This study was aimed to formulate various phospholipid nanoparticles composed of different surfactants and to evaluate the deformability of the phospholipid vesicles as candidates of useful ultradeformable nanoparticles. In vitro deformability of the phospholipid nanoparticles was studied using an extruder under a certain pressure. The sizes of phospholipid nanoparticles, passed volumes, and concentrations of the phospholipids in suspensions before and after extrusion were measured. The deformability indexes were estimated by using passed volumes, sizes of phospholipid nanoparticles and concentrations of phospholipids. Conventional liposomes, placed under a certain pressure of an extruder, showed no passed volume indicating little deformability. Similar to conventional liposomes, phospholipid nanoparticles containing surfactants such as sodium taurocholate, Myrj 45, or Myrj 53 showed little deformability. In contrast, phospholipid nanoparticles composed of Tween 20, Triton X-100, or sodium deoxycholate showed higher deformability indexes than others. Taken together, the deformability of phospholpid nanoparticles could be significantly affected by the type of surfactants. Moreover, these results suggest that the deformability of phospholipid nanoparticles could be modulated by surfactants.
The selection of ethanol-tolerant strains was applied to enrichment culture of YPD broth medium containing various concentrations of ethanol. Isolates were identified to be Saccharomyces cerevisiae, the others as S. dairensis, S. exiguus, S. telluris, Saccharomycodes ludwigii, Schwanniomyces occidentalis var. occidentalis and Zygosaccharomyces florentinus. Among isolates S. cerevisiae YO-1 was screened as having the highest ethanol tolerance and produced 18% (v/v) ethanol after 4 days fermentation. The change of fatty-acyl residues represents that a progressive decrease in fatty-acyl unsaturation and a proportional increase in saturation in phospholipids of yeast cells during fermentation affected the yeast viability. Supplementation ethanol to the cultures led to an increase of unsaturated fatty-acyl residues, especially $C_{16}$ or $C_{18}$ residues, along with a decrease in the proportion of saturated residues in cellular phospholipids. Increasing the amount of soy flour led to an increase in the maximum number of viable yeast cells and ethanol production. It was possible in 4 days to reach 21% (v/v) ethanol by adding 4% soy flour as source of unsaturated fatty-acyl residues to the fermentation medium. Soy flour not only increased yeast population but also enhanced the physiological properties of yeast cells to be ethanol tolerant in the anaerobic culture.
The effect of a-tocopherol on the formation and accumulation of phospholipid hydroperoxides, especially of phosphatidylcholine hydroperoxides, in the tissues of 2, 2 -azobis Hydrochloride (AAPH) - dosed rats was investigated. In a-tocopherol supplemented rats, the activities of glutathione peroxidase, catalase and superoxide dismutase were significantly inhibited, compared with the AAPH group. AAPH treatment led to oxidation of phospholipids in the liver, lungs, brain, plasma and red blood cells (RBC), resulting in a notable increase in phosphatidylcholine hydroperoxide (PCOOH). All tissues of the rats given an $\alpha$-tocopherol supplement showed an attenuation of the stimulating effect of AAPH, leading to low levels of formation of PCOOH. Also, the rats injected with AAPH and a-tocopherol showed relatively normal-appearing hepatocytes, except for a little loss of the granules. With regards to the morphological appearance of the liver, it was observed that oral intakes of a -tocopherol resulted in an antioxidant defense against attacks of peroxyl radicals. Thus, we suggest that a-tocopherol is potentially helpful in protecting membrane phospholipids against oxidative damage in vivo.
Phospholipids are crucially important in a cell membrane function and could thereby influence antibiotic susceptibility. In order to investigate the antifungal mechanism the total lipid was extracted from C. albicans treated with citronellol or thymol in concentration of their minimum inhibiting concentration and the changes in phospholipids composition were analyzed using ketoconazole as control. The cell growth and total lipid synthesis in cell walls of C. albicans were inhibited by treatment with citronellol. The levels of total lipids were decreased by 35.85% compared to the control. They also showed a significant decrease in the contents of phospholipid, phosphatidylcholine(PC), phosphatidyl ethanolamine(PE) and phosphatidylinositol(PI). As the result of GC assay for total fatty acid methyl esters of PC, PE and PI in C. albicans treated with citronellol, it was found that the major fatty acid composed of three phospholipid were palmitic acid, stearic acid and oleic acid. Moreover, the pattern of the fatty acid compositions of PC, PE and PI were changed by the oil. Based on the results, the anti-Candida mechanism of citronellol or thymol might be closely associated with disrupting the permeability barriers of the fungal cell wall composition or construction.
The effects of column length and particle size on the efficiency of separation and characterization of phospholipids (PLs) are investigated using nanoflow liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (nLC-ESI-MS-MS). Since PLs are associated with cell proliferation, apoptosis, and signal transduction, it is of increasing interests in lipidomics to establish reliable analytical methods for the qualitative and quantitative profiling of PLs related to biomarker development in adult diseases. Due to the complexity of PLs, the preliminary separation of PLs is necessary prior to MS analysis. In this study, length of capillary column and the particle size of reversed phase ($C_{18}$) packing materials are varied to find a reliable condition for the high speed and high resolution separation using 8 PL standard mixtures. From experiments, it was found that a capillary column of nLC-ESI-MS-MS analysis for PL mixtures can be minimized to a 5 cm long pulled tip column packed with 3 ${\mu}m$$C_{18}$ particles without losing resolution.
Path of a small hydrophobic molecule through the aqueous cytoplasma is not linear. Partition may favor membrane binding by several orders of magnitude : thus significant membrane association will markedly decrease the cytosolic transport rate. The presence of high concentration of soluble binding proteins for these hydrophobic molecules would compete with membrane association and thereby increase transport rate. For long chain fatty acid molecules, a family of cytosolic binding proteins collectively known as the fatty acid binding proteins(FABP), are thought to act as intracellular transport proteins. This paper examines the mechanism of transfer of fluorescent antyroyloxy-labeled fatty acids(AOFA) from purified FABPs to phosholipid membranes. With the exception of the liver FABP, AOFA is transferred from FABP by collisional interaction of the protein with a acceptor membrane. The rate of transfer increased markedly when membranes contain anionic phospholipids. This suggests that positively charged residues on the surface of the FABP may interact with the membranes. Neutralization of the surface lysine residues of adipocyte FABP decreased fatty acid transfer rate, and transfer was found to proceed via aqueous diffusion rather than collisional interaction. Site specific mutagenesis has further shown that the helix-turn-helix domain of the FABP is critical for interaction with anionic acceptor membranes. Thus cytosolic FABP may function in intracellular transport of fatty acid to decrease their membranes association as well as to target fatty acid to specific subcellular sites of utilization.
A series of antifungal compounds were obtained from the methanol extract of the mycelium from marine actinomycetes M428 which was identified as a Stereptomyces species by fatty acid composition and biochemical characteristics. These compounds were purified by combined chromatographic techniques and the structures were characterized with spectroscopic methods including 1D and 2D NMR, and mass spectrometry as sn-l lysophosphatidyl inositols. The side chains were established by chemical degradation followed by GC analysis to be 14-methyl pentadecanoic acid (iso-palmitic acid, i-C16:0, compound A) and 13-methyl tetradecanoic acid (iso-pentadecanoic acid, i-C15:0, compound B). These compounds displayed highly selective antifungal activity against C. albicans with MIC values of $5{\;}\mu\textrm{g}/ml$ (compound A) and $2.5{\;}\mu\textrm{g}/ml$ (compound B), while it had almost negligible antibiotic activity against E. coli and P aerogenosa with MIC value higher than $50{\;}\mu\textrm{g}/ml$ and no cytotoxic activities against human myeloma leukemia K562 ($IC_{50}>100{\;}\mu\textrm{g}/ml$).
This study was attempted to investigate the effect of Ganoderma lucidum (Young-Jii) extract on the activities of GPT GOT Al. P LDH and the level of total bilirubin and total cholesterol in serum of $CCl_4$-intoxicated rats, and on the level of total lipids triglyceride phospholipids and total cholesterol in the serum of experimentally induced hyperlipemic rats, and on the effect of body and liver weight in rats. The results were shown as follows; In $CCl_4$-intoxicated rats, the extract showed a significant decrease in the activities of GPT and Al.P, a slight decrease in the activity of GOT and LDH; The level of total bilirubin was slightly affected, but significantly decreased at a dose as high as 500 mg/kg; the level of total cholesterol was increased dose dependently. In hyperlipemic rats, the extract caused a significant decrease in the level of total lipids and triglyceride and the rate of decrease was more pronounced with repeated treatments for 10 days; the level of phospholipids and total cholesterol were slightly decreased with repeated treatment of the extract at a dose of 300 mg/kg for 10 days; A significant body weight gain was shown with the treatment of the extract.
Lipid oxidation and contents of tocopherols and phospholipids (PL) in soy-added fried products during storage in the dark were studied. Flour dough containing soy flour at 0, 10, 20, and 30% on a weight basis was fried in corn oil at $180^{\circ}C$ for 2.5 min. The fried products were stored at $60^{\circ}C$ for 11 days in the dark. Lipid oxidation of the fried products was evaluated by conjugated dienoic acid (CDA) and p-anisidine values (PAV). Tocopherols and PL were determined by high performance liquid chromatography (HPLC). CDA contents and PAV of the fried products were increased during storage, and addition of soy flour improved lipid oxidative stability of the fried products, which was partly related to increased amount of tocopherols and PL in the soy-added fried products. Tocopherols and PL were degraded during the dark storage of the fried products. Soy flour addition to the dough did not affect the rate of tocopherols degradation during storage of the fried products; however, PL degradation was higher in the soy-added fried products. Residual amounts of $\alpha$-tocopherol and phosphatidylinositol showed high correlations with the lipid oxidation of the fried products during storage in the dark.
In this study, we developed a liquid crystal (LC)-based optical sensor for monitoring enzymatic activity through orientational changes in liquid crystals (LCs) coupled to the properties of a poly-${\small{L}}$-lysine (PLL)-based polymeric membrane. We prepared a PLL-based polymeric membrane at the planar interface between the thermotropic liquid crystal and aqueous phases. The PLL-based polymeric membrane was obtained by contacting the PLL solution with water immiscible LCs, 4-cyano-4'-pentyl-biphenyl (5CB) doped with adipoyl chloride. We then investigated the membrane properties by examining the permeability of the membrane to phospholipids, 1,2-didodecanoyl-rac-glycero-3-phosphocholine (DLPC). The permeability of the membrane to transport phospholipids was monitored through the orientational transition of 5CB in contact with the dispersions of DLPC. Since trypsin can enzymatically catalyze the hydrolysis of PLL, we incubated an aqueous trypsin solution with the membrane for 2 h at room temperature to cause an increase in the permeability of the polymeric membrane to DLPC. As a result, a bright to dark optical shift of LCs was observed, which implied that an enzymatic reaction between trypsin and PLL-based membrane occurred. Two control experiments using chymotrypsin and bovine serum albumin (BSA) revealed no sign of improved permeability based on the orientational transition of LCs.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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