• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제51권5호
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• pp.511-517
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• 2013

Species identification using DNA sequences is the basis for DNA taxonomy. In this study, we sequenced the ribosomal large-subunit RNA gene sequences (3,037-3,061 bp) in length of 13 Chinese Theileria stocks that were infective to cattle and sheep. The complete 28S rRNA gene is relatively difficult to amplify and its conserved region is not important for phylogenetic study. Therefore, we selected the D2-D3 region from the complete 28S rRNA sequences for phylogenetic analysis. Our analyses of 28S rRNA gene sequences showed that the 28S rRNA was useful as a phylogenetic marker for analyzing the relationships among Theileria spp. in ruminants. In addition, the D2-D3 region was a short segment that could be used instead of the whole 28S rRNA sequence during the phylogenetic analysis of Theileria, and it may be an ideal DNA barcode.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권2호
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• pp.96-105
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• 2005

공시균인 S. longwoodensis IFO 14251의 autoregulators 및 receptor gene 탐색의 일환으로 기존의 Streptomyces속 receptor gene의 공통배열을 primer로 이용하여 PCR을 수행하였다. 예상되는 100 bp 크기의 단편을 pUC19 vector에 ligation하여 E. coli $DH5{\alpha}$에 transformation한 후, plasmid를 분리하여 BamHI을 처리하여 $2\%$ agarose gel에 전기영동한 결과, pUC19 외에 receptor gene PCR product가 100 bp 위치에 존재하는 것을 확인하였다. 형질전환된 plasmid로 PCR을 수행한 후, 염기배열을 결정하여 분석한 결과, Streptomyces sp. 유래의 receptor gene의 일부분임이 확인되었다. 따라서 S. longwoodensis IFO 14251에는 lysocellin 생산에 관여한다고 추정되는 autoregulator receptor protein을 코드하는 유전자가 존재할 것으로 예상되어 100 bp의 PCR product를 probe로 이용하여 Southern 및 colony hybridization을 통하여 4.4 kb의 SphI 단편을 가지는 plasmid(pSLT)를 제작하였고 이를 sequencing한 결과, Streptomyces 속 유래의 autoregulator receptor 단백질을 코드하는 유전자와 3개의 open reading frame(651 bp)을 확인하여 sltR이라 명명하였다. 유전자 해석 결과, 기존의 autoregulator receptor proteins과 비교시 $35{\sim}46\%$의 homology를 나타내었다. 재조합 단백질의 발현을 위해, sltR/pET-l7b plasmid를 제작하고 E. coli BL21(DE3)/pLysS을 host cell로 이용하여 재조합 단백질을 발현시켰다. SltR 재조합 단백질의 정제는 DEAE-Sephacel column chromatography와 DEAE-5PW chromatography(HPLC)를 통해 수행하였다. Gel filtration chromatography(HPLC, 55 kDa)와 SDS-PAGE(28 kDa)를 통해 분자량을 확인한 결과, 재조합 단백질은 dimer형태로 존재하는 것으로 확인되었다. 또한, 결합활성에 있어 A-factor type의 autoregulator에 대해 가장 강한 결합활성을 나타내었다.

• Animal Systematics, Evolution and Diversity
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• 제35권1호
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• pp.33-36
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• 2019

The marine interstitial annelid Pharyngocirrus uchidai(Sasaki, 1981) has been only known from Japan. In this study, we report the occurrence of P. uchidai for the first time in four localities along the eastern coast of Korea: Bukmyeon, Gamchu, Gase, and Oeongchi. Species identification was confirmed by comparison of DNA barcoding sequences with morphological examination from the type locality, Oshoro, Japan. We generated a total of 25 sequences of a partial segment (580 bp) of the cytochrome c oxidase subunit I gene (COI), representing five specimens from each locality. Maximum intra-specific variation was 1.2% in terms of Kimura two-parameter (K2P) distance, observed between two individuals each from Gamchu (i.e., between two specimens from the single locality), Gamchu and Oeongchi, Gamchu and Oshoro, and Oeongchi and Oshoro. On the other hand, an identical haplotype was found in all the five localities, substantiating our species identification for the Korean populations. Inter-specific K2P distance between P. uchidai and an unidentified Saccocirrus sp. from Canada (based on public database entries) was 22.4-23.4%.

• 생명과학회지
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• 제15권1호
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• pp.45-48
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• 2005

서울대공원에서 사육중인 Miniature horse 10두의 혈통정립을 목적으로 PCR에 의한 성별 판정 및 16개 microsatellite marker를 사용하여 친자감정을 실시하였다. 성별 판정에서 430 bp의 SRY band가 관찰된 7두는 숫말로 판정되었고, 친자감정에서는 멘델의 유전양식에 부합된 3두가 친자관계가 확인되었다. 향후 Miniature horse의 혈통보존 및 관리에 유용한 자료가 될 것으로 사료된다.

• 한국작물학회:학술대회논문집
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• 한국작물학회 2017년도 9th Asian Crop Science Association conference
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• pp.21-21
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• 2017

Severe lodging has recurrently occurred at strong typhoon's hitting in recent climate change. The identification of quantitative trait loci (QTLs) and their responsible genes associated with a strong culm and their pyramiding are important for developing high-yielding varieties with a superior lodging resistance. To identify QTLs for lodging resistance, the tropical japonica line, Chugoku 117 and the improved indica variety, Habataki were selected as the donor parent, as these had thick and strong culms compared with the temperate japonica varieties in Japan such as Koshihikari. By using chromosome segment substitution lines (CSSLs) in which chromosome segments from the japonica variety were replaced to them from Habataki, we identified the QTLs for strong culm on chrs. 1 and 6, which were designated as STRONG CULM1 (SCM1) and STRONG CULM2 (SCM2), respectively. By using recombinant inbred lines (BILs) derived from a cross between Chugoku 117 and Koshihikari and introgression lines, we also identified the other QTLs for strong culm on chrs. 3 and 2, which were designated as STRONG CULM3 (SCM3) and STRONG CULM4 (SCM4), respectively. Candidate region of SCM1 includes Gn1 related to grain number. SCM2 was identical to APO1, a gene related to the control of panicle branch number, and SCM3 was identical to FC1, a strigolactone signaling associated gene, by performing fine mapping and positional cloning of these genes. To evaluate the effects of SCM1~SCM4 on lodging resistance, the Koshihiakri near isogenic line (NIL) with the introgressed SCM1 or SCM2 locus of Habataki (NIL-SCM1, NIL-SCM2) and the another Koshihikari NIL with the introgeressed SCM3 or SCM4 locus of Chugoku 117 (NIL-SCM3, NIL-SCM4) were developed. Then, we developed the pyramiding lines with double or triple combinations derived from step-by-step crosses among NIL-SCM1 NIL-SCM4. Triple pyramiding lines (NIL-SCM1+2+3, ~ NIL-SCM1+3+4) showed the largest culm diameter and the highest culm strength among the combinations and increased spikelet number due to the pleiotropic effects of these genes. Pyramiding of strong culm genes resulted in much increased culm thickness, culm strength and spikelet number due to their additive effect. SCM1 mainly contributed to enhance their pyramiding effect. These results in this study suggest the importance of identifying the combinations of superior alleles of strong culm genes among natural variation and pyramiding these genes for improving high-yielding varieties with a superior lodging resistance.

• 한국육종학회지
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• 제43권6호
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• pp.620-624
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• 2011

'화원4호'는 '일품벼'의 농업적 특성에 모로베레칸의 도열병 저항성 유전자가 이입된 근동질계통을 육성하기 위해 '일품벼'와 모로베레칸을 교배하고, 계속적인 여교배와 MAS를 병행 실시하여 유망한 계통 CR502-3-2 계통을 선발하였다. 생산력검정 시험 결과 조사된 형질 중 도열병저항성을 제외한 기타 형질에서는 '일품벼'와 유사한 근동질계통으로, 품종보 호원 출원 조건에 부합하여 '화원4호'로 명명하고 품종보호원을 출원하였다. 1. 출수기는 보통기재배에서 8월 18일로 '일품벼'와 동일한 중생종 품종이다. 2. 천립중은 23.3 g으로 '일품벼'와 유사한 수준이었다. 3. 흰잎마름병과 줄무늬잎마름병에는 이병성이다. 5. 완전미율은 '일품벼'에 비해 약간 낮았고, 아밀로스 함량은 '일품벼'보다 높았으나 통계적인 차이는 없었다. 6. '화원 4호'의 정조수량은 '05~'06년 2개년간 실시한 생산력검정 시험에서 평균 6.31 MT/ha로 '일품벼' 대비 99% 수준이었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제39권6호
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• pp.443-448
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• 1996

xylA 유전자의 프로모터상에서 조절양상을 조사하기 위하여 xylA 유전자의 프로모터(Pxyl)와 lacZ 유전자를 연결한 Pxyl-lacZ 융합 유전자를 제작하여 xylose에 의한 ${\beta}-galactosidase$ 생산의 조절양식을 조사하였다. xylA 프로모터 부위를 분리하여 lac 프로모터가 없는 고복제수의 lac 오페론 백터인 pMC1403에 클로닝시켜 pMCX191을 제작하여 reading frame에 변화가 없는 Pxyl-lacZ 융합 유전자를 만들었으며 이 벡터에서 Pxyl-lacZ 단편을 분리한 후 저복제수 벡터인 pLG339에 클로닝시켜 pLGX191을 제작하였다. 상기 플라스미드들을 xylA 변이주인 DH77에 형질전환시켜 Pxyl-lacZ 융합 유전자에서 ${\beta}-galactosidase$의 발현조절을 조사한 결과 xylose 농도에 따른 유도, glucose에 의한 발현억제 및 cAMP에 의한 억제해제 양상 등이 염색체상의xylA 유전자의 발현조절과 같은 경향을 나타내었다. pMCX191과 pLGX191을 이용하여 유전자 투여 량 효과를 본 결과도 복제수에 따른 차이가 크지 않았다. xylA 프로모터 부위내 조절영역를 추정하기 위해 구조유전자 상류 -209 bp를 포함한 xylA 유전자를 pUC19에 클로닝시킨 pUX30에서 프로모터 부위가 부분결손된 벡터들을 제작하여 결손부위의 염기서열을 확인하였다. 이들 부분결손 xylA 프로모터를 가진 xylA 유전자에서 xylose isomerase의 발현을 조사한 결과, 번역 개시점에서 -166 bp 이상의 영역을 결손시킨 pUX31과 pUX32의 경우pUX30과 비슷한 발현 양상을 보인 반면 -120 bp 이상의 영역을 결손시킨 pUX33과 pUX34에서는 모벡터에 비해 약 30% 수준의 발현을 보였다. 또한 pUX33과 pUX34에서는 xylose 유도시 cAMP에 의한 발현 촉진효과도 볼 수 없었다. -59 bp 이상의 부위가 결손된 pUX35의 경우에는 전혀 xylA 유전자의 발현이 일어나지 않았다. 이러한 결과로 볼때 xylA 프로모터내의 조절부위는 -165 bp에서 -59 bp 사이에 존재하는 것으로 추정되었다.

• 미생물학회지
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• 제34권3호
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• pp.120-125
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• 1998

pNPG는 염색체 1번의 동원체 왼편에 위치하는 npgA1을 상보할 수 있는 genomic DNA를 포함하는 플라스미드인데 Aspergillus nidulans의 형질전환율을 현저히 증가시키는 특징을 보여주었다. 이 플라스미드로 형질전환시켰을 때 $Trp^+$형질전환체 모두가 $Npg^+$이었고 이들 중에 불완전 형질전환체는 전혀 형성되지 않았다. pNPG를 제한효소 PstI으로 절단하여 얻어진 10.4 kb 절편내에 형질전환율을 증가시키는 DNA서열이 존재함을 확인하고 pILJ16의 PstI site에 재조합하여 pKJH10.4라 명명하였다. pKJH10.4에 의한 A. nidulans의 형질전환율은 pILJ16 보다 대략 200배 이상 증가하였다. pKJH10.4에 의한 형질전환체를 비선택적 조건에서 배양하였을 때 $Arg^+$무성생식포자의 약 80%이상이 $Arg^-$로 복귀됨으로써 플라스미드가 매우 불안정함을 보여주었다. argB2 지표와 다른 종류의 연관된 유전자 지표를 지니는 플라스미드로 형질전환하였을 경우 비선택적 조건에서 argB2 지표가 결손될 때 연관된 다른 지표도 항상 함께 결손되는 현상을 보여주었다. 이 결과는 이 플라스미드에 의한 형질전환체의 불안정성이 염색체로 삽입되었다가 절제되어 나오기 때문이기보다는 염색체 밖에서 자가 복제하기 때문임을 시사한다. 형질전환율을 증가시키는 최소한의 DNA절편은 EcoRI-HaeIII 4.9 kb 절편이었으며 PvuII-EcoRI 2.2 kb 절편은 플라스미드의 불안정성과 관련이 있었다. 이러한 결과들을 종합해 볼 때 형질전환율을 증가시키는 새로운 DNA 서열의 특성이 ANS1 보다는 AMA1과 유사하였으므로 AMA2라 명명하였다.

• 대한바이러스학회지
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• 제27권2호
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• pp.239-255
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• 1997

전염성 췌장괴저바이러스 (Infectious pancreatic necrosis virus) DRT 주의 VP1유전자를 대 장균 발현운반체와 Baculovirus에 삽입하여 대장균과 진핵세로에서 VP1단백질의 발현을 연구하였다. 재조합체 pMal-pol 클론 [7]에서 2.7 Kb 단편인 VP1 유전자를 제한효소 XbaI으로 절단하여 Baculovirus 운반체인 pBacPAK9에 클로닝하여 pBacVP1이라 명명하였다. 이 pBacVP1에 클로닝된 VP1유전자를 제한효소 SacI과 PstI으로 절단하여 대장균 발현 운반체인 pQE-30에 클로닝하여 pQEVP1이라 명명하였다. 또한 VP1 단백질의 C-말단에 6개의 히스티딘 $6{\times}His$이 붙어 있는 단백질을 만들기 위하여, pQEVP1 클론의 His부위를 EcoRI으로 절단하고, 또한 pBacVP1을 EcoRI으로 절단하여 생긴 부위에His-EcoRI DNA 단편을 교체시켜 재클로닝하여 pBacHis-VP1을 만들었다. pBacHis-VP1 DNA와 Bsu36I로 처리된 LacZ-Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus (LacZ-HcNPV)를 함께 lipofectin을 이용하여 곤충세포 (Spodoptera frugiperda cell)에 동시 감염을 시켜서 재조합 바이러스를 선발하여, VP1-HcNPV-1이라 명명하였다. pQEVP1 클론은 6개의 히스티딘 단편이 부착된 VP1단백질을 Ni-NTA resin 크로마토그래피법으로 정제하여 SDS-PAGE와 Western blot으로 확인하였고, 단백질의 활성과 구조에 영향을 주지 않는 6개의 히스티딘 단편 ($6\;{\times}\;His$)이 부착된 94 kDa의 VP1단백질을 정제할 수 있었다. 또한 재조합 바이러스에 감염된 곤충세포에서 VP1 단백질이 발현된 것을 전기영동과 Western blot으로 검색을 한 결과 95 kDa VP1 단백질이 발현이 되었음을 확인하였다.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제9권3호
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• pp.276-282
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• 2004

Marginal Zn deficiency is prevalent through the world and yet human zinc status has not been properly assessed due to the lack of a reliable diagnostic indicator. One potential possibility for zinc status assessment using Zn-binding protein, metallothionein (MT)-mRNA, has been proposed. The purpose of the present study was aimed to show whether measurement of mononuclear cell (MNC) MT mRNA, using a competitive-reverse transcriptase-polymerase chain reaction (competitive-RT-PCR) assay, could indicate zinc status in human subjects. In this study, MNC MT-mRNA expression was measured using a competitive-RT-PCR to compare before and after 14 days of zinc supplementation (50 mg Zn/das zinc gluconate). RT-PCR oligonucleotide primers which were designed to amplify both a 278 bp segment of the human MT-2A cDNA and a 198 bp mutant competitor cDNA template from MNCs, were prepared. MT-2A mRNA was normalized by reference to the housekeeping gene, $\beta$-actin, mRNA for which was also measured by competitive-RT-PCR. There was considerable inter-individual variation in MT-mRNA concentration and yet, the mean MT-2A mRNA level increased 4.7-fold after Zn supplementation, as compared to before Zn supplementation. This MT-2A mRNA level was shown as the same pattern and, even more sensitive assay, compared to the conventional plasma and red blood cells (RBCs) Zn assessment in which plasma and RBCs zinc levels increased 2.3- and 1.2-fold, respectively (p<0.05). We suggest that MT competitive-RT-PCR can be a useful assessment tool for evaluating human zinc status.