The concentrations of L-ascorbic acid (AsA, ascorbate, vitamin C) and its biosynthetic and metabolically-related enzymes such as L-galactono-1,4-lactone dehydrogenase (GLDase), ascorbate peroxidase (APX), and ascorbate oxidase (ASO) were investigated in suspension cultures of Scutellaria baicalensis. Cells growing from 4 days after subculture (DAS) to 9 DAS and from 16 DAS to 19 DAS showed a diauxic growth, and then growth rapidly decreased with further culturing. The AsA content slowly increased to 19 DAS, reached a maximum at 21 DAS (ca $120\;{\mu}g/g$ dry cell wt), and then rapidly decreased with further culturing. GLDase and ASO activity were well correlated with the cell growth curve, showing a maximum at 19 DAS, whereas APX activity showed a good correlation with the changes in AsA content, showing a maximum at 21 DAS. The total ascorbate contents (reduced form, AsA, and oxidized form, dehydroascorbate, DHA) were markedly enhanced at 10 DAS when L-galactose and L-galactono-1,4-lactone (25 mM) were added to SH medium supplemented with 20 g/l sucrose at 9 DAS, by 5.5 and 6.8 times, respectively. DHA composed more than 90% of the total ascorbate contents in suspension cultures of S. baicalensis, even though the ratio of reduced to oxidized form slightly varied with cell growth stage. The results indicate that L-galactose and L-galactono-1,4-lactone are effective precursors of AsA in cell cultures of S. baicalensis, and that in vitro cultured cells provide suitable biomaterials for the study of biosynthesis and metabolism of AsA.
Corydalis remota Fish. ex Max. (Papaveraceae) is a well known medicinal plant being used as analgesics or anticonvulsive in oriental medicine. As the alkaloid content is known to vary depending on the environmental factors, the technology of plant tissue culture can be adopted as source of Corydalis-alkaloids. The present study describes an establishment of tissue cultures of Corydalis which produce alkaloids consistently. Callus were induced from immature seeds of Corydalis remota by placing the seeds on MS static media containing NAA(0.25, 1.0 and 4.0 mg/l, respectively). The combined treatment of NAA(1.0 mg/l) with cytokinin(BAP 0.5 mg/l) improved the induction of callus. TLC scanning data followed by sequential extraction and purification revealed that the induced callus contains a significant amount of alkaloids. Cell suspension cultures were established by transferring the induced callus into the liquid media with the same condition of plant growth regulators as the callus culture.
The biological control effect of Trichoderma harzianum on the Fusarium wilt of strawberry and several factors affecting on its efficacy were examined through pot experiments. T. harzianum grown on wheat barn, rice straw, rice hull, sawdust or barley straw was respectively incorporated into the pathogen-infected soil, and significantly suppressed the strawberry wilt caused by Fusarium oxysporum f. sp. fragariae. The wheat bran or rice straw culture of T. harzianum suppressed the disease incidence more effectively than other substrates for culture, decreasing it to 68% of the untreated control. The conidial suspension of T. harzianum alone or the suspension mixed with crab shell also effectively reduced the disease incidence. The control effectiveness of T. harzianum was high in acid soil (pH 3.5~5.5). In sandy loam soil, the disease incidences and population densities of the pathogen were decreased by the treatment of T. harzianum, while there was no significant effect of T. harzianum on the pathogen in loam soil.
Changes of peroxidase activity, polyamine content and ethylene production during somatic embryogenesis in suspension-cultured carrot (Daucus carota L.) cells were investigated. As compared with nonembyrogenic cells and their medium, embryogenic cells and their medium were characterized by higher levels of peroxidase at all times of culture period. Peroxidase in embryogenic cells showed higher oxidation activity of IAA than in nonembryogenic cells at the torpedo stage, but the IAA oxidation activity of peroxidase released into embryogenic medium was lower than that of peroxidase released into nonembryogenic medium. Peroxidase patterns of embryogenic and nonembryogenic cells showed three cathodic bands, and one anodic band, while peroxidase patterns released into embryogenic and nonembryogenic media did not show any anodic bands and the isoelectric points of cathodic peroxidase were pH 7.7, 7.5 and 6.6. Compared with nonembryogenic cells, polyamine content in embryogenic cells was increased by 15% at the torpedo stage, but polyamine ratio was constant, and ethylene production was extremely low at all times of culture period. Therefore, it is suggested that the peroxidase in embryogenic cells is correlated with embryogenesis by regulating hormone ratios through IAA oxidation, while the peroxidase isozyme patterns may be used as a biochemical marker of embryogenesis. The increase of polyamine content and the decrease of ethylene production suggest an interaction between polyamine and ethlyene during embryogenesis.
태백벼의 현탁배양세포주로부터 유도된 체세포배를 낱개로 알진산 캡슐화하여 인공종자화하였다. 인공종자는 1/2 MS 고체배지에서 73%의 발아율을 나타내었으며 알진산 캡슐은 체세포배의 발아율에 영향을 주지 않았다. 그러나 멸균되지 않은 여과지에서는 발아율이 60%로 낮아졌다. 캡슐화된 진정종자는 무균상태여부에 관계없이 높은 발아율을 나타내었다. 이상의 결과로 무균상태가 유지되지 않을 때 인공종자 발아율이 낮아지는 것은 체세포배가 진정종자의 접합자배보다 오염을 견디기 어렵기 때문인 것으로 사료된다.
Involvement of ethylene and Ca2+ on the induction of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) was investigated in Daucus carota L. suspension culture system. Ethylene production started to increase about 3 h after glucan treatment. And the maximal induction of ethylene was preceded by PAL induction by 30 min. After the treatment of ethrel, PAL activity was increased. When cells were treated with glucan and Co2+, PAL activity was simultaneously reduced. Ethylene production was reduced dramatically in calcium-free medium, even though glucan was treated. PAL activity and ethylene producton was inhibited conspicuously when ethylene glycolbis($\beta$-aminoethyl ether) N,N,N',N'-tetraacetic acid (EGTA) was treated with glucan. Verapamil and trifluoperazine also inhibited PAL activity. When cells were treated with calcium ionophore A23187, PAL activity was increased in nontreated medium. We report here PAl activity is increased in related to ethylene production and involvement of Ca2+ in glucan-treated carrot suspension cells.
Suspension cultures of Digitalis lanata were successfully performed in an aqueous two-phase system (ATPS) of 4.5% polyethylene glycol (PEG) 20,000 and 2.8% crude dextran. Cell growth in the medium containing an individual ATPS-forming polymer was inhibited due to the toxicity of PEG and a high viscosity of dextran. Formation of ATPS supported cell growth by showing a considerably decrease in viscosity and partitioning of cells into a PEG-lean dextran phase. It was found that an aqueous two-phase cultivation of plant cells in a stirred tank bioreactor could be successfully applied.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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