재래식 발효 청국장으로부터 분리한 8균주 중 phytase 생산성이 높은 3균주는 Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Staphylococcus epidermidis로 동정되었다. 이들 phytase 생산균주를 단독 또는 혼합균주로 하여 35-$40^{\circ}C$와 pH 7.0의 최적조건에서 5일 동안 청국장을 발효시켰을 때 최대의 phytase 생산성을 보였으며 glutamic acid와 leucine 등의 일부 아미노산과 riboflavin의 함량이 증가되고 phytic acid 의 분해율도 재래식 청국장에서 보다 훨씬 높았다. 특히 B.subtilis와 B.licheniformis의 혼합균주로 발효시켰을 때 phytic acid 함량의 감소가 현저하였다.
방사선 조사에 의한 phytic acid의 분해특성 및 항라디칼, 항산화 활성을 평가하기 위하여, phytic acid를 수용액 모델에서 방사선 조사(0∼20 kGy) 후 기존 항산화제(ascorbic acid, tocopherol, BHA)와의 항산화 특성을 비교하였다. 방사선 조사 후 phytic acid의 조사분해를 확인할 수 있었고, 조사선량이 증가함에 따라 그 분해정도가 유의적으로 증가하였다. 또한 phytic acid의 농도에 따라 방사선에 의한 영향도 다르게 나타났는데, phytic acid의 농도가 증가함에 따라 방사선 조사분해 정도가 감소하였다. 항산화 특성의 측정 결과, 방사선 조사된 phytic acid의 경우 DPPH 라디칼 소거능이 형성되었으며, 조사선량 및 phytic acid의 농도가 증가함에 따라 그 활성이 증가하는 것으로 나타났다. 저장동안 유지산패의 억제효과는 기존 항산화제보다 phytic acid의 항산화성이 유의적으로 높았으며 방사선 조사에 의해 유지 혹은 다소 상승되는 것으로 나타났다. 따라서 방사선 조사시 phytic acid의 조사분해와 동시에 항산화 특성을 증대시킬 수 있는 것으로 나타났다.
콩과 옥수수가루의 발효에 관여하는 미생물중 phytase 생산성이 강한 두 균주인 Enterobacter cloacae와 Bacillus licheniformis를 단독 균주로 사용하여 콩과 옥수수가루를 기질로 발효시켰을때 각 기질의 phytic acid 분해와 그에 따른 영양성분의 변화를 검토한 결과, 콩 가루를 기질로 E.cloacae에 의한 발효과정에서는 pH가 발효 2일 동안에 급격히 낮아졌으나, B.licheniformis의 경우는 옥수수가루중에 함유된 당으로부터 산을 생성하지 않기 때문에 pH가 발효 5일째까지 약간 감소하는 경향을 보였다.
Phytases are hydrolytic enzymes that catalyze the sequential hydrolysis of phytic acid (myo-inositol-1,2,3,4,5,6-hexakisphosphate) to myo-inositols with lower numbers of phosphate groups. Two types of phytases have been identified which initiate hydrolysis of the phytic acid at either the 3- or 6- position of the inositol ring. In the present investigation, a mathematical model was proposed and computed to estimate maximum enzyme reaction rate constants which fit the experimental data obtained by other authors. Although the data points were scattered to some extent, good agreement was found between the model and the experiment data. It appears that the maximum rate constants of removal of the first, second, and third phosphate groups were not equal. Also there was neither a steady trend upward or downward in the rate constants with the stepwise hydrolysis reactions.
본 연구는 대두 식품의 개발에 장애요인이 되고 있는 phytic acid에 의한 무기질의 체내 이용도의 감소를 알아보기 위하여 우리나라의 전통적 대두 발효 식품인 메주를 제조하여 발효에 의한 phytic acid 함량과 phytase 활성 변화 및 그에 따른 phytic acid와 무기질과의 상호작용을 연구하였다. 날콩, 열처리콩, 메주내에서의 총인의 함량은 시료간에 유의적인 차이가 없었으나 phytic acid 함량은 메주에서가 날콩이나 열처리콩에 비해 유의적으로 낮았다. 시료 1g당 phytase 활성은 날콩이 7.18units, 열처리콩이 0.11 units, 메주가 16.37 units로 나타나 발효동안에 phytase 활성이 현저히 증가되었음을 알 수 있었다. Zn, Fe, Ca의 함량은 날콩, 열처리콩, 메주간에 유의적인 차이가 없었으나 ultrafiltration 한 후 retentate에 보유된 Zn, Fe, Ca 함량은 날콩에서 보다 메주에서 유의적으로 감소함을 보였다.
가축 사료첨가용 probiotics용 균주를 얻기 위해 특히 내열성이 높아 가공사료에 적합한 Bacillus sp.를 위주로 하여 가축에게 유용한 효소인 phytase를 비롯하여 protease, cellulase, xylanase, amylase의 활성을 모두 나타내는 4-3 균주를 얻어 동정한 결과 Bacillus subtilis로 밝혀졌으며, 이를 B. subtilis 4-3으로 명명하였다. 본 균주를 원료사료에 순수배양하여 사료의 항영양인자인 phytic acid 분해율을 검토한 결과 대두박 및 쌀겨에 있어서는 phytic acid 분해율이 낮았으나, 밀기울의 경우 80.63%로 상대적으로 높은 phytic acid 분해율을 나타내었다. 원료 사료를 이용한 균주의 생산 조건은 대두박 1%(w/v)와 당밀 2%(w/v)가 가장 적합한 균주 생산을 위한 배지조성으로 검토되었다.
J. S. Yang;H. J. Suh;H. S. Kang;T. S. Shin;D. S. Byun;Kim, H. R.
한국어업기술학회:학술대회논문집
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한국어업기술학회 2001년도 춘계 수산관련학회 공동학술대회발표요지집
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pp.220-221
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2001
Phytic acid (myo-inositol 1,2,3,4,5,6-hexakisdihydrogen phosphate) is one of the major storage form of phosphorous in the seeds of plants, which are the principal components of feed stuffs. Monogastric animals like Pigs and poultry as well as fish lack phytase activities in their digestive system and most undigested phytic acid was excreted in their manure. (omitted)
This study aimed to evaluate effects of 800 W microwave irradiation for 2, 4 and 6 min on chemical composition, antinutritional factors, ruminal dry matter (DM) and crude protein (CP) degradability, and in vitro CP digestibility of canola seed (CS). Nylon bags of untreated or irradiated CS were suspended in the rumen of three bulls from 0 to 48 h. Protein subfractions of untreated and microwave irradiated CS before and after incubation in the rumen were monitored by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Microwave irradiation had no effect on chemical composition of CS (p>0.05). There was a linear decrease (p<0.001) in the phytic acid and glucosinolate contents of CS as irradiation time increased. Microwave irradiation for 2, 4 and 6 min decreased the phytic acid content of CS by 8.2, 27.6 and 48.6%, respectively. The total glucosinolate contents of CS microwave irradiated for 2, 4 and 6 min decreased by 41.5, 54.7 and 59.0% respectively, compared to untreated samples. The washout fractions of DM and CP and degradation rate of the b fraction of CP decreased linearly (p<0.001) as irradiation time increased. Microwave irradiation for 2, 4 and 6 min decreased effective degradability (ED) of CP at a ruminal outflow rate of 0.05 $h^{-1}$ by 4.7, 12.3 and 21.0%, respectively. Microwave irradiation increased linearly (p<0.001) in vitro CP digestibility of ruminally undegraded CS collected after 16 h incubation. Electrophoresis results showed that napin subunits of untreated CS disappeared completely within the zero incubation period, whereas cruciferin subunits were degraded in the middle of the incubation period (16 h incubation period). In 4 and 6 min microwave irradiated CS, napin subunits were degraded after 4 and 16 h incubation periods, respectively, and cruciferin subunits were not degraded untile 24 h of incubation. In conclusion, it seems that microwave irradiation not only protected CP of CS from ruminal degradation, but also increased in vitro digestibility of CP. Moreover, microwave irradiation was effective in reducing glucosinolate and phytic acid contents of CS.
Taghinejad, M.;Nikkhah, A.;Sadeghi, A.A.;Raisali, G.;Chamani, M.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제22권4호
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pp.534-541
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2009
The aim of this study was to evaluate the effects of gamma irradiation (${\gamma}$-irradiation) at doses of 15, 30 and 45 kGy on chemical composition, anti-nutritional factors, ruminal dry matter (DM) and crude protein (CP) degradibility, in vitro CP digestibility and to monitor the fate of true proteins of full-fat soybean (SB) in the rumen. Nylon bags of untreated or ${\gamma}$-irradiated SB were suspended in the rumens of three ruminally-fistulated bulls for up to 48 h and resulting data were fitted to a nonlinear degradation model to calculate degradation parameters of DM and CP. Proteins of untreated and treated SB bag residues were fractionated by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Digestibility of rumen undegraded CP was estimated using the three-step in vitro procedure. The chemical composition of raw and irradiated soybeans was similar. Results showed that phytic acid in ${\gamma}$-irradiated SB at dose of 30 kGy was eliminated completely. The trypsin inhibitor activity of 15, 30 and 45 kGy ${\gamma}$-irradiated SB was decreased (p<0.01) by 18.4, 55.5 and 63.5%, respectively. From in sacco results, ${\gamma}$-irradiation decreased (p<0.05) the washout fractions of DM and CP at doses of 30 and 45 kGy, but increased (p<0.05) the potentially degradable fractions. Gamma irradiation at doses of 15, 30 and 45 kGy decreased (p<0.05) effective degradability of CP at a rumen outflow rate of 0.05 $h^{-1}$ by 4.4, 14.4 and 26.5%, respectively. On the contrary, digestibility of ruminally undegraded CP of irradiated SB at doses of 30 and 45 kGy was improved (p<0.05) by 12 and 28%, respectively. Electrophoretic analysis of untreated soybean proteins incubated in the rumen revealed that ${\beta}$-conglycinin subunits had disappeared at 2 h of incubation time, whereas the subunits of glycinin were more resistant to degradation until 16 h of incubation. From the SDS-PAGE patterns, acidic subunits of 15, 30 and 45 kGy ${\gamma}$-irradiated SB disappeared after 8, 8 and 16 h of incubation, respectively, while the basic subunits of glycinin were not degraded completely until 24, 48 and 48 h of incubation, respectively. It was concluded that ${\gamma}$-irradiated soybean proteins at doses higher than 15 kGy could be effectively protected from ruminal degradation.
The rumen microbial ecosystem is coming to be recognized as a rich alternative source of genes for industrially useful enzymes. Recent advances in biotechnology are enabling development of novel strategies for effective delivery and enhancement of these gene products. One particularly promising avenue for industrial application of rumen enzymes is as feed supplements for nonruminant and ruminant animal diets. Increasing competition in the livestock industry has forced producers to cut costs by adopting new technologies aimed at increasing production efficiency. Cellulases, xylanases, ${\beta}$-glucanases, pectinases, and phytases have been shown to increase the efficiency of feedstuff utilization (e.g., degradation of cellulose, xylan and ${\beta}$-glucan) and to decrease pollutants (e.g., phytic acid). These enzymes enhance the availability of feed components to the animal and eliminate some of their naturally occurring antinutritional effects. In the past, the cost and inconvenience of enzyme production and delivery has hampered widespread application of this promising technology. Over the last decade, however, advances in recombinant DNA technology have significantly improved microbial production systems. Novel strategies for delivery and enhancement of genes and gene products from the rumen include expression of seed proteins, oleosin proteins in canola and transgenic animals secreting digestive enzymes from the pancreas. Thus, the biotechnological framework is in place to achieve substantial improvements in animal production through enzyme supplementation. On the other hand, the rumen ecosystem provides ongoing enrichment and natural selection of microbes adapted to specific conditions, and represents a virtually untapped resource of novel products such as enzymes, detoxificants and antibiotics.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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