• 한국수산과학회지
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• 제21권2호
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• pp.85-96
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• 1988

Purification and some properties of alkaline proteinases in the pyloric caeca of skipjack, Katsuwonus vagans, were investigated. Four alkaline proteinases, temporarily designated proteinases I, II, III and IV, were identified from the tissue extract of the pyloric caeca by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephadex A-50 chromatography, and Sephadex G-100 and G-200 gel filtration. Result of disc-polyacrylamide gel electrophoretic analysis showed that the purified proteinases II and III were homogenous with the yields of $1.5\%\;and\;1.2\%$, and those specific activities were increased to 33 to 37 fold over that of the crude enzyme solution, respectively. Molecular weight of the proteinases II and III determined by sephadex G-100 gel filtration were 28,500 and 24,200, respectively. The optimum conditions for the caseinolytic activity of the two enzymes were pH 9.6 and $48^{\circ}C$. The reaction rates of the two alkaline proteinases were constant to the reaction time to 80 min in the reaction mixture of $3.4{\mu}g/ml$ of enzyme concentration and $2\%$ casein solution. The Km values against casein substrate determined by the method of Lineweaver-Burk were $0.56\%$ for proteinase II and $0.30\%$ for proteinase II. The proteinases II and III were inactivated under the presence of $Ag^+,\;Hg^{2+},\;Ni{2+},\;Fe^{2+},\;and\;Cu^{2+}$, and but activated by $Mn^{2+}\;and\;Ca^{2+}$ and markedly inhibited by the soybean trypsin inhibitor and N-p-toluenesulfonyl-L-lysine chloromethyl ketone. Therefore, the proteinases II and III were found to be a group of serine proteases and assured to be trypsin-like proteinases.

• 한국균학회지
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• 제14권2호
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• pp.101-107
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• 1986

The properties of carboxyl proteinase which was contained in Poria cocos (Schw.) Wolf were investigated by means of the purification with 0.65 ammonium sulfate saturation, DEAE cellulose and Sephadex G-75 gel filtration. This enzyme was found to hydrolyze only peptide bond between glutamyl-L-tyrosine of carbobenzoxy-L-glutamyl-L-tyrosine among the synthetic substrates of carbobenzoxy-L-glutamyl-L-tyrosine, hippuryl- L-phenylalanine and hippuryl-L-arginine. This enzyme was inhibited by $Zn^{+2},\;Fe^{+2},\;Ca^{+2},\;CN^{-1},\;P_2O_7^{-4}$ ions, but stimulated by $Hg^{+2}$ ion. Also, this enzyme was inhibited by organic compounds such as L-lysine, L-phenylalanine, hippuryl-L-phenylalanine, diazoacetyl-DL-norleucine methyl ester (DAN) and 1,2-epoxy-3-(P-nitrophenoxy)propane(EPNP). In particular, the activity was inhibited by L-lysine till 20 minutes of preincubation time rapidly, and by DAN in the presence of $Cu^{+2}$ ion more rapidly after 30 minutes than DAN in the absence of $Cu^{+2}$ ion. L-Lysine was found to be a competitive inhibitor and its $K_i$ value was determined to be 0.12 mmole by Dixon plot.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제43권1호
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• pp.12-17
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• 2000

To understand the signal transduction pathway that leads to the activation of the wound-inducible proteinase inhibitor II (pin2) promoter. $F_2$ progenies of wound (-) mutant crossed with wild-type Arabidopsis plants were biochemically and genetically characterized. Wound (-) mutant was derived from transgenic Arabidopsis plants containing bacterial cytosine deaminase gene under the control of pin2 promoter. The cytosine deaminase assays indicated that wound (-) mutant is a dominant inhibitor of wound-inducibility as only 3 of the $20F_2$ progenies showed cytosine deaminase (CDase) activity, To construct a structural map of the wound (-) mutant chromosomal regions, cleaved, amplified polymorphic sequences (CAPS) markers that cover all Chromosomes were used. Chromosomal regions covered by three different CAPS markers could be candidates for further fine mapping of the location of the wound (-) mutation. g4026, RGA1 and ASA1 located at 84.9 on recombinant inbred (RI) map of chromosome I, at 1.75 on RI map of chromosome II, and 18.35 on RI map of chromosome V, respectively.

• Applied Biological Chemistry
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• 제40권4호
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• pp.271-276
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• 1997

박테리오파아지 T7 RNA polymerase 유전자를 식물체내에서 이용할 수 있을지 알아보기 위하여 상처유발인 감자 단백질 분해효소 억제제 유전자의 프로모터에 박테리오파지 T7 RNA polymerase 유전자를 연결시킨 후 담배에 도입시켰다. 형질전환 식물체의 DNA에 대한 Southern hybridization에 의하면 T7 RNA polymerase 유전자가 식물체내에 1-2 copy가 존재하며, Northern hybridization에 의하면 T7 RNA polymerase의 RNA가 상처에 따라 생성되는 것을 확인하였다. 또한 Western hybridization에 의하면 식물체내 T7 RNA polymerase 단백질이 생성되는데 그 크기는 대장균에서 생성되는 단백질 크기와 유사한 80 kDa 이었으며 시험관내에서 전사체에 뉴클레오타이드를 결합시키는 능력이 있음도 확인하였다. 따라서 T7 RNA polymerase 유전자를 이용하여 식물체내에서 원하는 유전자의 발현을 증대시킬 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국식물학회:학술대회논문집
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• 한국식물학회 1987년도 식물생명공학 심포지움 논문집 Proceedings of Symposia on Plant Biotechnology
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• pp.309-321
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• 1987

Differential gene expressions of patatin, proteinase inhibitor II, PAPI, rbcS and actin in potato microtuber have been examined. Microtubers from the several different stages of development were collected and their protein and mRNA patterns were examined. SDS-PAGE of microtuber proteins revealed that developmental changes in protein should be analogous to that of potatoes grown in the field. The level of patatin mRNA was the highest at the 30th day of development. Proteinse inhibitor IImRNA level was at the highest at the 15th day and decreased thereafter. The levels of PAPI mRNA, rbcS mRNA and actin mRNA were low throughout the time course examined.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제24권3호
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• pp.244-251
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• 2016

Understanding the developmental mechanisms of humoral immunity against intranasal antigens is essential for the development of therapeutic approaches against air-borne pathogens as well as allergen-induced pulmonary inflammation. Follicular helper T (Tfh) cells expressing CXCR5 are required for humoral immunity by providing IL-21 and ICOS costimulation to activated B cells. However, the regulation of Tfh cell responses against intranasal antigens remains unclear. Here, we found that the generation of Tfh cells and germinal center B cells in the bronchial lymph node against intranasal proteinase antigens was independent of $TGF-{\beta}$. In contrast, administration of STAT3 inhibitor STA-21 suppressed the generation of Tfh cells and germinal center B cells. Compared with wild-type OT-II T cells, STAT3-deficient OT-II T cells transferred into recipients lacking T cells not only showed significantly reduced frequency Tfh cells, but also induced diminished IgG as well as IgE specific for the intranasal antigens. Cotransfer study of wild-type OT-II and STAT3-deficient OT-II T cells revealed that the latter failed to differentiate into Tfh cells. These findings demonstrate that T cell-intrinsic STAT3 is required for the generation of Tfh cells to intranasal antigens and that targeting STAT3 might be an effective approach to ameliorate antibody-mediated pathology in the lung.

• 대한의생명과학회지
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• 제3권2호
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• pp.89-94
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• 1997

가토에게 간흡충을 감염시키고 3개월 후 거살한 다음 간흡충의 충체, 간흡충의 분비배설액 그리고 간토의 담즙을 조항원으로 제조한 후 이에 대한 항원단백질의 구성물질을 분석하였다. 그리고 cysteine계 면역억제제인 E-64와 serine계 면역억제제인 PMSF를 첨가하였을 때 단백질 구성물질의 발현 양상을 관찰하였다. 실험적으로 가토에서 얻은 간흡충 성충의 조항원은 200-9 kDa의 범위에서 26개의 분획 을 관찰하였으며, 간흡충 성충 조항원에 cysteine계 단백질분해효소 억제제인 E-64를 첨거하였을 때 잘 보존하여 200-9 kDa의 범위에서 29개의 분획을 관찰하였다. 간흡충 성충의 분비배설액 조항원은 200-9 kDa범위에서 27개의 분획이 관찰되었으며, cysteine계 단백질분해효소 억제제인 E-64를 첨거하였을 때 잘 보존하여 200-9 kDa의 범위에서 29개의 분획이 관찰되었다. 그리고 간흡충을 감염시킨 가토의 담즙 조항원은 200-9 kDa의 범위에서 19개의 분획이 관찰되었으며, serine 계 단백질분해효소인 PMSF를 첨거하였을 때 200-10 kDa의 범위에서 22개의 분획이 관찰되었으나, cysteine계 단백질분해효소인 E-64에서도 비슷한 양상을 보였다. 대조군인 건강 가토의 담즙 조항원은 200-10 kDa의 범위에서 22개의 분획이 관찰되었으며, serine계 단백질분해효소 억제제인 PMSF를 첨가하였을 때 잘 보존하여 200-12 kDa의 범위에서 23개의 분획이 관찰되었다. 앞으로 각 항원에 대한 면역학적 특징 및 단세포군 항체에 대한 구체적인 규명이 계속되어야겠다.

• Plant Biotechnology Reports
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• 제5권3호
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• pp.217-224
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• 2011

Non-heading Chinese cabbage (Brassica rapa L. ssp. chinensis) is a popular vegetable in Asian countries. The diamondback moth (DBM), Plutella xylostella (L.), an insect with worldwide distribution, is a main pest of Brassicaceae crops and causes enormous crop losses. Transfer of the anti-insect gene into the plant genome by transgenic technology and subsequent breeding of insect-resistant varieties will be an effective approach to reducing the damage caused by this pest. We have produced transgenic non-heading Chinese cabbage plants expressing the potato proteinase inhibitor II gene (pinII) and tested the pest resistance of these transgenic plants. Non-heading Chinese cabbages grown for 45 days on which buds had formed were used as experimental materials for Agrobacterium-mediated vacuum infiltration transformation. Forty-one resistant plants were selected from 1166 g of seed harvested from the infiltrated plants based on the resistance of the young seedlings to the herbicide Basta. The transgenic traits were further confirmed by the Chlorophenol red test, PCR, and genomic Southern blotting. The results showed that the bar and pinII genes were co-integrated into the resistant plant genome. A bioassay of insect resistance in the second generation of individual lines of the transgenic plants showed that DBM larvae fed on transgenic leaves were severely stunted and had a higher mortality than those fed on the wild-type leaves.

• 한국산림과학회지
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• 제84권1호
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• pp.77-86
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• 1995

임목을 대상으로 삽입된 외래 유전자의 공간적, 시기별 발현 특성을 이해하기 위한 기초연구로서 온실에서 생육 중인 형질전환된 2년생 잡종 포플러 (Populus alba X P. grandidentata) Hansen 클론을 대상으로 삽입된 외래 유전자의 발현정도를 각 기관별로 조사하였다. Agrobacterium binary vector pRT45, pRT102 및 pRT104에 의해서 형질전환된 3계통의 형질전환체 Tr15, Tr345, Tr665 모두는 선발가능한 표식 유전자로서 nos promoter-NPT II 유전자가 대상 식물체의 genome에 삽입되어 있으며, 그외에, pin2 promoter-CAT 유전자(pRT45), nos promoter-PIN2 유전자(pRT102), Cauliflower Mosaic Virus 35s promoter-PIN2 유전자(pRT104)가 3계통의 형질전환체에 제각각 삽입되어 있는 잡종 포플러이다. 이들 3계통의 형질전환 포플러 식물체의 DNA를 PCR 검정 기법을 이용하여 분석해 본 결과 선발 가능한 표식 유전자인 NPT-II가 삽입되어 있음이 입증되었다 발현 정도를 비교 분석하기 위해서 NPT-ELISA 검정을 실시하였다. 삽입된 NPT II 유전자는 형질전환된 포플러의 잎, 엽병, 형성층 조직, 줄기의 목질부, 뿌리에서 발현되었으며, 발현 정도는 형질전환된 식물체의 계통에 따라서, 그리고 형진전환된 식물체의 부위에 따라서 다양하게 나타났다. pRT45에 의해서 형질전환된 Tr15 형질전환체의 경우, 늙은 잎과 엽병에서 NPT II 유전자가 가장 높은 수준으로 발현되었으며, 어린 잎과 뿌리 조직에서 가장 낮게 발현되었다. 삽입된 외래 유전자가 각 식물체간에, 각 기관에 따라서 각각 상이한 발현 정도를 나타내는 이와 같은 결과는 형질전환된 식물체에 대한 효과적인 선발과정이 요구됨을 의미함은 물론이고, 형질전환 식물체의 발달 과정에 따라서 삽입된 외래 유전자가 공간적, 시기적으로 각각 다르게 발현할 수 있다는 것을 나타낸다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권2호
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• pp.145-153
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• 1986

본 연구에서는 토양으로부터 분리한 Aspergillus 속의 한 균주가 Colubridae과 독사의 사독 주성분인 출혈독을 강하게 불찰성화 시키는 물질을 생성하므로 이 물질을 분리한 후 부분적으로 정제하여 결정이 형성됨을 확인하였다. 본 물질은 Colubridae과의 Agkistrodon bromohoffi brevicaudus, A. saxatilis, Trimersurus flavoviridis, A. acutus 사독의 출혈독을 정량적으로 불활성화 시키며, 최대 저해률은 80-90%에 이르며 실험한 대상 동물에 따라 활성차이가 다소 있음이 인정되었다. 예로서 병아리 피하반응에 있어서는 T. flavoviridis 사독을 동량의 시료로서 처리하였을 때 완전히 출혈활성이 저해되나 mouse 족도 조직내 반응에서는 사독의 8배량의 시료로서 출혈활성이 거의 저해되었다. 또 본 시료는 출혈독이 지니고 있는 치사활성에 있어서도 독량의 약 3배량의 시료에 의해서 거의 치사 활성을 저해하며, T. flavoviridis 사독의 HR-I 및 HR-II부종활성에 대해서는 본 물질의 1/2량 이상의 농도에서는 시료농도에 관계없이 약 50% 정도로 저해하는 반면 A. bromohoffi brevicaudus 전독의 부종은 거의 완전히 저해하였다. 사용 균은 2종의 항출혈성 물질을 생성하고 있음이 가면피내 반응에서 확인되었다.