• 제목/요약/키워드: polyacrylamide gel electrophoresis

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Purification and Comparison of NADH-Cytochrome $b_5$ Reductase from Mitochondrial Outer Membrane of Bovine Heart and Turnip

  • 이재양;김영호;이상직
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제19권2호
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    • pp.160-164
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    • 1998
  • The NADH-cytochrome b5 reductase (NCBR), a mitochondrial external electron carrier, was purified from bovine heart and turnip and their properties were examined. The mitochondrial outer membranes separated were subjected to NCBR isolation through DEAE-Cellulose ion exchange, DEAE-Sephadex gel chromatography, and hydroxyapatite adsorption chromatography. These processes yielded the purification folds of 88 and 42 and the recovery percentages of 0.2%, 5.67% for turnip and bovine heart, respectively. The molecular weight of the NCBR from the two sources was estimated to be 35,000 using SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The Michaelis constant Km and maximum velocity Vmax were determined by measuring the NADH-ferricyanide redox system as well as the NADPH-ferricyanide redox system. The kinetics showed that both NCBRs had higher affinities for NADH than artificial electron-acceptor substrate ferricyanide. Although NADPH had a lower affinity for the enzymes than NADH, this study showed the 2'-phosphate dinucleotide could be used as a substrate.

빗자루병(病)에 감염(感染)된 대추나무 조직내(組織內) 단백질(蛋白質)의 전기영동(電氣泳動) (Electrophoresis of Proteins in the Tissues from Witches' - Broom infected Jujube Tree)

  • 나용준;박원철;박원목;이용세
    • 한국산림과학회지
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    • 제66권1호
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    • pp.79-81
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    • 1984
  • 대추나무가 대추나무 빗자루병(病)마이코플라스마(Jujube witches' broom mycoplasma)에 감염(感染)되었을 때 식물체내(植物体內)의 단백질상(蛋白質像)에 어떠한 변화(變化)가 일어나는가를 위해, 잎과 줄기조직(組織)의 단백질추출액(蛋白質抽出液)을 2-30% polyacylamide linear gradient disc gel 상(上)에서 전기영동(電氣泳動)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1) 건전조직(健全組織)과 감염조직(感染組織)의 단백질기영동상(蛋白質氣泳動像) 간(間)에는 뚜렷한 차이(差異)를 보였다. 즉, 건전엽(健全葉)에서 뚜렷하게 나타난 단백질영동대(蛋白質泳動帶) (분자량(分子量) 약(約) 50 kd)가 감염엽(感染葉)에서는 관찰(觀察)되지 않았다. 한편, 감염엽(感染葉)에서는 25 kd의 영동대(泳動帶)가, 그리고 건전엽(健全葉)에서는 198 kd의 영동대(泳動帶)가 각각(各各) 강(强)하게 나타났다. 2) 감염주내(感染珠內)의 외관상건전엽(外觀上健全葉)에서는 50 kd의 특이영동대(特異泳動帶)가 다소(多少) 약(弱)하게 나타남으로써 건전목(健全木)의 엽(葉)과 감염엽(感染葉)의 중간상태(中間狀態)의 단백질영동상(蛋白質泳動像)을 보였다. 3) 줄기의 경우 잎과는 대조적(對照的)으로, 건전(健全)줄기에 없는 특이영동대(特異泳動帶)(335 kd)가 감염(感染)줄기에서 나타났다.

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참깨박(粕) 단백질(蛋白質)의 분리(分離)와 조성(組成) (Separation and Composition of Sesame Meal Protein)

  • 김준평;심우만;김종익
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제23권1호
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    • pp.14-22
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    • 1980
  • 흰참깨에 20.5%, 검정참깨에 19.20%, 참박(粕)깨에 44.7%의 조단백질이 함유되어 있다. n-hexane을 용매로하여 지방을 추출한 것이 수율이 가장 높았다. 조단백질의 분리에 있어서 pH가 알칼리성으로 갈수록 수율이 좋았다. 참깨의 globulin은 70.9%이었고 prolamin는 1.6%였다. 전(全)참깨의 아미노산으로는 glutamic acid가 17.1%로 가장 많았고 globulin의 아미노산으로는 glutamic-acid 14.6%이었고 필수 아미노산도 다량 고루 함유되어 있었다. 흰참깨와 검정참깨의 albumin 및 globulin의 단백질은 Disc gel 전기영동상에서 각각 $12{\sim}13$개 그리고 2개의 band로 나타났다. 참깨박(粕) 단백질의 주단백질인 globulin의 Sephadex G-100 및 G-200 column 분리하고 이를 disc gel 전기영동으로 검색하였다.

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Arthrobacter luteus가 생산(生産)하는 효모(酵母) 세포벽(細胞壁) 용해(溶解) 촉진인자(促進因子)의 정제(精製) 및 그 이화학적(理化學的) 성질(性質) (Purification and Properties of the Factor from Arthrobacter luteus, Capable of Accelerating the Lysis of Yeast Cell Walls)

  • 오홍록;아이조노 야스오;시모다 타다히사;마사루 푸나트수
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제12권4호
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    • pp.387-394
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    • 1983
  • zymolyase(${\beta}-1$, 3-glucanase)의 효모(酵母) 세포벽(細胞壁)에 대한 용해작용(溶解作用)을 촉진(促進)시키는 인자(因子)를 zymolyase의 조효소(粗酵素)로부터 분리(分離)하여 Sephadex G-75 gel 여과(濾過) 및 조제용(調製用) PAG-전기영동법(電氣泳動法)에 의하여 전기영동적(電氣泳動的)으로 균일(均一)하게 정제(精製)하였다. SDS-PAG 전기영동법(電氣泳動法)에 의하여 측정한 정제(精製) 인자(因子)의 분자량(分子量)은 40,500이었고, 등전점(等電點)은 pH 9.6이었다. 정제(精製)된 촉진인자(促進因子)는 395개(個)의 아미노산 잔기(殘基)로 구성(構成)되는 단일(單一) polypeptide의 염기성(鹽基性) protease임이 밝혀졌으며, 이 protease의 흡광계수(吸光係數)($E_{208,cm}^{1%}$)는 11.9, 분자흡광계수(分子吸光係數)(${\varepsilon}_{280,}mole/l$)는 $4.83{\times}10^4$이었다.

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폴리비닐 알콜 분해균 Xanthomonas campestris J2Y의 Polyvinyl alcohol oxidase 정제 및 성질 (Purification and Properties of the Polyvinyl alcohol oxidase from Xanthomonas campestris J2Y)

  • 권대준;조윤래
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제39권5호
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    • pp.349-354
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    • 1996
  • 생물학적 난분해성 물질인 폴리비닐 알콜(PVA : Polyvinyl alcohol)을 탄소원 및 에너지원으로 이용하는 Xanthomonas campestris J2Y로부터 PVA oxidase를 생산하여 정제하기 위하여 PVA가 탄소원으로 첨가된 배지에서 진탕배양한 배양액을 원심분리한 후 상등액을 10 mM phosphate buffer(pH 7.5)로 평형시킨 DEAE -cellulose를 통과시켜 얻은 분획을 사용하여 DEAE-cellulose와 Sephadex G-150을 이용한 Gel filtration을 통하여 PVA oxidase를 정제하였다. 정제된 PVA oxidase는 polyacrylamide gel 전기영동으로 단일밴드로 확인되었으며 SDS-polyacrylamide gel 전기영동과 Sephadex G-150 column chromatography를 통해 측정한 결과 55,000 daltons 이었다. PVA oxidase의 최적 pH는 7이고 최적온도는 $37^{\circ}C$였다. 열 안정성은 $50^{\circ}C$까지는 70% 이상의 안정성을 나타내었고, pH에 대한 안정성은 5-11에서 비교적 안정하였다. 금속이온에 대한 영향은 $Ag^{2+},\;Hg^{2+},\;Sn^{2+}$ 등에서는 아주 강한 저해를 받았고, $Co^{2+},\;Fe^{2+},\;Zn^{2+},\;Pb^{2+}$에서는 50% 정도의 저해를 받았다. 반면에 $Mn^{2+},\;Cu^{2+}$는 효소활성을 증가시켰다. PVA에 정제 PVA oxidase의 Km치는 $7.04{\times}10\;^2mmol/{\ell}$이었다.

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Haloarcular sp. EH-1이 생산하는 Amylase의 정제 및 특성 (Purification and Characteristics of Amylase from Haloarcular sp. EH-1)

  • 정명주;박형숙
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제27권2호
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    • pp.129-135
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    • 1999
  • EH-1 was highest at 9 days of incubation. This regrowth and enzymatic activity of Haloarcular sp. EH-1 was highest at 9 days of incubation. This amylase was purified by acetone fractionation, DEAG-Cellulose column chromatography, 1st Sephadex G-75 gel filtration, CM-Cellulose column chromatography and 2nd Sephadex G-75 gel filtration. The amylase was purified about 98.64 fold with a yield of 11.75%. The molecular weight of amylase was estimated to be about 43,000and 40,000 by gel filtration and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, respectively, suggesting that the enzyme was a monomer. Amylase had an optimal temperature of 4$0^{\circ}C$, and an optimum pH of 7.0, and the thermal stability was observed the above 50% at 10$0^{\circ}C$ after 1 hour, and the stable range of pH was 6.0 to 8.0. The enzymatic activity was increased in the presence of 10 mM 2-mercaptoethanol, slightly by 10 mM SnCl2.2H2O.FeCl2.4H2O.CuCl2.2H2O.HgCl2.6H2O and SDS. End products from soluble starch were glucose, maltose and maltotriose, and Km value for soluble starch was 2.5mg/ml.

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Thiobacillus neapolitanus R-10으로 부터 산화 효소의 분리 정제와 특성 (Purification and Characterization of Oxidase Induced from Thiobacillus neapolitanus R-10)

  • 원용돈;김동석;류병호
    • 한국환경과학회지
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    • 제5권1호
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    • pp.43-50
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    • 1996
  • Thiobacillus neopolitanus R-10, which produces a active thiosulfate oxidase was isolated from nightsoil. The optimal culture conditions of Thiobacillus neopolitanus R-10 for the production of enzyme was determined as followed: 0.8% $Na_2S_2O_3$, 0.2% $KH_2PO_4$, 0.2% $K_2HPO_4$, 0.04% $Na_2CO_3$, 0.02% $MgSO_4$.$7H_2O$, 2ml trace elements solution, ann PH 6.5 at 3$0^{\circ}C$ and 72hr cultivation. The oxidase was successively purified 83 folds yield by ${(NH_2)}_2SO_4$ fractionation, DEAE-Cellulose, Sephadex A-50 column chromatogrophy and gel Sephadex G-150 gel filteration with yield of 5.9%. The molecular weight of purified enzyme was estimated to be 43.000 dalton by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and gel filteration column chromatography The enzyme activity was highest at 40t and PH 7.0 The enzyme activity was relatively high by $\beta$-mercaptoethanol but strongly inhibited by cysteine.

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Evaluation of Pork Myofibrillar Protein Gel with Pork Skin Gelatin on Rheological Properties at Different Salt Concentrations

  • Lee, Chang Hoon;Chin, Koo Bok
    • 한국축산식품학회지
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    • 제39권4호
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    • pp.576-584
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    • 2019
  • This study was performed to evaluate the physicochemical properties of myofibrillar protein (MP) gels containing pork skin gelatin at different salt concentrations. MP gels were prepared to the different salt levels (0.15, 0.30, and 0.45 M) with or without 1.0% of pork skin gelatin. Cooking yield (CY), gel strength, shear stress were measured to determine the physical properties, and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, scanning electron microscopy, fourier transform infrared spectroscopy, sulfhydryl group and protein surface hydrophobicity was performed to figure out the structural changes among the proteins. The addition of gelatin into MP increased CYs and shear stress. MP at 0.45 M salt level had the highest CY and shear stress, as compared to MPs at lower salt concentrations. As the salt concentration of MP gels increased, the microstructure became the compact and wet structures, and decreased the amount of ${\alpha}-helix$/unordered structures and ${\beta}-sheet$. MP with gelatin showed a decreased amount of ${\alpha}-helix$/unordered structures and ${\beta}-sheet$ compared to MP without gelatin. The addition of gelatin to MP did not affect the sulfhydryl group, but the sulfhydryl group decreased as increased salt levels. MP mixtures containing gelatin showed a higher hydrophobicity value than those without gelatin, regardless of salt concentration. Based on these results, the addition of gelatin increased viscosity of raw meat batter and CY of MP gels for the application to low salt meat products.

非姙娠 및 姙娠한 女子의 血淸蛋白質 패턴의 比較 (The Comparison of Protein Patterns of Sera in Non-Pregnant and Pregnant Women)

  • Ha, Man-Joon;Park, Won-Chul
    • 한국동물학회지
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    • 제29권2호
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    • pp.86-106
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    • 1986
  • 사람의 혈액중 혈청으로써 임신의 진행에 따른 단백질의 변화 양상을 조사함에 있어서 정상인 남자, 비임신 여자, 임신한 여자 및 분만 직후 여자의 혈청을 SDS/polyacrylamide gel 전기영동과 2차원 전기영동 및 아미노산분석을 시도하였다. 각 실험 방법에 의해 분석된 결과는 다음과 같다. 1. SDS/polyacrylamide gel 전기영동에 의해 분자량 약 10,000에서 110,000 dalton 사이의 정상인 남자와 비임신 여자를 비교하였을 때의 숫적 양상은 서로 동일하였으나 bands 3 (22,000 dalton)과 6(39,000)등은 남자에 있어서 여자보다 적은 양으로 나타났다. 비임신 여자와 2주 간격으로 혈액을 채취한 임신한 여자의 혈청단백질 패턴을 비교하면 여러 band들의 양적인 증감이 관찰되었다. 임심한 여자의 단백질은 비임신에 비해 band 3(22,000)이 16주까지는 비임신의 경우와 거의 비슷한 양상을 보였으나 18주부터 임신 말기까지는 단백질의 양이 계속하여 감소되었다. 반면 bands 4(24,000), 9(69,000), 10(70,000), 12(80,000), 13(83,000), 14(86,000), 15(91,000) 및 16(94,000)은 임신이 진행됨에 따라 일반적으로 증가되나 그 이후에는 약간씩 감소하였다. 분만 직후의 혈청단백질의 패턴을 임신 말기와 비교하였을 때 bands 12(80,000), 15(91,000) 및 16(94,000)들의 양이 비교적 증가하였고 여아를 분만한 경우 남아를 분만한 경우보다 bands 4(24,000), 7(51,000) 및 10(70,000)들의 단백질 양이 많음이 관찰되었다. 2. 2차원 전기영동으로 남자와 비임신 여자의 혈청단백질 패턴을 비교하면 spot a(22,000)의 3개의 spot가 남자에 있어서는 나타나지 않았고, spotc(39,000)의 군은 남자에 있어 여자보다 농도가 매우 낮았다. 임신한 여자에 있어 albumin이 임신 10주와 12주에 매우 감소하였고 그 이후에 다시 회복되었다. 그리고 spot f(70,000)는 임신 10주에 매우 감소 되었다가 그 이후에 증가되었다. 3. 각 군들의 아미노산을 분석한 결과 임신한 여자에 있어서 전반적으로 glutamic acid, lysine, aspartic acid, leucine 및 valine이 대체로 많은 양으로 나타났고, methionine, isoleucine 및 glycine이 대체로 적은 양을 가지는 것으로 나타났다. 전체 아미노산의 양은 임신중기에 현저히 증가하였다가 말기에는 중기에 비해 감소되었다. 이상의 결과를 볼 때 임신기간 중에는 모체의 혈청을 구성하는 단백질이 특정한기에 따라 증가하므로 임신한 여자의 혈청단백질을 조사함으로써 임신의 각기에 나타나는 독특한 단백질 양상 변화를 밝혀내는 동시에, 앞으로 좀더 연구함으로써 태아의 성을 단백질 패턴으로 명확히 구별해 낼 수 있을 것으로 생각된다.

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고온, 알칼리성 Bacillus K17이 생성하는 Xylanase의 정제 및 특성 (Purification and Characteristics of Xylanases from Produced Thermophilic Alkalophilic Bacillus K17)

  • Kang, In-Soo;Sung, Nack-Kie;Chun, Hyo-Kon;Teruhiko Akiba;Koki Horikoshi
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제14권6호
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    • pp.447-453
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    • 1986
  • 고온, 알칼리성 Bacillus K17이 생성하는 extracellular xylanase를 각종 resin으로 정제하여 비흡착 분획에서 xylanase I과 흡착 분획에서 xylanase II를 분리정제하였고, SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis에 의하여 분자량을 측정하였던바 xylanase I은 23,000, xylanase II는 47,000으로 추정되었다. Xylanase I 및 II는 최적온도, 최적 pH, 열 안정성, pH 안정성, 기질 친화력에서 차이가 있었으며 Cu$^{++}$, Ag$^+$, Fe$^{++}$, Hg$^{++}$에 의해 다같이 저해되었다. Xylanase I은 xylan을 Xylobiose, xylotriose, xylotetraose로 분해시키며 그 분해율이 22%로 나타났다. 그리고 xylanase II xylose, xylobiose, xylotriose로 분해시키며 그 분해율이 30%이었다. 효소적 분석은 효소가 갖는 기질특이성으로 인해 다성분계의 분석재료로부터 측정한 성분만을 정량 가능하므로 생체성분의 분석에 널리 활용되고 있다.

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