Although most researchers agree that platelet-rich plasma (PRP) is a good source of autogenous growth factors, its effect on bone regeneration is still controversial. The purpose of this study was to evaluate whether increasing angiogenic factors in the human PRP to enhance new bone formation through rapid angiogenesis. MATERIAL AND METHODS. In vitro, the human platelets were activated with application of shear stress, $20\;{\mu}g/ml$ collagen, 2 mM $CaCl_2$ and 10U thrombin/$1\;{\times}\;10^9$ platelets. Level of vascular endothelial growth factor (VEGF) and platelet microparticle (PMP) in the activated platelets were checked. In the animal study, human angiogenic factors-enriched PRP was tested in 28 athymic rat's cranial critical bone defects with $\beta$-TCP. Angiogenesis and osteogenesis were evaluated by laser Doppler perfusion imaging, histology, dual energy X-ray densinometry, and micro-computed tomography. RESULTS. In vitro, this human angiogenic factors-enriched PRP resulted in better cellular proliferation and osteogenic differentiation. In vivo, increasing angiogenic potential of the PRP showed significantly higher blood perfusion around the defect and enhanced new bone formation around acellular bone graft material. CONCLUSION. Angiogenic factor-enriched PRP leads to faster and more extensive new bone formation in the critical size bone defect. The results implicate that rapid angiogenesis in the initial healing period by PRP could be supposed as a way to overcome short term effect of the rapid angiogenesis.
This study was performed to prove the antithrombotic effects of DoHongYeum fluid by way of experimental methods. The thrombosis was induced by injection of collagen the mixture (0.1ml/10g, 2mg/kg B.W)plus serotonin (5mg/kg B.W) into the caudal vein of rat, 2 hours after liquid extract of DoHongYeum was oral administration. The effect of the fluid of DoHongYeum was rxamined by the number of RBC and platelets, bleeding time, blood clotting time, death rate, platelet aggregation, plasmacoagulation factor activity, exvivo and fibrinolytic activity of englobulin fracture in the rats. The results were summerized as followings. 1. The number of RBC and platelets was significantly increased in DoHomeYeum group incomparison with the control group. 2. Bleeding time was significantly shortened in DHY group in comparison with the controlgroup. 3. Blood clotting time was significantly prolonged in DHY group in comparison with the control group. 4. The death rate of mouse was inhibited in DHY group in comparison with the control group. 5. The platelet aggregation was inhibited in DHY group in comparison with the control group. 6. The prothrombin time and activated partial thromboplastin time on the test of plasmacoagulation factor activity was prolonged but was not valuable in DHY group. 7. Fibrinogen lyses time of rat was reduced and lyses area was increased in DHY group incomparison with the control group. 8. Fibrinogen lyses time of rat in vitro assay was reduced in DHY group. From the above results, it was thought that the DoHongYeum could be applied effectively in the thrombosis.
Platelets originating from Megakaryocyte are sensitive to radiation along with white blood cells, and thus these platelets are used as an index of radiation hazard as they decrease in advance. Thus, when there is a scarcity of platelets, dot hemorrhage occurs and it leads to decrease of blood corpuscle and a decline in immunity. In particular, when 4~6 Gy whole body irradiation is received, after three weeks, the platelets will decrease to the lowest level, which can be a cause of death by bleeding and anemia. Therefore, this study tried to identify the mechanism of platelet damage and protection effect. The protection substance used in the experiment is Alliin, which is a component of garlic, and it was observed by an Transmission Electron Microscope(TEM) after its injection to the rat's tail vein. In the study, it was found that the cell membrane was severely damaged in a 10-day progressed platelet organ after receiving 5 Gy irradiation. It billowed as balloon-like figure and the glycocalyx became hyperplasia. The minute organ was damaged to the point that it was beyond recognition in a 20-day progressed platelet organ after receiving irradiation, and the cytoplasmic contents were exposed to epilepsy parts and outrageously damaged. Furthermore, the form of granules could also not be observed. A hole was formed in the middle, and the damaged organ was found in a 30-day progressed platelet. However, the form of granules was consistently maintained in the experiment group injecting Alliin, as with the control group, and there was no damage to the cell membrane recognized. Thus, it was possible to verify the effectiveness of radiation protection of the platelet when Alliin was injected to the blood vessel.
Vibrio vulnificus cytolysin caused platelet cytolysis and increased intracellular calcium concentration $([Ca^{2+}]_i)$ of rat platelets in a concentration-dependent manner. In the presence of V. vulnificus cytolysin (3 HU/ml), lactate dehydrogenase (LDH) activity was increased from $1.3{\pm}0.4%$ of control to $64.3{\pm}3.4%$ in platelet suspension buffer. In $Ca^{2+}-free$ platelet suspension buffer, however, V. vulnificus cytolysin did not induce $[Ca^{2+}]_i$ increase and LDH release. Addition of EGTA (2 mM) to suspension buffer after the initial $Ca^{2+}$ influx reversed $[Ca^{2+}]_i$ to the control level. However, a $Ca^{2+}$ channel blocker verapamil $(20\;{\mu}M)$ or mefenamic acid $(20\;{\mu}M)$ did not inhibit V. vulnificus cytolysin-induced $[Ca^{2+}]_i$ increase and LDH release. Divalent cations such as $Co^{2+},\;Cd^{2+}\;or\;Mn^{2+}$ (2 mM each) also did not alter V. vulnificus cytolysin-induced $[Ca^{2+}]_i$ increase and LDH release. V. vulnificus cytolysin (3 HU/ml)-induced calcium influx was completely blocked by lanthanum (2 mM). Lanthanum (2 mM) also completely blocked V. vulnificus cytolysin (3 HU/ml)-induced LDH release. Osmotic protectants such as, raffinose, sucrose or PEG600 (50 mM each) did not inhibit the lytic activity of V. vulnificus cytolysin. In conclusion, lanthanum sensitive $Ca^{2+}$ influx plays a significant role in Vibrio vulnificus cytolysin-induced platelet cytolysis and thrombocytopenia in V. vulnificus infection.
Irfan, Muhammad;Lee, Yuan Yee;Lee, Ki-Ja;Kim, Sung Dae;Rhee, Man Hee
Journal of Ginseng Research
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v.46
no.3
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pp.387-395
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2022
Background: Fermentation may alter the bioavailability of certain compounds, which may affect their efficacy and pharmacological responses. This study investigated the antiplatelet effects of red ginseng extract (RGE) and fermented red ginseng extract (FRG). Methods: A rodent model was used to evaluate the antiplatelet and antithrombotic effects of the extracts. Rats were orally fed with human equivalent doses of the extracts for 1 week and examined for various signaling pathways using standard in vivo and ex vivo techniques. Light transmission aggregometry was performed, and calcium mobilization, dense granule secretion, integrin αIIbβ3-mediated signaling molecules, cyclic nucleotide signaling events, and various protein molecules were evaluated ex vivo in collagen-stimulated washed platelets. Furthermore, antithrombotic properties were evaluated using a standard acute pulmonary thromboembolism model, and the effects on hemostasis were investigated using rat and mice models. Results: Both RGE and FRG significantly inhibited platelet aggregation, calcium mobilization, and dense granule secretion along with integrin-mediated fibrinogen binding and fibrinogen adhesion. cAMP levels were found to be elevated in RGE-treated rat platelets. Ginseng extracts did not exert any effect on prothrombin time and activated partial thromboplastin time. RGE-treated mice showed significantly better survival under thrombosis than FRG-treated mice, with no effects on hemostasis, whereas FRG-treated mice exhibited a slight increment in bleeding time. Conclusion: Both extracts, especially RGE, are remarkable supplements to maintain cardiovascular health and are potential candidates for the treatment and prevention of platelet-related cardiovascular disorders.
Platelets play a very important role in nomal hemostasis and their functions are more enhanced in various pathogenic states than in normal state. Especially it has been postulated that abnormal platelet and endothelium function might be major factors of microcirculatory disturbance in diabetes mellitus. Hydroxybrazilin, a phenolic constituent of Hematoxylon campechianum has been examined for its inhibitory effect on platelet aggregation. Its antiaggregatory effect might be mediated through the decrease of ATP release from dense granule and those of thromboxane $A_2$ production in normal and streptozotocin induced diabetic rats. The present study was undertaken to gain insight into the mechanism that hydroxybrazilin inhibited thromboxane $A_2$ production in platelets. Thus we measured the effect of hydroxybrazilin on phospholipase $A_2$, a rate limiting step of thromboxane $A_2$ production, in normal and streptozotocin induced diabetic rats. Hydroxybrazilin significantly inhibited the platelet phospholipase $A_2$ activity in normal and streptozotocin induced diabetic rats.
Effects of citrate-capped silver nanoparticles (AgNPs) on the blood coagulation and platelet aggregation were investigated using whole blood, platelet rich plasma (PRP) and washed platelet obtained from SD male rats. To confirm the stability of AgNPs in the test, size distribution of the nanoparticles was measured in the vehicles including distilled water, serum, and platelet buffers. The average size of AgNPs was 20 nm in the vehicles, which means that the stability was maintained during the whole experimental period. When blood coagulation was monitored by using whole blood impedance aggregometer, coagulation was not observed at the concentration of 1, 10 and 50 ppm. Platelets in plasma or in buffer were not aggregated by AgNPs at the concentration of 1, 2 and 4 ppm, respectively. The test concentration of AgNPs could not be increased because the dark color of the nanoparticles impeded the transmission of light, which is an indicator of aggregation. Although the blood or platelets were pre-activated by collagen, thrombin, or ADP with sub-threshold level, aggregation was not observed at the test concentration. Microscopic observation also supported the result obtained by the aggregometer.
Background: Korean ginseng, Panax ginseng Meyer, has been used as a traditional oriental medicine to treat illness and promote health for several thousand years. Ginsenosides are the main constituents for the pharmacological effects of P. ginseng. Since several ginsenosides, including ginsenoside (G)-Rg3 and G-Rp1, have reported antiplatelet activity, here we investigate the ability of G-Rp4 to modulate adenosine diphosphate (ADP)-induced platelet aggregation. The ginsenoside Rp4, a similar chemical structure of G-Rp1, was prepared from G-Rg1 by chemical modification. Methods: To examine the effects of G-Rp4 on platelet activation, we performed several experiments, including antiplatelet ability, the modulation of intracellular calcium concentration, and P-selectin expression. In addition, we examined the activation of integrin ${\alpha}IIb{\beta}_3$ and the phosphorylation of signaling molecules using fibrinogen binding assay and immunoblotting in rat washed platelets. Results: G-Rp4 inhibited ADP-induced platelet aggregation in a dose-dependent manner. We found that G-Rp4 decreased calcium mobilization and P-selectin expression in ADP-activated platelets. Moreover, fibrinogen binding to integrin ${\alpha}IIb{\beta}_3$ by ADP was attenuated in G-Rp4-treated platelets. G-Rp4 significantly attenuated phosphorylation of extracellular signal-regulated protein kinases 1 and 2, p38, and c-Jun N-terminal kinase, as well as protein kinase B, phosphatidylinositol 3-kinase, and phospholipase C-${\gamma}$ phosphorylations. Conclusion: G-Rp4 significantly inhibited ADP-induced platelet aggregation and this is mediated via modulating the intracellular signaling molecules. These results indicate that G-Rp4 could be a potential candidate as a therapeutic agent against platelet-related cardiovascular diseases.
The Journal of the Convergence on Culture Technology
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v.6
no.2
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pp.567-572
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2020
The purpose of this study was to investigate the effects of Anti-Thrombotic Activities and Cardiovascular Improvement of Fermented Garlic Extracts. The incidence of cardiovascular diseases (CVDs) is increasing rapidly in developed countries, with CVDs now representing the leading cause of morbidity and mortality. Natural products and ethnomedicines have been shown to reduce the risk of CVDs. Garlic is a medicinal plant used throughout the world for its anti-inflammatory, antioxidant, and antiplatelet activities. We hypothesized that fermented preparations of these products may possess stronger antiplatelet effects than the non-fermented forms owing to the increased bioavailability of the bioactive compounds produced during fermentation. Therefore, we compared these compounds via in vitro and ex vivo platelet aggregation assays by using standard light transmission aggregometry and ex vivo granule secretions from rat platelets. We found that fermented preparations exerted more potent and significant inhibition of platelet aggregation both in vitro and ex vivo. Likewise, ATP release from dense granules of platelets was also significantly inhibited in fermented preparation-treated rat platelets compared to that in non-fermented preparation-treated ones. We concluded that fermented preparations exerted more potent effects on platelet function both in vitro and ex vivo, possibly as a result of the increased bioavailability of active compounds produced during fermentation. We therefore suggest that fermented products may be potent therapeutics against platelet-related CVDs and can be used as antiplatelet and antithrombotic agents.
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