• Archives of Pharmacal Research
• /
• 제24권3호
• /
• pp.229-233
• /
• 2001

This Paper deals with the development of a technology for making a hydrophilic gel of Polyethylene oxide reception in which radiating ability is employed to cause cross-linking of Polymers in a water solution. The gel of polyethylene oxide was shown to be nontoxic contain 5-50% of polymer and be useful in composite medicinal forms along with biologically active substances including Bac. subtilis proteases. Proteases immobilized in the gel possess high thermal stability and proteolytic activity and are readily applied in medicine. The effect of immobilized proteolytic and glucolytic enzymes of Bac. subtillis (Immozimase) on the warm ischemia-reperfusion (I/R) which can cause hepatic and jejunum injury was also studied. These enzymes were immobilized on water-soluble polymer polyethylene glycol by means of an electron beam. The number of degraanulated mast cells as well as serum ALT after I/R in the group with Immozimase was decreased to almost half as compared with the control group. Pretreatment with Immozimase resulted in significant reduction of hepatic and gut neutrophil accumulation as compared with control animals. It was concluded that Immozimase has a protective effect for hepatic and gut ischemia/reperfusion, and this effect seems to be associated with prevention of leukocyte accumulation .

• 한국식품과학회지
• /
• 제35권2호
• /
• pp.260-265
• /
• 2003

본 연구에서는 수율과 protease 제거정도 그리고 분리정제 비용을 고려하여 암모늄 설페이트 침전과 Monoplus S100 수지로 처리한 효소를 밀가루에 적용하여 반죽 형성 시 물리적 특성개선 효과를 조사하였다. 암모늄설페이트 침전, 이온 교환수지, 겔 크로마토그래피를 통한 정제된 효소의 분자량은 SDS-PAGE상에서 38,000으로 판정되었고 단일밴드로 나타나 정제도가 높음을 알 수 있었다. Farinograph를 이용하여 측정한 밀가루 반죽의 특성변화에서 저항성의 지표가 되는 안정도는 대조구가 4분, 조효소는 대조구보다 짧은 3.5분, 정제된 효소는 대조구보다 길게 측정되었다. 반죽의 약화도는 조효소의 경우 대조구보다 높게 측정되었고, 정제된 효소의 경우 대조구보다 낮은 값을 나타냈다. 이 결과로부터 조효소의 경우 protease 존재로 인하여 반죽의 분해가 진행됨을 알 수 있었고, 정제된 효소 첨가로 인하여 물성이 향상됨을 알 수 있었다. 대조군의 밀가루 반죽의 valorimeter 값은 52로 측정되었고, 정제된 효소첨가에 의해 증가되었다. S. mobaraensis가 분비하는 transglutaminase의 정제단계를 조절하고 최적화 시킬 경우 국내산 밀가루의 반죽특성의 효과를 기대할 수 있다고 판단된다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제38권6호
• /
• pp.534-540
• /
• 1995

토양에서 분리된 호알칼리성 coryneform bacteria TU-19는 적어도 세종류의 단백질분해효소(Protease I, II, III)를 생성분비하였다. 이 균주의 효소생산과 관련된 배양조건을 조사해본 결과 최적온도 및 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 10.0인 것으로 나타났다. 이틀 배양된 배양액으로부터 이 효소들을 정제하기 위해서 ammonium sulfate fractionation, gel filtration 및 QAE-Sephadex column chromatography 등을 순차적으로 행하였다. 그 결과 이들 세종류의 효소는 SDS-PAGE pattern으로 평가했을 때 single band로 순수 정제되었으며, 각각의 분자량은 120, 80, 45 kDa이었다. 정제된 효소의 특성을 살펴보면 Pretense I과 II의 최적 pH와 온도는 각각 $10.5,\;45^{\circ}C$이었으며, Protease III는 11.0과 $50^{\circ}C$로 나타났다. 또한 이들 세효소는 10 mM PMSF 농도에서 효소활성을 완전히 상실하였으며, pCMB, 1,10-phenanthroline, IAA, EDTA에는 별 영향이 없는 것으로 보아 serine protease의 일종으로 생각된다.

• Journal of Nutrition and Health
• /
• 제51권6호
• /
• pp.599-606
• /
• 2018

Purpose: Various plants, herbal medicines, and marine foodstuffs have been used in kimchi preparation to improve its overall quality. Teff, which is rich in minerals and starches, facilitates stable blood glucose levels and is well-suited for use in gluten-free products; hence, it can be used to reinforce the mineral composition of kimchi. In this study, we probed the antioxidant activities of hydrolysates prepared by treatment of brown teff with three proteases under different conditions. Methods: The mineral composition of brown teff was determined by inductively coupled plasma spectrophotometry-mass spectrometry, and we established optimal hydrolysis conditions by determining the total phenol and flavonoid contents of teff hydrolysates obtained using three different proteases (protamax, flavourzyme, and alcalase), two different protease concentrations (1 and 3 wt%), and three different incubation times (1, 2, and 4 h). The antioxidant activity of the hydrolysates was further investigated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) scavenging activity, total antioxidant capacity (TAC), and ferrous reducing antioxidant power (FRAP) assays. Results: Brown teff was rich in I, K, Mg, and Ca, and the highest total phenol content ($24.16{\mu}g/mL$), total flavonoid content ($69.08{\mu}g/mL$), and TAC were obtained for 1 wt% protamax treatment. However, the highest DPPH scavenging activity and FRAP values were observed for hydrolysates produced by alcalase and flavourzyme treatments, respectively. Conclusion: Treatment of brown teff with proteases affords hydrolysates with significantly increased antioxidant activities and high total phenol and flavonoid contents, and these antioxidant activities of teff hydrolysates have the potential to enhance the quality and functionality of kimchi in future applications.

• 생명과학회지
• /
• 제21권2호
• /
• pp.309-315
• /
• 2011

쌀 부산물인 쌀 시럽박을 상업적으로 사용되는 8가지 protease로 최적화된 조건에서 단일 혹은 혼합 처리하여 수용성 단백질을 분리하였다. 이렇게 분리된 단백질을 Lowry, Kjeldahl 그리고 Gravimetric method 등 총 3가지 방법으로 분석을 한 결과 Protease M, Protease N, Protease A이 가장 높은 분해율을 나타내었다. 3가지 방법에서 모두 Protease M, Protease N, Protease A가 가장 높은 분해율을 나타내었지만, 특히 Gravimetric method의 경우 다른 두 분석방법에 비해 더 높은 단백질 함량을 보였다. 또한 위의 단일처리 결과를 바탕으로 3가지 protease를 혼합하여 처리하였을 때 단일처리와는 달리 상승효과가 나타나는 것을 알 수 있었다. 효소 처리를 하여 얻어진 단백질의 사이즈를 알아보기 위해 SDS-PAGE를 한 결과 어떠한 밴드도 형성이 되지 않았고, 이는 단백질이 마커의 최소사이즈 15 kDa보다 작은 것으로 생각할 수 있다. 아미노산분석의 경우 총 아미노산의 함량은 Protease M을 단일 처리하였을 때와 비슷함을 알 수 있었다. 이는 Protease M의 경우 단백질을 분해할 때 peptide와 amino acid를 동시에 생성하는 특성을 가지고 있지만 Protease N의 경우는 peptide만을 생성하는 특성을 가지고 있어서 상대적으로 Protease M을 처리하였을 때 총 아미노산의 함량이 Protease N에 비해 높음을 알 수 있었으며 이러한 특성으로 인해서 효소를 혼합하였을 때도 총 아미노산의 함량은 같은 것으로 판단된다. 효소 처리 후 생성된 총 단백질 함량은 효소를 혼합할수록 증가하였지만 아미노산의 함량은 단일과 비교하였을 때 비슷한 결과를 나타내었는데 이것 또한 Protease M의 특성으로 인해서 기인된 것으로 판단되며 상대적으로 효소를 혼합할수록 아미노산으로 분해되지 못한 polypeptide가 단일 처리에 비해 다량 존재 할 것으로 판단된다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제33권4호
• /
• pp.325-329
• /
• 1990

젓갈에서 분리한 B. subtilis p-4와 B. licheniformis p-5 프로테아제의 기질(카제인)에 대한 친화도를 측정한 결과 각각 0.38mM, 0.18mM이었고 열변성에 의한 특성을 반응속도론적으로 검토한 결과, p-4 프로테아제는 $50^{\circ}C$에서 80분 열처리할 때 20%의 잔존 활성을 보였고, p-5 프로테아제는 거의 실활되었는데 일차반응식을 따랐다. 그리고 p4, p-5 프로테아제의 변성 속도 상수는 각각 $40^{\circ}C$에서 $12.2{\times}10^{-5}/sec,\;19.0{\times}10^{-5}/sec,\;50^{\circ}C$에서는 $35.7{\times}10^{-5}/sec,\;46.3{\times}10^{-5}/sec$였다. 또 활성화 에너지는 p-4프로테아제가 19.6Kca1/mole, p-5 프로테아제는 15.2Kcal/mole로 p-5 프로테아제가 열변성에 민감한 것을 알 수 있었다. 활성화 자유에너지는 p-4, p-5 프로테아제 모두 온도가 상승함에 따라 약간 증가하였는데 $40^{\circ}C$에서 각각 23.21, 22.93Kcal/mole, $50^{\circ}C$에서는 23.28, 23.11Kcal/mole이었다. 아미노산 조성은 p-4 프로테아제의 경우 151개의 아미노산 잔기를 가졌으며, 이중 glycine, glutamic acid, proline이 많았고, p-5 프로테아제는 247개의 잔기에 glycine, glutamic acid, aspartic acid가 많았다.

• 한국식품영양학회지
• /
• 제16권4호
• /
• pp.379-387
• /
• 2003

동결건조 녹용을 물과 단백질 가수분해 효소로 추출하였다. 동결건조녹용을 물추출하는 경우, 추출효율은 5% 농도로 5$0^{\circ}C$에서 6시간 추출하는 것이 가장 높았다. 추출물을 HPLC 분석한 결과, 물추출액에 존재하던 고분자 단백질은 단백질 가수분해 효소에 의해 저분자화되었다. 저분자화율은 세균 protease를 사용한 경우가 가장 높고 다음 pepsin인데, papain의 효과는 적었다. 생녹용에 단백질 가수분해 효소를 5시간 작용시켜서 얻은 추출액의 추출율은 세균 protease는 33.4% (280nm의 흡광도 13.25), papain은 22.4%(흡광도 10.06), pepsin은 30.2%(흡광도 11.34)였다. 30분 동안 끓인 녹용에 단백질 가수분해 효소를 5시간 작용시킨 용액의 추출율은 세균 protease는 47.6%(흡광도 12.54), papain은 26.4%(흡광도 7.48), pepsin은 45.6%(흡광도 7.23)였다. 단백질함량은 물추출액은 52.1%, 세균 protease 추출액은 37.8%였고, 아미노산 함량은 물추출액은 16.3%, 세균 protease 추출액은 31.9%였다. 회분함량은 물추출액은 8.8%, 세균 protease 추출액은 5.6%였다. 무기물 함량은 물추출액의 경우 Ca 3.6%, P 8.6%, Mg0.01%, Na 1.4%, F 0.02%, 세균 pretense의 경우 Ca 2.5%, P 11.8%, Mg 0.046%, Na 2.1%, F 0.018%였다.

• 한국수산과학회지
• /
• 제29권3호
• /
• pp.296-308
• /
• 1996

혈합육어 (멸치와 전어)와 백색육어 (농어와 도다리)의 육과 내장에서 추출한 조효소에 대하여 천연기질 및 합성 기질에 대한 효소 활성과 disc-PAG 전기영동에서 분리된 효소 단백질의 분포를 선택적 합성기질을 써서 비교 검토하였다. 육에는 SH-proteinase인 cathepsin L, B, 및 H 유사 효소가 분포하는 것을 확인 할 수 있었으며, 이 밖에도 cathepsin G 및 D도 다소 분포하는 것으로 추정되었다. 그리고 내장에는 강한 활성의 chymotrypsin 및 trypsin 유사 효소가 주로 분포하고 있음이 확인되었다. 육과 내장에서 추출한 조효소들은 공통적으로 멸치, 전어, 도다리 그리고 농어의 순으로 활성이 높은 것을 알 수 있었으며, 전체적으로 혈합육어에 분포되어 있는 효소가 백색육어류에 분포되어 있는 효소에 비하여 약 100배정도 높았다. 육과 내장의 조효소를 방어의 근원섬유단백질에 작용시킨 결과, 육 중의 조효소는 myosin heavy chain의 분해가 두드러졌으며, 특히 멸치의 효소가 근원섬유 단백질의 구성 subunit 모두에 대하여 강한 분해능을 보였다. 내장 조효소의 경우는 반응 초기에 myosin heavy chain과 actin을 현저하게 분해시켰으며, 혈합육어인 멸치와 전어 조효소의 분해능이 백색육어인 농어와 도다리의 조효소보다 강한 것을 확인 할 수 있었다. 육의 조효소는 어종에 따라 서로 다른 분해 양상을 보였으며, 내장 조효소는 혈합육어와 백색육어의 효소 활성뿐만 아니라 효소의 분포상으로도 많은 차이가 있었다.

• 한국식품과학회지
• /
• 제37권5호
• /
• pp.827-832
• /
• 2005

본 연구는 B. subtilis JM3 단백분해효소 첨가 멸치액젓에서 분리한 peptide의 기능성(항산화, 항암 및 ACE 저해활성)에 대하여 분석하였으며, 그 결과는 다음과 같다. 아미노실소 및 가수분해도는 단백분해효소 첨가구가 대조구에 비해 높았으며, 대조구, B. subtilis JM3 단백분해효소 2 및 4% 첨가구의 멸치액젓은 gel chromatography 상에서, 각각 5, 6 및 7개의 peak를 나타내었다. ACE 저해, DPPH 라디칼소거 및 항암활성은 대조구의 경우 peak 5에서 각각 34.82, 94.11 및 38.29%, 2% 효소 첨가구는 peak 6에서 각각 43.75, 90.01 및 15.61%로 4% 효소 첨가구는 peak 7에서 각각 26.34, 97.00 및 34.76%이었다. 가수분해시 생성된 peptide는 다양한 생리활성을 가지고 있었으며, 앞으로 생리활성을 갖는 peptide의 구조 분석에 관한 연구 및 그 억제 기작에 대한 더 많은 연구가 필요하다고 본다.

• Journal of Nutrition and Health
• /
• 제45권5호
• /
• pp.429-436
• /
• 2012

본 연구는 폐기되는 홍게껍질의 단백질을 활용하기 위하여 홍게껍질 분말에 상업적으로 사용하는 6가지 protease를 단일 또는 혼합처리하여 획득한 가용성 가수분해물의 분자량 및 아미노산 조성 등을 비교 분석하여 기능성 소재 및 보충제로서의 활용 가능성을 확인하고자 하였다. 단일효소 6종 중 단백질 분해능은 Biuret assay과 280 nm assay 및 $^{\circ}Brix$로 분석한 결과 Protease A (PA)가 현저하게 높았다. 단일효소 처리로 생성된 가수분해물의 단백질 분자량은 150 kDa 이하의 밴드를 형성하였다. 단일효소 중 단백질 분해능이 가장 강력한 PA의 최적 가수분해 조건을 선정하여 PA에 Protamex (P), Flavourzyme (F), Alcalase (A), Protease M (PM)과 Protease A (PA)를 1대 1의 비로 혼합 (PA + P, PA + PM, PA + F, PA + A)하여 GC로 아미노산 조성을 확인하였다. 총 아미노산 함량은 PA + P 247.411 mg/g > PA + F (206.442 mg/g) > PA + A (133.385 mg/g) > PA + PM (59.131 mg/g) > PA (54.875 mg/g)의 순으로 혼합효소처리가 단일효소처리에 비해 높은 것을 확인할 수 있었다. 혼합효소처리 한 홍게껍질의 아미노산 조성은 사용 효소에 따라 다소 차이가 있었다. 주로 phenylalanine, glycine, alanine, leucine의 함량이 높았으며 tyrosine, cystine은 검출되지 않았다. 쌀을 주식으로 하는 우리나라 사람들에게 부족되기 쉬운 필수 아미노산인 lysine, phenylalnine, leucine, isoleucine의 함량이 높아 아미노산 보충효과를 기대할 수 있을 것으로 보인다.