• 미생물학회지
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• 제25권4호
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• pp.282-289
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• 1987

Pseudomonas putida KU816에서 분리한 플라스미드 pKU10의 여러가지 특성을 조사하고 그 제한 효소 지도를 작성하였다. pKU 10은 암펴설런, 테트라사이클린, 클로람페니콜에 대한 내성 유전자를 갖는 작은 R factor로서 마이토마이신 C에 의하여 큐어링 된다. 플라스미드의 크기는 9.4Kb로 측정되었다. pKU 10은 Pseudomonas와 E.coli블 숙주로 하였을 때 안정하게 형질 발현이 되다. 또한 pKU 10의 불화합성균은 IncP-I으로 조사되었다. Eco RI, Xho I. SaiI, BglII, SmaI은 pKU 10 DNA를 한 부위에서 자르고, Pst I은 두 부위, Hind Ill는 여섯 부위에서 자른다. 제한 효소 지도는 제한 효소를 이중, 삼중으로 완전 소화시키거나, 부분 소화시켜서 얻었다. pKU 10은 Pseudomonas속에서 유용한 클로닝 벡터호 이용된 것으로 기대된다.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권3호
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• pp.219-226
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• 2000

야생종 토마토의 자가불화합성에 관여하는 S RNase 유전자를 자가화합성인 재배종 토마토에 도입하여 형질전환 식물체를 만들었다. 재조합 Ti-plasmid pBI-S$_{11}$을 제작하여 Agrobacteria를 이용한 leaf disc transformation방법으로 재배종 토마토에 형질전환시켰으며, Southern분석을 통해 형질전환 식물체의 염색체 내에 자가불화합성 유전자가 안정된 구조로 도입되었는지 확인하였다. 형질전환 식물체의 화주 단백질을 이용하여 RNase활성 염색을 하여 화주 내 5단백질의 활성을 확인하였다. 또한 형질전환 식물체의 화주 단백질을 이용하여 western분석을 수행한 결과, 야생종 토마토 유래의 자가불화합성 유전자에 의해 5단백질을 정확하게 발현하는 식물체를 확인, 선발하였다. 선발된 형질전환 식물체의 화분, 화주, 화변, 잎, 줄기 등 5개의 조직을 western분석하여 5 RNase 유전자가 야생종 토마토에서와 유사한 형태로 화주조직에서만 높게 발현되며 형질전환된 재배종 토마토에서도 조직 특이적으로 발현한다는 것을 확인하였다. 위의 결과로 야생종 토마토에서 자가불화합성에 결정적인 영향을 미치는 S RNase를 재배종 토마토에 발현시켰을 때 자가불화합성을 나타내는 재배종 토마토의 표현형은 변화가 없다는 것과 어떠한 형태적인 변화도 없다는 사실을 확인하였다. 그리고 배우자체 자가불화합성 기작에는 화주쪽의 S RNase 이외에 화분쪽의 또 다른 기구가 있다는 것을 추측할 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권12호
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• pp.2224-2227
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• 2016

Shigella sonnei harboring $bla_{CTX-M-55}$ was isolated outside of Asia for the first time. The $bla_{CTX-M-55}$ gene was found to be downstream of ISEcp-1 and located in a ~130 kb conjugative plasmid belonging to the I1 incompatibility group. The strain was recovered from a 7-year-old Ecuadorian girl with watery diarrhea who had not travelled abroad. Recent local data describe the emergence of $bla_{CTX-M-55}$ and other variants typically found in Asia in the Andean Region, suggesting that increased travel of humans and trade relationships with Asian countries are influencing the current Ecuadorian bacterial resistance situation.

• Plant Resources
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• 제8권2호
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• pp.87-90
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• 2005

In tobacco, in vitro pollination has been successfully applied to overcome interspecific incompatibility. The use of this technique will make it possible to introduce DNA into pollen tubes just before fertilization. In this study, we showed improvement of the efficiency of in vitro self-pollination and introduction of foreign genes into pollen tubes by the method of polycation. A plasmid harbouring the GUS gene was introduced into pollen grains and pollen tubes, which had incubated on pollen germination medium(PGM), by polyornithine method. Transient expression of the GUS in pollen grains and pollen tubes that were treated with 0, 2, 5 and $10{\mu}g/m\ell$ DNA was observed. In results, combination of the techniques of polyornithine and in vitro pollination was efficient new technique for genetic transformation through fertilization processes.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권12호
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• pp.2184-2191
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• 2016

The time-consuming and high-cost preparation of soluble peptide-major histocompatibility complexes (pMHC) currently limits their wide uses in monitoring antigen-specific T cells. The single-chain trimer (SCT) of peptide-${\beta}2m$-MHC class I heavy chain was developed as an alternative strategy, but its gene fusion is hindered in many cases owing to the incompatibility between the multiple restriction enzymes and the restriction endonuclease sites of plasmid vectors. In this study, overlap extension PCR and one-step cloning were adopted to overcome this restriction. The SCT gene of the $OVA_{257-264}$ peptide-$(GS_4)_3-{\beta}2m-(GS_4)_4-H-2K^b$ heavy chain was constructed and inserted into plasmid pET28a by overlap extension PCR and one-step cloning, without the requirement of restriction enzymes. The SCT protein was expressed in Escherichia coli, and then purified and refolded. The resulting $H-2K^b/OVA_{257-264}$ complex showed the correct structural conformation and capability to bind with $OVA_{257-264}$-specific T-cell receptor. The overlap extension PCR and one-step cloning ensure the construction of single-chain MHC class I molecules associated with random epitopes, and will facilitate the preparation of soluble pMHC multimers.

• 대한미생물학회지
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• 제17권1호
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• pp.21-34
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• 1982

각종질환(各種疾患)으로 입원(入院)하여 항균제투여(抗菌劑投與)를 받은 환자(患者)와 최근(最近) 1개월간(個月間) 항균제(抗菌劑)를 투여(投與)받지 않은 학생(學生) 각(各) 60명(名)의 대변(大便)을 배양(培養)하여 각각(各各) 121주(株), 합계(合計) 242주(株)의 대장균(大腸菌)을 얻어 12종(種)의 항균제(抗菌제劑)에 대한 내성양상(耐性樣相)을 조사(調査)하였다. 내성빈도(耐性頻度)를 보면 tetracycline에 대(對)한 내성균(耐性菌)이 68.2%로 가장 많았고 streptomycin(Sm) 61.2%, sulfisomidine(Su) 50%, chtoramphenicol(Cm) 40.9%, ampicillin(Ap) 40.1%, carbenicillin(Cb), 39.3%의 순(順)으로 내성균(耐性菌)의 비율(比率)이 낮아졌고 kanafnycin(Km) cephaleridine(Cr) 및 trimethoprim(Tp)에 내성(耐性)인 균(菌)은 약(約) 1/4이었고 nalidixicacid, gentamicin 및 amikacin에는 4주(株)씩 만이 내성(耐性)이고 rifampicin에 내성(耐性)인 균(菌)은 없었다. 환자유래균(患者由來菌)과 학생유래균(學生由來菌)을 비교(比較)하여 보면 Cm, Ap, Km, Cr 또는 Cb 내성(耐性)은 환자유래균(患者由來菌)에서 학생유래균(學生由來菌)보다 월등(越等)히 많았으며 Sm, Su 또는 Tp 내성균(耐性菌)도 다소(多少) 많았으나 기타(其他) 항균제(抗菌劑)에 대(對)한 내성균(耐性菌)에서는 차이(差異)를 볼 수 없었다. 내성균(耐性菌)과 감수성균(感受性菌)에 대(對)한 각(各) 항균제(抗菌劑)의 최소(最少) 발육저지농도(發育阻止濃度)에는 큰 차이(差異)가 있어서 이들 내성(耐性)이 주(主)로 R plasmid에 유래(由來)함을 시사(示唆)하였다. 공시균(供試菌)의 76%가 $1{\sim}10$제(劑) 이상(以上)의 약제(藥劑)에 내성(耐性)이었는데 4제(劑) 이상(以上)의 항균제(抗菌劑)에 내성(耐性)인 균(菌)은 환자유래균(患者由來菌)에서 학생유래균(學生由來菌)에서 보다 많았으며 다약제내성(多藥劑耐性)일수록 환자유래균(患者由來菌)에서 많았다. 2제(劑) 이상(以上)의 항균제(抗菌劑)에 내성(耐性)인 균(菌)에 접합(接合)에 의한 내성전달(耐性傳達)을 145주중(株中) 98주(株)(67.5%)가 내성(耐性)을 전달(傳達)하였으며 7제(劑) 이상(以上)에 내성(耐性)인 균(菌)은 1주(株)를 제외(除外)한 전부(全部)(73주(株))가 그 내성(耐性)을 피전달균(被博達菌)에 전달(傳達)시켰고 다약제내성(多藥劑耐性)의 약제수(藥劑數)가 적을수록 전달성내성(傳達性耐性)을 가진 균(菌)이 적었다. 전달(傳達)되는 내성양상(耐性樣相)은 내성균주(耐性菌株)에 따라 다르며 피전달균(被博達菌)에 따라서도 달랐다. 임의(任意)로 선택(選擇)한 P13균주(菌株)의 R plasmid의 비적합성군(非適合性群)을 보았던바, 이 plasmid는 F II군(群)에 속(屬)함이 판명(判明)되었다. Gel electrophoresis에 의하여 대장균(大腸菌) R plasmid DNA의 형광대(螢光帶)를 증명(證明)할 수 있었다.

• 대한미생물학회지
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• 제21권4호
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• pp.461-471
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• 1986

1973년부터 1985년 사이에 대구지방에서 분리된 Shigella는 약 1,200주였는데, 대부분이 Shigella flexneri였고, S. sonnei는 약 20%였으며, S. dysenteriae와 S. boydii는 극히 적었다. 분리균의 95%이상이 chloramphenicol(Cm), tetracycline(Tc), streptomycin(Sm), sulfisomidine(Su), ampicillin(Ap), trimethoprim(Tf) 등의 전부 또는 일부 약제에 내성이었으며, kanamycin, nalidixic acid(Na)와 rifampin(Rf)에 내성인 균주는 소수 있었으나, cephaloridine, gentamicin, amikacin 등에 내성인 균주는 없었다. 1973년에 분리된 균은 약 절반이 약제내성이었으나, 1977년 이후 분리된 균은 95% 이상이 약제내성이었다. 1977년 까지는 Cm, Tc, Sm 및 Su의 4제 내성균이 가장 많았으나 1978년 부터는 Cm, Tc, Sm, Su, Ap 및 Tp의 6제 내성균이 가장 많았다. 약 75%의 균이 그 약제내성을 접합에 의하여 Escherichia coli에 전달하였으므로 이 약제내성은 R plasmid에 의한 것으로 생각되었다. 대다수의 균에 있어서 약제내성 전부를 E. coli에 전달하였으나, Na와 Rf의 내성은 전달되지 않았다. 일부 균주의 약제내성은 E. coli에 전달될 때 분리되는 일이 있었으나, 그 수는 극히 적었다. Shigella의 R Plasmid는 대부분이 비적합성군(incompatibility group) F II에 분류되었으나, 극소수는 B군에 속하였고 군별이 안되는 것도 있었다.