 순 원기가 유기된 배지에 계대배양 하였을때 잘 증식되었는데 표면에 작은 신초를 가진 것과 그렇지 않은 것, 그리고 캘러스의 3가지 형태로 분화하였다. 표면에 작은 신초를 가진 것이 역시 표면에 작은 신초를 가진 순 원기 덩어리로 증식되었다. 이 표면에 작은 신초를 가진 것이 1/2MS 기본배지에 KN 0.2-1.0 mg/L 과 IAA 0.2~1.0 mg/L 를 첨가한 고체배지에서 주로 식물체로 잘 분화하였다. 일단 순 원기가 유기되어 덩어리를 형성한 후에는 1년 동안에 8.7$\times$$10^{12}$개의 비율로 증식될 수 있을 것으로 계산되었다. 그리고 13번의 계대배양 후에도 증식능에 차이가 없었으며 염색체상의 이상도 없었다.
Potato virus Y (PVY) and potato leafroll virus (PLRV) are among the most damaging potato viruses and prevalent in most potato growing areas. In this study, cryopreservation was used to eradicate PVY and PLRV using two cryogenic methods. Potato shoot tips proliferated in vitro were cryopreserved through droplet-vitrification and encapsulation-vitrification using plant vitrification solution 2 (PVS2; 30% glycerol + 15% dimethyl sulfoxide + 15.0% ethylene glycol + 13.7% sucrose) and modified PVS2. Both cryogenic procedures produced similar rates of survival and regrowth, which were lower than those from shoot tip culture alone. The health status of plantlets regenerated from shoot tip culture alone and cryopreservation was checked by reverse transcription-polymerase chain reaction. The frequency of virus-free plants regenerated directly from highly proliferating shoot tips reached 42.3% and 48.6% for PVY and PLRV, respectively. In comparison, the frequency of PVY and PLRV eradication after cryopreservation was 91.3~99.7% following shoot-tip culture. The highest cryopreserved shoot tip regeneration rate was observed when shoot tips were 1.0~1.5 mm in length, but virus eradication rates were very similar (96.4~99.7%), regardless of shoot tip size. This efficient cryotherapy protocol developed to eliminate viruses can also be used to prepare potato material for safe long-term preservation and the production of virus-free plants.
몇 가지 종류의 배지첨가물이 재분화가 어려운 것으로 알려져 있는 감자 애틀란틱품종의 잎 절편 배양시 shoot 형성에 미치는 영향을 조사하였다. 카세인 가수분해물은 2 g/L 농도가 재분화에 효과적이었으며 AgNO$_3$는 10-20 $\mu$M농도에서 재분화가 잘되었고 잎 절편도 갈변되지 않고 푸르게 유지되었는데 이것은 AgNO$_3$가 에틸렌 발생을 효과적으로 억제했기 때문으로 생각된다. Sucrose는 3%보다 낮은 농도에서 shoot 유기가 효과적이었고 CuSO$_4$는 애틀란틱품종 감자 잎 절편으로부터 식물체 재분화에 영향을 주지 못하였다.
To make fermented bamboo shoot liquid, we isolated and classified a microorganism growing in bamboo shoot and investigated its quality characteristics. Crude fiber, crude ash, nitrogen-free extracts, and total sugar contents were higher after fermentation. For free amino acids, only alanine was detected in the control group. Detected 13 kinds of free amino acids were detected in fermented bamboo shoot liquid. In organoleptic test, fermented bamboo shoot beverage containing 20 percent strawberry showed the highest consumer preference.
콩에서의 조직배양 가능성을 알아보고자 콩 유묘를 기내에서 배양시킨 뒤, 여러 부위를 채취하여 각기 다른 배지 치상한 결과는 다음과 같다. 1. 줄기정단조직 배양에서는 대부분 shoot가 분화되어 완전한 식물체를 얻을 수 있었다. 2. 자엽절 조직배양에서는 multiple shoots가 나타나 대량증식에 유용했으나 배지에 따른 영향이 컸다. 3. 배축 및 상배축 조직배양에서는 callus만 분화되엇다. 4. 엽조직배양에서는 callus 분화 후 계대배양했을 때 shoot가 분화되었으나 완전한 식물체를 얻기는 힘들었다.
사과나무 교배잡종 (P.16 $\times$ M. prunifolia)의 자엽과 배축 조직을 배양하여 신초의 재분화에 미치는 2,4-D, NAA 키네틴, BA, thidiazuron의 처리효과를 조사하였다. 자엽조직은 1.0 mg/L+ NAA +2.0 mg/L BA 처리구에서, 배축조직은 0.5 mg/L NAA+0.5mg/L BA처리구에서 가장 많은 수의 신초가 분화하였으며, BA 무첨가구에서는 신초의 재분화가 전혀 이루어지지 않았다. 자엽조직보다는 배축조직을 배양하는 것이 더 효과적이었으며 특히, 배축의 상위부분을 치상하였을때 신초 재분화가 더 양호하였다. 재분화된 신초를 1/2 MS에 1.0mg/L NAA를 첨가한 발근배지에 계대배양한 결과 발근이 양호하였으며 정상적인 식물체로 생장하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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