접착 세포용으로 가장 많이 쓰이고 있는 미립 담체들의 다섯가지 종류를 소 혈청, 말 혈청 및 무 혈청 배지에 섬유 세포를 배양한 결과 collagen으로 싸여진 CytodexIII이 가장 좋은 접착성을 나타냈으며, 세포 성장 및 TPA 생산성도 우수했다. 소 혈청을 함유한 배지가 95%의 가장 좋은 접착율을 나타냈으며 무혈청 배지가 75%로 낮은 접착도를 보였다. 하지만 연속 배양(Perfusion Chemostat)시 TPA의 생산성은 말 혈청을 함유한 배지 및 무 혈청 배지가 각각 $1.2\;\mu\textrm{g}/\;ml,\;$$$0.7\mu\textrm{g}/\;ml$으로 더 높았으며, 이때 세포의 농도는 각각 $5.5{\times}10^6cells\;/mL$와 $0.7{\times}10^6cells\;/mL$였다.
The analysis of serum free light chains (sFLCs) can improve the diagnosis and monitoring of multiple myeloma and other plasma cell dyscrasias. As with other immunoassays, sFLCstests are subject to potential antigen excess and heterophilic antibody interference. We describe 9 cases of sFLCs antigen excess in patients with multiple myeloma using the FreeliteTM Human Kappa and Lambda Free Kits (The Binding Site ltd., Birmingham, UK) and the Hitachi7600 P module turbidimetric system. A total of 1,247 consecutive samples from 250 patients with multiple myeloma were assayed for sFLCs from April to September, 2009. The samples were assayed using an initial dilution of 1 :5and subsequent dilutions of 1 :50 and 1: 100. The same samples were analyzed for the presence of monoclonal gammopathies using serum protein electrophoresis (SPE) and immunofixation electrophoresis (IFE). There were 9 samples (0.72%) of antigen excess with 3 cases of kappa (0.24%) and 6 cases of lambda (0.48%). These cases represents an example of antigen excess or "hook effect" using the serum free light chain assays and mandates high level of attention to falsely low sFLC levels due to antigen excess, especially when it is disaccordant to other assay results or clinical manifestations.
생육 인자가 들어있지 않은 순수한 무혈청 배지에서 생육이 불가능한 사람 세포인fibroblasts를 배양한 배양액과 혼합된 배지를 연속적으로 희석 배양하는 방법으로 4계대를 거친 후에 순수 무혈청 배지에서 생육이 가능한 상태로 적응 시켰다. 이 세포는 순수 무혈청 배지에서 배수 증식기를 약 5일로 유지하며 지속적으로 성장했다. 이같은 생육 속도는 혈청이 포함된 배지에서 보다 느리지만 scu-PA 생산양은 890(1U/mL)로서 5%혈청이 포함된 배지에서1100(1U/mL)와 비교해 그리 큰 차이는 없다. 또한 적응된 세포의 bioreactor로의 scale-up때 초기 접종시 혼합 배지를 사용해 접착성을 향상 시킨 후에는 무 혈청 배지로 성장이 가능했으며, 생육 및 물질 생산성은 회분 배양시 최대 세포수가$8.5{\times}10^5$(viable cell/mL)와 약 6.5일의 배수 증식 속도로 혈청이 포함된 경우보다 낮지만 약 830(1U/mL)의 scu-PA를 생산해 물질 생산은 상대적으로 높아 단백질이 전혀 없는 무혈청 배지에서 경제적 생산 및 분리 수율의 향상이 가능하다. 또한 수수 무혈청 배지로 회분배양해 0.106(1/day)의 비 생육 속도와$1.5{\tines}10^{-5}$(1U/cell/day)의 비생산 속도를 얻었다. HEK sub. 6-SF 세포주의 보다 정확한 산업적 응용의 타당성 확인을 위해 차기 연구로 무혈청 배지에 적응된 세포주의 연속 배양에 의한 세포 생육 및 물질 생산성을 검토해야 할것이다.
To enhance the performance of a serum-free medium (SFM) for human thrombopoietin (hTPO) production in suspension cultures of recombinant Chinese hamster ovary (rCHO) cells, several low-cost hydrolysates such as yeast hydrolysate (YH), soy hydrolysate, wheat gluten hydrolysate and rice hydrolysate were tested as medium additives. Among various hydrolysates tested, the positive effect of YH on hTPO production was most significant. When 5 g/L YH was added to SFM, the maximum hTPO concentration in batch culture was 40.41 ${\mu}g/mL$, which is 11.5 times higher than that in SFM without YH supplementation. This enhanced hTPO production in YH-supplemented SFM was obtained by the combined effect of enhanced $q_{hTPO}$ and increased culture longevity. In addition YH supplementation did not affect in vivo biological activity of hTPO. Taken together, the results obtained demonstrate the potential of YH as a medium additive for hTPO production in serum-free suspension cultures of rCHO cells.
In order to determine the effect of Sopungchukdamtang experimental studies were performed in Hyperlipidemia Rats. The contents of serum Total cholesterol, Triglyceride, Free fatty acid, Phospholipid, HDL-cholesterol and LDL-cholesterol were measured The results were summarized as follows; 1. The content of Total cholesterol in the serum compared with control group tended to be decreased in Sopungchukdamtang(34mg/l00g) group, but did not show a significance. Sopungchukdamtang (17mg/l00g) group showed a significant value. 2. The content of Triglyceride in the serum compared with control group tended to be decreased in Sopungchukdamtang(17mg/l00g) group and Sopungchukdamtang(34mg/l00g) group, but did not show a significance. 3. The content of Free fatty acid in the serum was significantly decreased in Sopungchukdamtang(17mg/l00g) group and Sopungchukdamtang(34mg/l00g) group. 4. The content of Phospholipid in the serum compared with control group tended. to be decreased in Sopungchukdamtang(34mg/l00g) group, but did not show a significance. Sopungchukdamtang(17mg/l00g) group showed a significant value. 5. The content of HDL-cholesterol in the serum compared with control group tended to be increased in Sopungchukdamtang(17mg/l00g) group, but did not show a significance. Sopungchukdamtang(34mg/l00g) group showed a significant value. 6. The content of LDL-cholesterol in the serum compared with control group tended to be decreased in Sopungchukdamtang(34mg/l00g) group, but did not show a significance. Sopungchukdamtang(17mg/100g) group showed a significant value. According to the above results, it is assumed that Sopungchukdam-tang has a valid effect on Hyperlipidemia.
The purpose of this study was designed to observe the effects of the feeding Cynanchum wilfordii extract on the improvement of the blood glucose, lipid components in the serum of dietary hyperlipidemic and streptozotocin(STZ) -induced diabetic rats(S.D. strain, ♂) fed the experimental diets for 5 weeks. Concentrations of total cholesterol, atherosclerotic index, LDL, LDL-Cholesterol, free-cholesterol. cholesteryl ester, TG, PL and blood glucose in serum were significantly higher in the cholesterol administration groups((group 2(cholesterol+water), 4(cholesterol+Cynanchum WIlfordii 3.5g% extract)) than those in the control group (group1 , basal diet+water). But the concentrations of total cholesterol. atherosclerotic index, LDL, LDL- cholesterol. free-cholesterol, cholesteryl ester, TG, PL and blood glucose in serum were remakably lower in the group 4 than those in the group 2. In the STZ(55mg/kg B.W.)-induced diabetic groups((group 3(STZ, IP.)+water), 5(STZ(IP.)+Cynanchum WIlfordii 3.5g% extract? the serum total cholesterol, atherosclerotic index, LDL, LDL-cholesterol, free-cholesterol. cholesteryl ester, TG, PL and blood glucose concentrations actions were rather lower in the group 5 than those in the group 3. In the ratio of HDL -cholesterol concentration to total cholesterol and HDL-cholesterol concentration, Cynanchum wilfordii extract administration groups were higher percentage than III the groups 2 and 3. The activities of aspartate aminotransferase(AST), alanine aminotransferase(ALT), alkaline phosphatase (ALP) and lactate dehydrogenase(LDH) in serum were rather lower in the Cynanchum wllfordii extract administration groups (group 4,5) than in the cholesterol diet group(group 2) and STZ-induced diabetic group (group 3). From the above research, the physiological activity substances in Cynanchum wllfordii were effective on the improvement of the blood glucose, lipid compositions in serum of dietary hyperlipidemic and STZ-induced diabetic rats. And particularly, physiological activity substance in Cynanchum wilfordii was more effective therapeutic regimen for the control of metabolic derangements in adult disease.
본 연구에서는 레트로바이러스 생산 세포인 CRIP/LacZ 세포의 배양시에 혈청의 역할을 대체 할 수 있는 여러 첨가불을 선정하고 그 농도를 정하는 실험올 수행하여, 레트로바이러 스 생산을 워한 무혈청 배지를 개발하였다. 그 결과 DMEM 을 기본배지로 하고 insulin, transfenin, BSA, EGF and linoleic acid를 포함한 무혈청 배지를 개발하였다. 이를 충전 층 연속배양기흘 이용한 레트로바이러스의 연속생산 실험에 본 결과 $6-7\times10^4 cfu/ml$서 수율을 가진 레트로바이러스를 약 8일간 생산할 수 있었다. 충전층 연속반응기에서도 T -flask와 같이 온도의 영향이 매우 중요하였고 $32^{circ}C$, 에서 가 장 높은 수율회 레트로바이러스를 생산할 수 있었다. 이는 레트로바이러스외 온도에 따흔 비활성속도가 바이러스 생산 수율에 매우 큰 영향음 마칩을 시사해 주논 결과이다. 또한 충전층 배양기에서 무혈청배지를 이용한 세포배양 시에는 무혈청배지 첨가물로 서1포 부착 물짚에 대한 연구가 필요하다고 생각된다.
Wang, Bi;Yu, Lei;Yang, Guo-Zhen;Luo, Xin;Huang, Lin
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제16권7호
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pp.3003-3007
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2015
Objective: To explore the application of multiplex nested methylated specific polymerase chain reaction (PCR) in the early diagnosis of epithelial ovarian carcinoma (EOC). Materials and Methods: Serum and fresh tissue samples were collected from 114 EOC patients. RUNX3, TFPI2 and OPCML served as target genes. Methylation levels of tissues were assessed by multiplex nested methylated specific PCR, the results being compared with those for carcinoma antigen 125 (CA125). Results: The serum free deoxyribose nucleic acid (DNA) methylation spectrum of EOC patients was completely contained in the DNA spectrum of cancer tissues, providing an accurate reflection of tumor DNA methylation conditions. Serum levels of CA125 and free DNA methylation in the EOC group were evidently higher than those in benign lesion and control groups (p<0.05). Patients with early EOC had markedly lower serum CA125 than those with advanced EOC (p<0.05), but there was no significant difference in free DNA methylation (p>0.05). The sensitivity, specificity and positive predicative value (PPV) of multiplex nested methylated specific PCR were significantly higher for detection of all patients and those with early EOC than those for CA125 (p<0.05). In the detection of patients with advanced EOC, the PPV of CA125 detection was obviously lower than that of multiplex nested methylated specific PCR (p>0.05), but there was no significant difference in sensitivity (p>0.05). Conclusions: Serum free DNA methylation can be used as a biological marker for EOC and multiplex nested methylated specific PCR should be considered for early diagnosis since it can accurately determine tumor methylation conditions.
본 연구에서는 CHO 세포를 이용해 세포를 별도의 적응기간 없이 무혈청 배지에서 배양했을 때 세포의 증식이 중단되는 원인을 찾고 배지 첨가 성분을 통해 이를 개선하고자 했다. 현재 개발된 무혈청 배지는 아직까지 혈청을 대체할 만한 성분을 포함하고 있지 않다. 때문에 무혈청 배지에 적응되지 않은 비적응 세포의 경우 계대 배양에 한계가 있다. 이런 한계가 나타나는 원인은 다양할 것으로 생각이 되지만 혈청의 부재로 인해 세포가 받게 되는 스트레스와 그로 인한 세포주기의 정지가 가장 근본적인 원인으로 생각된다. 무혈청 배지에서 세포가 받는 스트레스의 정도를 알아보고 배양 환경과 첨가물에 따른 ROS 농도의 변화를 측정하기 위해 배지와 세포의 ROS 농도를 측정하였다. ROS 농도를 측정한 결과 무혈청 상태에서 세포내 ROS가 엄청난 양으로 증가하는 것을 알 수 있었다. 이것은 혈청이 항산화능력을 갖고 있어서가 아니라 세포가 무혈청 환경에서 극심한 스트레스상태에 놓이기 때문인 것으로 생각된다. 이렇듯 증가한 ROS가 세포의 증식이 멈추게 되는 원인 중 하나로 생각되고, 항산화제를 첨가한 경우에도 증식력이나 ROS의 농도에 큰 차이가 없었던 것으로 미루어 보아 근본적으로 혈청과 같은 강력하게 증식을 촉진하는 성분을 배지에 첨가해야 할 것으로 여겨진다. ROS 이외에 세포의 증식이 멈추는 또 다른 원인으로 세포사멸의 여부를 확인했다. 무혈청 배지에서 배양한 적응세포와 비적응 세포 모두 특별한 세포사멸의 징후가 나타나지 않았다. 또한 무혈청 배지에서 증식이 멈춘 세포를 회수해 다시 혈청배지에서 배양한 경우 곧바로 증식력이 회복되기 때문에 대규모의 세포사멸은 발생하지 않는 것으로 생각된다. 위와 같은 현상들은 모두 혈청이 없기 때문에 발생하는 것으로 혈청을 대체할 수 있는 첨가물을 배지에 더해주면 세포의 증식이 개선될 것이다. 그래서 몇 가지 첨가물을 이용해 세포의 증식력에 변화가 나타나는지 알아보았다. 첨가물을 이용한 실험에서 IGF-I의 경우 장기간 배양에서 세포의 수를 안정적으로 유지하고 계대 횟수를 증가시키는 효과를 보였다. 이는 IGF-I이 어느정도 세포의 증식을 유지시켜주는 역할을 하기 때문인 것으로 생각된다. 무혈청 배지에서 비적응 CHO 세포의 계대 배양에 한계가 있는 것은 세포주기가 멈추기 때문인 것으로 생각된다. 세포주기가 멈추는 growth factor와 같이 세포의 증식을 지속적으로 유도할 수 있는 물질이 무혈청 배지에서는 부족하기 때문인 것으로 생각되고, IGF-I과 같은 첨가물을 통해 극복할 수 있는 문제라고 여겨진다.
Sprague-Dawley 숫쥐에게 3.6%의 tryptophan 또는 tyrosine 보강 식이를 4일간 먹여 스트레스로 인한 혈청 cortisol, glucose, free gatty acid(ffa)수준 변화를 조사하였다. Trp-보강 식이를 먹은 쥐들은 혈청 및 뇌의 trp농도가 유의적으로(p<0.05) 증가하였고 cortisol과 ffa 수준은 정상 식이군과 같았으나 glucose는 유의적으로 낮았다. Trp- 보강 식이군이 stress를 받았을 때 혈청 cortisol 수준은 유의적으로 증가하였으나 정상식이군의 stress 반응 정도에는 미치치 못하는 유의적으로 낮은 증가 추세를 보였다. 또한 trp-보강 식이군의 혈청 glucose와 ffa 수준은 정상식이군과는 달리 스트레스로 인한 증가 현상이 나타나지 않았다. 이로서 Trp-보강 식이는 스트레스로 인한 대사적 교란(metabolic disturbance)를 방지하고, 뇌하수체-시상하부-부신 피질계를 통한 호르몬 반응의 강도를 줄이는 효과를 나타내었다. 한편 try-보강 식이를 먹은 쥐들은 혈청 try함량이 증가하였고 유의적이지는 않으나 전반적으로 낮은 cortisol 수준을 보였다. 이들의 giucose와 ffa농도는 정상 식이군과 비교해 차이가 없었다. Try-보강 식이군이 스트레스를 받으면 혈청 cortisol 수준에는 유의적인 변화가 없는 반면 glucose와 ffa함량은 정상 식이군과 동일하게 증가하였다. 즉 try보강 식이는 스트레스로 인한 대사적 교란을 방지할 수는 없었으나 시상하부-뇌하수체-부신 피질게를 통해 이루어지는 hormone 반응을 말소시킬 수 있는 것으로 보여진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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