• 대한바이러스학회지
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• 제26권1호
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• pp.121-129
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• 1996

Herpes simplex virus type-1의 vero 세포에서의 증식기작을 규명하기 위해 전자현미경으로 관찰하였고, 유전학적 특성을 규명하기 위해 유전자도서관을 작성하였고, thymidine kinase (TK) 유전자를 클로닝을 하였다. 감염 48시간 후 많은 수의 바이러스 nucleocapsid가 핵뿐만 아니라 세포질에서 관찰되었다. 바이러스는 세포에 감염된 후 핵내에서 복제증식한 후 세포질내로 이동하였으며, 이때 핵막을 통과하면서 외투막을 갖고 세포질로 이동하여 세포밖으로 나가는 것을 관찰할 수 있었으며, 또한 일부 nucleocapsid는 세포막을 출아하여 비리온으로 출아되었다. HSV-1의 DNA를 BamHI과 BglII 제한효소로 각각 절단하여 DNA의 절단 양상을 조사하였다. BamHI에 의해 절단된 단편은 27개 이었고, 그들 분자량의 범위는 1.1 - 14 kb이었으며, BglII에 의해 절단된 단편은 16개이었고, 분자량의 범위는 4.5 - 20.1 kb이었다. Southern blot 방법으로 TK 유전자를 포함하고 있는 단편을 확인하였는데, pHLA-12와 pHLB-14클론에 포함되어 있었고 각 단편의 분자량은 3.74와 6.41 kb이었다.

• 생명과학회지
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• 제20권11호
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• pp.1577-1581
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• 2010

조혈촉진 cytokine인 Granulocyte colony stimulating factor (G-CSF)는 골수세포를 자극하여 granulocyte로 증식, 분화시키는 기능을 가지며, 현재 아주 고가의 치료제로 사용되고 있다. 인간 G-CSF (hG-CSF)를 아직 시도되지 않은 누에 유래 세포주인 BM5 세포에서 발현시키고 생산 효율을 높이기 위해 hG-CSF cDNA를 변형하였다. hG-CSF의 cDNA의 endoplasmic reticulum (ER) signal sequence 부분을 누에의 소포체에서 분비되는 단백질인 prophenoloxidase (PPAE), protein disulfide isomerase (PDI)와 bombyxin (BX)에서 유래한 누에특이 ER signal sequence로 대체한 hG-CSF의 cDNA 함유 벡터를 구축하였다. 이들 벡터를 사용하여 형질전환한 BM5 세포의 배양액에 분비된 G-CSF 단백질을 western blot으로 분석하여 발현을 확인하였다. 누에특이 ER signal sequence들로 대체된 hG-CSF cDNA를 포함하는 벡터에 의한 hG-CSF 단백질 생산이 인간 G-CSF cDNA가 든 벡터에 의한 hG-CSF의 생산보다 월등히 효율적이었다. 또한, PPAE-signal sequence를 포함하는 hG-CSF 단백질은 배양배지에서 형질전환 4일 후에 최고에 달하였고, 7 일째까지 비슷한 양이 배지 내에서 검출되었다. 이상의 결과는 인간유래 유전자가 곤충세포 내에서 발현 될 때 인간유래 유전자 보다는 곤충 유전자발현 시스템에 맞게 변형했을 경우 더 효율적인 단백질 발현을 얻을 수 있음을 보여 준다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제51권2호
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• pp.155-163
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• 2013

This study aimed to evaluate the efficacy of fructose-1,6-bis phosphate aldolase (SMALDO) DNA vaccination against Schistosoma mansoni infection using different routes of injection. The SMALDO has been cloned into the eukaryotic expression vector pcDNA3.1/V5-His TOPO-TA and was used in injecting Swiss albino mice intramuscularly (IM), subcutaneously (SC), or intraperitoneally (IP) ($50{\mu}g/mouse$). Mice vaccinated with non-recombinant pcDNA3.1 served as controls. Each group was immunized 4 times at weeks 0, 2, 4, and 6. Two weeks after the last booster dose, all mice groups were infected with 80 S. mansoni cercariae via tail immersion. At week 8 post-infection, animals were sacrificed for assessment of parasitological and histopathological parameters. High anti-SMALDO IgG antibody titers were detected in sera of all vaccinated groups (P<0.01) compared to the control group. Both the IP and SC vaccination routes resulted in a significant reduction in worm burden (46.2% and 28.9%, respectively, P<0.01). This was accompanied by a significant reduction in hepatic and intestinal egg counts (41.7% and 40.2%, respectively, P<0.01) in the IP group only. The number of dead eggs was significantly increased in both IP and IM groups (P<0.01). IP vaccination recorded the highest significant reduction in granuloma number and diameter (54.7% and 29.2%, respectively, P<0.01) and significant increase in dead miracidia (P<0.01). In conclusion, changing the injection route of SMALDO DNA vaccination significantly influenced the efficacy of vaccination. SMALDO DNA vaccination via IP route could be a promising protective and antipathology vaccine candidate against S. mansoni infection.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권4호
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• pp.526-536
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• 2015

Leptospirosis is a worldwide zoonotic disease caused by pathogenic Leptospira, a genus of which more than 250 serovars have been identified. Commercial bacterin vaccines are limited in that they lack both cross-protection against heterologous serovars and long-term protection. This study investigated in mice the immunogenicity of an anti-leptospirosis vaccine, using the outer membrane proteins LipL32 and Loa22 as antigens. The immunogenicity of this vaccine formulation was compared with those induced by vaccines based on LipL32 or Loa22 alone. A DNA-encapsulated chitosan nanoparticle was used for in vivo DNA delivery. Using a unique DNA plasmid expressing both lipL32 and loa22 for vaccination, higher antibody responses were induced than when combining plasmids harboring each gene separately. Therefore, this formulation was used to test the immunogenicity when administered by a heterologous prime (DNA)-boost (protein) immunization regimen. The specific antibody responses against LipL32 (total IgG and IgG1) and Loa22 (IgG1) were higher in mice receiving two antigens in combination than in those vaccinated with a single antigen alone. Although no significant difference in splenic CD4⁺ T cell proliferation was observed among all groups of vaccinated mice, splenocytes from mice vaccinated with two antigens exhibited higher interferon-γ and IL-2 production than when using single antigens alone upon in vitro restimulation. Taken together, the immunogenicity induced by LipL32 and Loa22 antigens in a heterologous primeboost immunization regimen using chitosan as a DNA delivery system induces higher immune response, and may be useful for developing a better vaccine for leptospirosis.

• 미생물학회지
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• 제26권2호
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• pp.101-105
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• 1988

6M-MuLV mutants containing deldtions around the putative packaging signal were constructed by using recombinant DNA technique and transfected into NIH/3T3 cell. 2 of 6 mutants can not be packaged into virions even in the presence of the wild type helper virus. The boundary between the packagible and the non-packagible genome is located around Pvu I site, 421 nucleotide downstream from the 5' end of M-MuLV genome. 10 base pair inverted repeat sequence (GAGUCCAAAA) which can make stem structure around Pvu Isite could be the putative packaging signal.

• 한국식물병리학회지
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• 제10권3호
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• pp.157-162
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• 1994

Erwinia rhapontici causes soft-rot disease in a number of plants such as onion, garlic and hyacinth. There has been no report that E. rhapontici produces pectate lyase. Pel gene was cloned from genomic DNA of the parasitic soft-rot E. rhapontici polymerase chain reaction by using synthetic oligonulceotide primers designed from the pel 1 to E. carotovora. The recombinant plasmid pJE101 containing pectate lyase gene, when introduced into E. coli DH5$\alpha$, produced pectate lyase an macerated hyacinth tissue.

• 생명과학회지
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• 제2권1호
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• pp.26-34
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• 1992

유전자 재조합 균주의 발효에 있어서 플라스미드의 안정성과 발효공정의 최적화에 대해 개략적으로 서술하였다. 클론된 DNA의 발현은 플라스미드의 안정성을 크게 저해하며, 저하된 플라스미드의 안정성은 재조합 균주의 생산성을 많이 떨어뜨린다. 최적 발효 조건은 각각의 숙주-벡터 시스템, 사용한 배지, 생성물 등에 따라 크게 변한다. 동일한 숙주-벡터 시스템의 경우도, 사용하는 배지에 따라 온도, 희석률 또는 성장속도에 의존하는 정도가 달라지고 또 최적값도 다 변한다. 또한 발효조건의 최적화가 균체 내 플라스미드의 자기복제,mRNA로의 전사, 단백질로의 translation, 더 나아가 미생물 전체의 생리와 밀접하게 관련이 있다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제5권6호
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• pp.370-372
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• 1995

A Phaffia rhodozyma chromosomal fragment (approximately 3.8 kb) capable of functioning as an origin for the replication of a kanamycin resistance ($Km^r$) plasmid in S. cerevisiae was isolated by the use of origin search plasmid, pHN134. In S. cerevisiae, transformation frequencies using the plasmid pHN134 containing an autonomously replicating sequence of P. rhodozyma was 450-580 CFU/$\mu g$ DNA. The stability of the recombinant plasmid were 16-19$\%$.

• 한국생명과학회:학술대회논문집
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• 한국생명과학회 2006년도 제47회 학술심포지움 및 추계국제학술대회
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• pp.79.2-79.2
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• 2006

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1996년도 한국생물과학협회 국제학술대회
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• pp.225.1-225
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• 1996

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