Carotenoid compounds in embryos of wild-type(WT) and viviparous mutants of maize(Zea mays L.) were analyzed using high performance liquid ehromatography (HPLC) with a photodiode array detector. Zeaxanthin accumulates in WT embryos as the major carotenoid. Phytoene accumulates in vp2 and vp5. Phytofluene in w3 and ${\xi}$-carotene in the vp9 mutant embryos. This indicates that the vp2 and vp5 mutants impair phytoene desaturase from 15-cis-phytoene to 15-cis-phytofluene. The w3 mutant has neither an isomerase from 15-cis-phytofluene to all-trans-phytofuene nor phytofluene desaturase from phytofluene to ${\xi}$-carotene. The vp9 mutant does not have the ${\xi}$-carotene desaturase from ${\xi}$-carotene to lycopene. Our analysis shows that the terminal carotenoid. ${\gamma}$-carotene(${\beta},{\Psi}$-carotene), accumulates in the vp7 mutant embryos. The ${\varepsilon}$-carotene(${\varepsilon},{\varepsilon}$-carotene), a product of ${\delta}$-carotene(${\varepsilon},{\Psi}$-carotene) in some plants, however, has not been found in maize embryos. The vp7 mutant impairs a cyclization step from ${\gamma}$-carotene to both ${\beta}$-carotene and ${\alpha}$-carotene. We suggest that monocyclic ${\gamma}$-carotene is the sole precursor of both bicyclic ${\beta}$-carotene(${\beta},{\beta}$-carotene) and ${\alpha}$-carotene(${\beta},{\varepsilon}$-carotene) in maize.
BACKGROUND: Tomato genome editing using CRISPR-Cas9 is being actively conducted in recent days, and lots of plant researches have been aiming to develop high valued crops by editing target genes without inserting foreign genes. Many researchers have been involved in the manipulation of the crop ripening process because fruit ripening is an important fruit phenotype for increasing fruit shelf life, taste, and texture of crops. This paper intends to evaluate target sgRNA to edit the two ripening-related genes encoding pectate lyase (PL) and phytoene synthase (Psy) with the CRISPR-Cas9 system. METHODS AND RESULTS: The CRISPR-Cas9 expression vector was cloned to target the PL (Solyc03g111690), Psy1 (Solyc03g031860), and Psy2 (Solyc02g081330) genes, which are the ripening genes of tomatoes. Tomatoes injected with Agrobacterium containing the CRISPR-Cas9 expression vector were further cultured for 5 days and used to check gene editing efficiency. As a result of the target gene sequence analysis by the next generation sequencing method, gene editing efficiency was calculated, and the efficient target location was selected for the PL and Psy genes. CONCLUSION: Therefore, this study was aimed to establish target sgRNA data that could have higher efficiency of the CRISPR-Cas9 system to obtain the delayed ripening phenotype of tomato. The developed method and sgRNA information is expected to be utilized in the development of various crops to manage its ripening processes.
새로 합성된 KC6361 유도체는 기존 디페닐에테르계 화합물에서 보였던 증상(회백색)과는 달리 식물체의 백화를 유기시킨다. 따라서 이들 화합물의 구조상 특징이 무엇이며 식물체에서 어떠한 작용기작을 갖는지를 알기 위하여 본 실험을 수행하였다. 1) 백화를 유기시키기에 비교적 적당한 구조는 B환의 para 위치에 nitro기가 있고 A환의 meta 위치에 탄소수가 3개 이하의 alkyl 또는 allyl기를 가지는 carbamoyl이 치환되는 것이었다. 벼 등은 2kg/ha 수준에서 미미한 약해를 보여 비교적 좋은 선태성을 가졌고 바랭이, 피, 참방동산이, 비름 등은 0.25~0.5kg/ha에서 기타는 0.5~1.0kg/ha에서 거의 방제되었다. 2) 암조건에서 KC6361은 carotenoid 생성을 억제시켰으나 엽록소는 오히려 촉진시켰다. 명조건의 경우 높은 광도에서는 낮은 광도에서 보다, 엽록소보다는 carotenoid가 더욱 저해되었고 $^{4}C$-acetate의 지방성분으로의 혼입 저해정도는 미약하였다. 3) 단은방주의 생장에 미치는 영향이 norflurazon과 동일한 양상을 보였고, KC6361이 처리된 오이, 식용피에 있어서 carotenoid 성분변화를 볼 때 phytoene 및 phytofluene 함량은 증가된 반면 그 이후의 ${\beta}$-carotene은 감소되어 norflurazon과 같은 경향이었다. 따라서 이상의 결과를 종합하여 볼 때 KC6361의 작용점은 norflurazon과 같이 phytoene or/and phytofluene dehydrogenase를 저해하는 것으로 판단된다.
Expression of the genes for carotenoid bio-synthesis (crt) is dependent on light, but little is known about the underlying mechanism of light sensing and signalling in the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (hereafter, Synechocystis). In the present study, we investigated the light-induced increase in the transcript levels of Synechocystis crt genes, including phytoene synthase (crtB), phytoene desaturase (crtP), ${\zeta}$-carotene desaturase (crtQ), and ${\beta}$-carotene hydroxylase (crtR), during a darkto-light transition period. During the dark-to-light shift, the increase in the crt transcript levels was not affected by mutations in cyanobacterial photoreceptors, such as phytochromes (cph1, cph2 and cph3) and a cryptochrome-type photoreceptor (ccry), or respiratory electron transport components NDH and Cyd/CtaI. However, treatment with photosynthetic electron transport inhibitors significantly diminished the accumulation of crt gene transcripts. Therefore, the light induction of the Synechocystis crt gene expression is most likely mediated by photosynthetic electron transport rather than by cyanobacterial photoreceptors during the dark-to-light transition.
신미종(辛味種)고추의 추숙(追熟)에 따른 carotenoid 색소(色素)와 chlorophyll의 변화(變化)를 측정(測定) 고찰(考察)한 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 신미종(辛味種) 고추의 carotenoid 색소(色素)를 column chromatography로 6 fraction으로 분리(分離)한 다음 각(各) fraction을 다시 TLC에 의하여 54종(種)을 분리(分離)하고 그 가운데서 30종(種)을 동정(同定)하였다. 2. carotenoid색소(色素) 총량(總量)은 cli. stage에서 급증(急增)하였고 group별(別)로 보니 diol가 가장 함량(含量)이 높고 추숙(追熟)에 따른 함량증가율(含量增加率)이 가장 높았다. 3. carotenoid 색소(色素) 개별당(個別當) 함량(含量) 변화(變化)에서 주목(注目)되는 것은 phytoene이 post cli. stage.에서 감소(減少)하고 고추의 중요(重要)한 carotenoid 색소(色素)인 ${\beta}$-carotene, capsanthin, capsorubin, violaxanthin의 함량(含量)이 크게 증가(增加) 하였다. 4. chlorophyll은 a, b, total 함량(含量)이 다같이 추숙(追熟)에 따라 감소(減少)하고 post-cli. stage에서 소실(消失)하였다.
We developed a reassortant RNA virus vector derived from $Cucumber$$mosaic$$virus$ (CMV), which has advantages of very wide host range and can efficiently induce gene silencing in a few model plants. Certain CMV isolates, however, show limited host ranges presumably because they naturally co-evolved with their own hosts. We used a reassortant comprised of two strains of CMV, Y-CMV and Gn-CMV, to broaden the host range and to develop a virus vector for virus-induced gene silencing (VIGS). Gn-CMV could infect chili pepper and tomato more efficiently than Y-CMV. Gn-CMV RNA1, 3 and Y-CMV RNA2-A1 vector were newly reconstructed, and the transcript mixture of RNA1 and 3 genomes of Gn-CMV and RNA2 genome of Y-CMV RNA2 containing portions of the endogenous phytoene desaturase (PDS) gene (CMV2A1::PDSs) was inoculated onto chili pepper (cv. Chung-yang), tomato (cvs. Bloody butcher, Tigerella, Silvery fir tree, and Czech bush) and $Nicotiana$$benthamiana$. All the tested plants infected by the reassortant CMV vector showed typical photo-bleaching phenotypes and reduced expression levels of $PDS$ mRNA. These results suggest that the reassortant CMV vector would be a useful tool for the rapid induction of the RNA silencing of endogenous genes in chili pepper and tomato plants.
The objectives of this study were to 1) evaluate the efficiency of the protocol of Agrobacterium-mediated transformation of cucumber to introduce phytoene synthase-2a carotene desaturase (PAC genes); 2) demonstrate the integration of PAC genes into the genome of putative transgenic cucumber based on growth on selection medium, PCR and Southern analysis; 3) evaluate the expression of PAC genes in transgenic cucumber based on the analysis of RT-PCR and Northern blot hybridization. Out of 5,945 cotyledonary-node explants inoculated with Agrobacterium, 65 (1.1%) explants produced 238 shoots. Integration of PAC genes into the genome of the cucumber was demonstrated based on the analysis of gDNA-PCR, 21 out of the 238 plants regenerated; while 6 plants proved positive for Southern blot hybridization. Transgene expression was demonstrated based on analysis of RT-PCR, 6 plants proved positive out of the 6 plants analyzed; while 4 plants out of 6 proved positive during Northern blot hybridization. This study successfully demonstrated the production of transgenic cucumber, integration, and expression of the PAC gene in cucumber.
Virus-induced gene silencing (VIGS) is an attractive reverse-genetics tool for studying gene function in plants. We showed that silencing of a phytoene desaturase (PDS) gene is maintained throughout TRV-PDS-inoculated tomato plants as well as in their flowers and fruit and is enhanced by low temperature ($15^{\circ}C$) and low humidity (30%). RT-PCR analysis of the PDS gene revealed a dramatic reduction in the level of PDS mRNA in leaves, flowers and fruits. Silencing of PDS results in the accumulation of phytoene, the desaturase substrate. In addition, the content of chlorophyll a, chlorophyll b and total chlorophyll in the leaves of PDS-silenced plants was reduced by more than 90%. We also silenced the LeEIN2 gene by infecting seedlings, and this suppressed fruit ripenning. We conclude that this VIGS approach should facilitate large-scale functional analysis of genes involved in the development and ripening of tomato.
Genes encoding enzymes with sequence similarity to hopanoids biosynthetic enzymes of other organisms were cloned from the hopanoid (hop) gene cluster of Streptomyces peucetius ATCC 27952 and transformed into Streptomyces venezuelae YJ028. The cloned fragments contained four genes, all transcribed in one direction. These genes encode polypeptides that resemble polyprenyl diphosphate synthase (hopD), squalene-phytoene synthases (hopAB), and squalene-hopene cyclase (hopE). These enzymes are sufficient for the formation of the pentacyclic triterpenoid lipid, hopene. The formation of hopene was verified by gas chromatography/mass spectrometry.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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