• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권3호
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• pp.166-173
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• 1992

The expression of Bacillus subtilis $\alpha$-amylase from the phoA-amyE fusion gene in recombinant E. coli was investigated under various environmental conditions. The overexpression of cloned $\alpha$-amylase caused retardations in cell growth and synthesis of alkaline phosphatase (AP) from the chromosomal phoA gene. The change of culture temperature from $37^\circ{C}$ to $30^\circ{C}$ increased the specific activities of both $\alpha$-amylase and $\beta$-lactamase by six and two times, respectively, whereas the AP activity remained unchanged. The experiments with chlorampenicol (a translation inhibitor) suggested the enhancement of $\alpha$-amylase activity at $30^\circ{C}$, and this was partly due to the stability of $\alpha$-amylase itself. The further decrease of the temperature to $25^\circ{C}$ slowed down both the cell growth and cloned-gene expression rate. The $\alpha$-amylase activity showed a maximum at pH of 7.4 while alkaline phosphatase was most effectively produced at pH of 8.3.

• 한국초지조사료학회지
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• 제17권3호
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• pp.285-292
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• 1997

This study was conducted to obtain the transgenic Brnssica napus plants with tobacco Apase gene using the binary vector system of Agrobacteriurn fumefociens. The results obtained were summarized as follows: A repressible acid phosphatase gene of Saccharon~yces cerevisiae, pho105 was used for screening of tobacco Apase cDNA. In order to identify Apase gene in tobacco genome, Southern blot analysis was pcrformed and the Apase gcnc may be present as a single copy, or at most two or three copies, in tobacco genome. To isolate the tobacco Apase gene, tobacco cDNA library was constructed using purifed mRNA from -Pi treated tobacco root and the plaque forming unit of the library was 2.8 x $10^5$ pfu/m${\ell}$, therefore the library might cover all expressed mRNAs. Using pho5 as a probe. tobacco Apase cDNA was cloned, and restriction mapping and Southern blot analysis of cDNA insert were revealed that the 3.6 kb cDNA contained tobacco acid phosphatase cDNA. Plasmid pGA695 -tcAPl was constructed by subcloning tobacco Apase cDNA into the Hind site of pGA695 with 35s promoter which can be expressed constitutively in plants. The Brassica napus cotyledonary petioles were cocultivated with the ,4 grobacteriunz and transferred to the selection medium. The transformed and regenerated plants were transplanted to soil medium. Southern blot analysis was done on the transformed plants, and it was confirmed that a foregin gene was stably integrated into the genonies of B. nnpus plants.

• BMB Reports
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• 제42권11호
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• pp.731-736
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• 2009

The generation of functional recombinant antibodies from hybridomas is necessary for antibody engineering. However, this is not easily accomplished due to high levels of aberrant heavy and light chain mRNAs, which require a highly selective technology that has proven complicated and difficult to operate. Herein, we attempt to use an alkaline phosphate (AP)-fused form of single-chain variable fragment (scFv) for the simple identification of a hybridoma-derived, functional recombinant antibody. As a representative example, we cloned the scFv gene from a hybridoma-producing mouse IgG against branched-chain keto acid dehydrogenase complex-E2 (BCKD-E2) into an expression vector containing an in-frame phoA gene. Functional recombinant antibodies were easily identified by conventional enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) by employing scFv-AP fusion protein, which also readily serves as a valuable immuno-detective reagent.

• 자연과학논문집
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• 제11권1호
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• pp.65-73
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• 1999

C-P 화합물(Pn; phosphonate)의 일종인 glyphosate(GPS)를 인산원으로 이용하는 Pseudomonas sp. strain #A1으로부터 GPS 분해 유전자 및 2-aminoethylphosphonate(AEPn), methyl-phosphonate(MPn)와 같은 Pn의 분해 유전자를 클로닝하였다. Mini-Mu plasmid를 이용한 in vivo molecular cloning 결과 약 10-19 Kb의 $AEPn^+$ clones, 10 Kb의 $MPn^+$ clones, 12-18 Kb의 $GPS^+$ clone들을 얻었으며 E. coli의 $\Delta phn$ mutants에 transformation 하였을 때 각각의 Pn에 대한 다양한 phenotype을 나타냈다. 따라서 Pseudomonas sp. strain #A1에서는 적어도 3종류의 Pn 분해대사 경로를 갖고 있는 것으로 예측된다. 뿐만 아니라, 각각의 phn clone($AEPn^+$, $MPn^+$, $GPS^+$)들은 PHO regulon의 조절유전자 phoBR에 의존하여 발현하였다.

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1999년도 한국생물과학협회 학술발표대회
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• pp.265.1-265
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• 1999

No Abstract, See Full Text

• 한국초지조사료학회지
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• 제13권3호
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• pp.177-183
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• 1993

Agronacterium tumefaciens(strain LBA4404)를 매개로 한 외래 유전자의 식물체로의 도입에 관한 실험을 하여 아래와 가은 결과를 얻었다. 모델 식물로는 담배(Nivotuana tabacum c.v. samsun)를 사용하였으며, 외래 유전자는 효모 유래의 Acid phosphatase 유전자인 PH05를 사용하였다. pVC727G에서 PH05를 잘라내어 전기영동 및 graphical estimation법으로 확인한 결과, PH05의 크기는 1.5kb였다. pVC727G와 광역plasmid인 qBI121을 이용하여 식물체 형질전환을 위한 vector인 pBKJ I을 만들었다. pBKJ I을 Agronacterium LBA4404에 subcloninggksgn 담배의 leaf dise를 Agronacterium LBA4404과 공배양하여 형질전환을 유도하였다. kanamycindmf 첨가한 MS-n/B음지에서 형질전환된 shoots를 얻었으며, 이들의 재분화를 실시하여 형질전환된 식물체를 얻었다. 형질전환된 식물체의 genomic DNA를 PH05로서 southern hybridization하여 형질전환을 확인하였으며, 식물체의 잎, 줄기 및 뿌리의 Apase(PH05)활성을 측정하여 도입한 PH05가 발현됨을 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권6호
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• pp.568-574
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• 1991

효모에서 대랑의 물질생산계를 구축하기 위하여 먼저 여러 종류의 베터의 이용이 가능한 다양한 영양요구성 marker를 지니며 형질전환율이 향상된 효모숙주를 선별 개량하였다. 벡터의 제작에 사용되는 프로모터로는, 효모의 여러 유전자 중에서 그 활성이 매우 높은 해당계의 효소 GAP-DH의 구조 유전자 GAP를 이용하기로 하여, 효모염색체 DNA중에서 GAP 프로모터를 분리하여 이용하기 쉽게 변형하였다. 분리된 GAT promoter의 기능을 검토하기 위하여, reporter로 APase의 구조유전자 PHO5'를 이용하여 세포내의 copy수가 상이한 발현 벡터를 제작하여 GAP 프로모터에 의한 APase의 활성 및 전사산물을 측정한 결과, 정상적인 전사가 이루어 졌으며, 효소활성도 높게 나타났으며, 벡터의 copy수에 의한 효소활성의 차이도 감지되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권1호
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• pp.37-44
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• 1991

진핵세포 유전자의 기초대사발현의 조절계를 밝히기 위한 일환으로, 효모의 histidine생합성계 효소의 구조유전자 HIS5를 이용하였다. HIS5 유전자는 충분한 아미노산 조건하에서는 발현이 억제되어 비교적 높은 기초발현만을 하나, 어떤 아미노산이 결핍되면 탈억제되어 높은 발현량을 보이며 탈억제는 cis의 작용인자인 promoter상의 5'-TGACTC-3' 및 trans 작용인자 GCN4와 GCD17 GCN2등이 관여한다. trans 작용인자들에 의한 HIS5 유전자의 발현량의 변화를 간단하게 측정하기 위하여, HIS5 promoter와 repressible acid phoshates(APase)의 구조유전자중 promoter를 제거한 DNA단편을 연결시켜 HIS5-PHO5 융합유전자를 이용하였다. gcn2 및 gcn4 변이주의 APase 활성은 야생주와 비교하여 3내지 4배 낮았으며, gcn2변이주와 gcn2 gcn4 이중변이주의 APase 활성은 유사하였다.

• Journal of Microbiology
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• 제33권4호
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• pp.328-333
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• 1995

$\^$31/ P-NMR experiment was performed to detect phophonates (Pn) utilization and degradation in the several different C-P lyase mutants of E. coli and in E. aerogenes and the recombinants. The relative peak intensity (RPI) for the standard samples of 0.5 mM methylphosphonate (MPn) and 1.0 mM aminoethylphosphonate in glucose-MOPS medium showed 0.5 : 1.0 ratio. In the case of BW14329 (.DELTA.phnC-P, .delta.phoA), RPI did not change significantly after 24 hrs culturing, which means it nearly could not utilize Pn. In vivo $\^$31/ P-NMR spectrum of E. aerogens (BWKL 16627) during 3 hrs starvation showed two intense peaks at 0-2 ppm and at near-10 ppm which indicate intracellular orthophosphate (Pi) and pyrophosphate (PPi), respectively. Both of them might be released by degradation of inorganic polyphosphate pool. When MPn is supplied to the medium as an unique P source, Pi content in the cell has the constant, but PPi seems to be slightly decreased. Recombinants (BWKL 16954) grew slower than E. aerogenes in the glucose-MOPS media with various P sources. In vivo $\^$31/ P-NMR spectrum of recombinant did not show any intense signal in the cell. Surprisingly, under the cultivation adding with MPn, a few intense peaks in the region of Pi AND phospate monoester were detected.

• 미생물학회지
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• 제40권2호
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• pp.172-177
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• 2004

광합성 박테리아 Rhodospirillum rubrum은 광원의 조건에 따라 균주 내의 신진대사 양상이 변화된다고 보고 되어 왔다. 이러한 광조건에 의한 신진대사 변환 과정을 담당하는 유전자에 대한 연구는 광합성 박테리아에 관한 주된 과제 중 하나이다. 근래 이러한 광조건에 의한 균주내 변화 과정이 균주가 지니는 extrachromosomal plasmid와 관련이 있음이 보고되었다. 본 연구는 광합성 박테리아 R. rubrum의 extrachromosomal plamid pKYl 을 분리 정제하고 이를 제한효소 HindIII로 단편화 하여 이들 단편의 일부에 대한 염기서열을 분석하고 이들의 기능을 추론하였다. 본 연구를 통하여 plasmid pKY1에 박테리아의 유전적 재조합 (genetic recombination)에 관여하는 단백질에 대한 정보가 위치하고 있음을 유전자 및 아미노산 상동성 조사를 통하여 알 수 있었다.