The object of this study was to investigate the characteristics of pectinesterase(PE), polygalacturonase(PG) and Peroxidase(POD) in Kimchi materials. The results were as follows : 1. The specific activities of PEs in Korean cabbage, Korean raddish, garlic and ginger were 200 unit/mg protein, 23.1 unit/mg protein, 0.8 unit/mg protein and 32 unit/mg protein, respectively. The optimum pHs of PEs in all materials were between 7 to 8. The concentrations of NaCl, $CaCl_2$ which showed the highest activities of PEs were $0.2{\sim}0.3M$ NaCl, 50 mM $CaCl_2$ in Korean cabbage and raddish, 0.05 M NaCl, 20 mM $CaCl_2$ in garlic and 0.2 M NaCl, 20 mM $CaCl_2$ in ginger. 2. The specific activities and the optimum pHs of PGs were 1.5 unit/mg protein and pH 4.5 in Korean cabbage, 1.6 unit/mg protein and $pH\;4.5{\sim}5.5M$ in Korean raddish, 0.06 unit/mg protein and $pH\;3.0{\sim}3.5M$ in garlic, and 0.06 unit/mg protein and $CaCl_2$ in ginger. The concentrations of NaCl, $CaCl_2$ which showed the highest activities of PGs were $0.1{\sim}0.2M$ NaCl and $0.15{\sim}0.2mM$ mM $CaCl_2$ in all materials. 3. The specific activities and the optimum pHs of PODs in Korean cabbage, Korean raddish, garlic and ginger were 71.3 unit/mg protein ; pH 6.0. 769 unit/mg protein ; pH 5.5, 1.09 unit/mg protein ; pH 4.5 and 12.7 unit/mg protein ; $pH\;5.0{\sim}5.5M$, respectively. POD activities were not decreased in Korean cabbage, but decreased in Korean raddish by the increase of NaCl, $CaCl_2$ concentrations. In garlic and ginger, POD activities were a little slightly affected by the increase of NaCl, $CaCl_2$ concentrations.
초고압$(300{\sim}686\;MPa)$ 및 열$(55^{\circ}C)$ 처리 한 단무지의 저장 안정성을 검토하기 위하여 생존균수, 효소활성, 조직감의 저장중 변화를 측정하였다. 총균수에서는 500 MPa 압력에서 5분간 처리한 시료와 686 MPa 압력에서 5분간 처리한 시료가 $4{\sim}6\;log\;cycle$ 감소를 보였으며, $55^{\circ}C$에서 2시간 동안 열처리한 시료는 $3{\sim}5\;log\;cycle$ 감소를 보였다. 그러나 300 MPa 압력에서 5분간 처리한 시료는 2 log cycle 이하의 감소를 보여 살균 조건으로는 불충분함을 알 수 있었다. 초고압 및 열처리한 단무지의 pectinesterase (PE) polygalacturonase (PG)의 처리직후 활성은 무처리군(control)에 비해 현저히 증가하였으며 PE 활성은 초고압처리에 의해 더 증가한 반면 PG는 열처리에 의해 더 증가하였다. 저장기간에 따라 처리구 모두 무처리구에 비해 높은 PE, PG 활성을 유지 하다가 20일째에는 실활하였으나 초고압처리구는 저장 8일째 까지 무처리군의 초기 PE 활성 이상을 유지하는 바람직한 현상을 보였다. 효소활성과 관련된 puncture force 측정에 의한 시료의 경도는 초고압과 열처리후 모두 증가했으며, 저장기간 동안 control에 비해 높은 경도를 유지하였다.
무화과에 대한 PE와 그와 관련한 펙틴질의 변화를 조사하고, 저당성 무화과 잼을 제조하여 비교하였다. 무화과의 PE는 과일의 수확 시기에 활성을 나타내기 시작하고 저장기간 동안 실활되지 않았으며, 냉동저장 중에도 PE의 미약한 활성을 나타냈다. 그러므로 무화과 PE의 작용에 의하여 냉동 저장 중에도 과일 내의 AIS의 양과 펙틴질의 DE를 감소시켰다. 그리고 low methoxyl pectin으로 저당성 무화과 잼을 만들기 위하여 무화과 PE 및 무화과 PE에 오렌지 PE를 첨가한 것이 AIS및 AIS의 DE를 감소시켰다. 그리고 무화과 잼의 anthocyanin 색깔을 안정하게 유지하기 위해서는 pH 5.23의 천연 무화과 펄프에 유기산을 첨가하여 pH 4.0 이하로 조절한 것이 적색 및 채도가 높게 나타났다. 19가지의 다른 방법으로 무화과의 저당성 잼을 제조한 결과, 제조한 모든 무화과 잼은 시중 무화과 잼의 $65^{\circ}Brix$보다 낮은 $31{\sim}49^{\circ}Brix$의 가용성 고형분량을 갖는 저당성 잼이였다. 그러나 그들 중에 5종류만이 관능검사에서 양호한 평가를 받았다. 그것들은 무화과 펄프에 펙틴을 1% 첨가하거나 혹은 첨가하지 않고 PE (200 units/400 g pulp)를 첨가하여 펙틴질을 low methoxyl pectin으로 한 다음 잼의 색깔을 좋게 하기 위하여 무화과 펄프에 대하여 구연산 0.25%를 첨가하여 pH를 낮추고, 가교제로 Ca 0.7%, 젤리화와 적당한 감미를 주기 위한 설탕 20%를 가하여 microwave 혹은 hot plate에 의하여 가열하거나 또는 냉장(펙틴 무첨가는 제외)에 의하여 젤리화한 것이였다.
비열처리공법 중 하나로 새롭게 주목받고 있는 초고압 처리를 동치미에 적용하여 미생물의 살균정도, 효소 활성과 hardness의 변화를 관찰하였다. 제조한 동치미를 $30^{\circ}C$ 배양기에서 발효 적숙기라고 판단되는 pH 4.0까지 발효시킨 후, 이를 시료로 사용하여 $200{\sim}686\;MPa$ 범위의 압력에서 5분간 처리하였다. 무처리군의 균체수는 호기성 세균, 젖산균, 효모 및 곰팡이가 각각 $4.05{\times}10^8,\;3.25{\times}10^8,\;3.55{\times}10^4\;CFU/mL$ 존재하였으나, 호기성 세균은 600 MPa, 젖산균과 효모 및 곰팡이는 400 MPa 이상에서 완전히 살균되었다. 젖산균의 압력에 따른 내압성을 관찰해 본 결과 380 MPa에서 Leuconostoc mesenteroides가 유일하게 검출되어 가장 강한 내압성을 나타내었으며, 김치의 주 산패균으로 알려진 Lactobacillus plantarum은 300 MPa로 처리한 시료에서도 발견되지 않아 압력에 약한 균주로 판단되었다. 조직감에 관계하는 효소인 pectinesterase (PE)와 polygalacturonase (PG)는 압력에 의해 모두 활성이 증가하였다. 초고압 처리를 하지 않은 시료의 효소 활성을 100으로 했을 때, PE는 500 MPa에서 193으로 가장 활성이 높았으며, PG는 압력이 증가함에 따라 활성이 서서히 증가하여 686 MPa에서 191이었다. 동치미에 있는 무의 조직감은 초고압 처리했을 때 hardness가 증가하여 400 MPa에서 5분간 처리한 시료는 무처리군에 비해 약 0.065kg이 높았다.
배추로부터 얻은 펙틴에스테라제 조효소액을 DEAE-셀를로오스 이온교환 수지를 통과시켜 두개의 분획F-A와 F-B를 분리했으며. 그중 주종을 이루고 있는 F-A는 DEAE-셀룰로오스 이온교환수지. CM-셀를로오스 이온교환수지를 통과시켜서 약 340배 정제하였다. F-A와 F-B는 비슷한 염효과를 나타내었는데, 최적 염농도는 $Ca^{++}$$Mg^{++}$등 2가 양이온의 경우 $20{\sim}50mM$$K^{+}$, $Na^{+}$등 1가 양이온의 경우 250mM부근이었다. 최적pH는 F-A와 F-B에 대해서 각각 8.0 및 $7.5{\sim}8.0$이였으며. 이들 두 분획은 pH $5.0{\sim}8.0$에서 적어도 한 시간동안 안정했다. F-A에 대한 Km은 펙틴기질에 대해서 0.01%이었다. F-A와 F-B의 최적온도는 각각 $48^{\circ}C$와 $55^{\circ}C$이었으나 $55^{\circ}C$에서 급격히 역가가 감소되었다. 열불활성화 경향은 1차반응을 나타내었으며 $35^{\circ}C{\sim}55^{\circ}C$사이에서 F-B의 D-Value는 F-A보다 커서 F-B가 F-A보다 열에 더 안정한 것으로 나타났다. 한편 Z-value는 F-A 의 경우 $10.5^{\circ}C$, F-B의 경우 $8.3^{\circ}C$이었다.
칼슘을 첨가한 메틸셀룰로오스(CaMC)와 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스(CaHPMC-15)의 식용코팅을 미숙자두에 처리하여 자두의 연화 현상을 알아보았다. 비코팅 자두는 저장 기간 동안 중량 및 호흡률 감소 현상을 나타내었고, 적정산도는 감소하였으며, pH는 증가하였다. 그러나 CaMC와 CaHPMC-15를 코팅하였을 때 초기의 중량감소와 호흡률감소 효과를 나타내었다. 일반적으로 연화의 지표로 사용되는 수용성 펙틴 함량과 polygalacturonase(PG)의 활성은 저장 중 증가하였으며, pectin esterase(PE)의 존재 또한 확인되나 CaMC와 CaHPMC-15식용코팅에 의하여 연화현상을 억제하였다. 저장 기간 경과에 따라 기계적 경도가 감소되었으나 식용코팅에 의하여 자두의 경도 유지 효과가 있었으며, 관능검사 결과 저장 기간 중 자두 조직의 연화가 감지되었고 코팅자두의 경우 비코팅자두보다 더 단단한 것으로 평가되었다. 결과적으로 미숙자두에 CaMC와 CaHPMC-15를 코팅함으로서 수확 후 연화현상을 억제할 수 있었다.
본 연구에서는 감귤류 폐과피의 효율적 이용을 위해, 온주밀감 과피내에 양질의 펙틴과 pectinesterase(PE)가 함께 존재하고 있는 사실에 근거하여 간단한 공정에 의한 저메톡실펙틴의 조제를 시도하였다. 한편 조제된 펙틴들의 물리화학적 특성과 gelling power를 조사하여 상품 펙틴과 비교하여 보았다. (1) 온주밀감 albedo를 갈아서 침출시키고, 이를 $30^{\circ}C$에서 $Na_2Co_3$로 pH를 조절하여 albedo내의 PE를 작용케 하였다. 가열에 의해 PE를 불활성화시키고 원심분리한 후 상층액에 알코올을 가해 저메톡실펙틴을 침전시키고, 알코올로 세척하여 조제하였다. (2) albedo내의 펙틴 수율은 건물 중량으로 12.71%~12.98%였다. (3) 각 펙틴 시료들의 메톡실 함량은 효소 작용을 받지않고 추출된 것이 13.71%로 고메톡실펙틴인 것으로 밝혀졌고, pH 7.5에서 10분 처리시 5.12%, pH 8.5에서 10분, 20분, 30분 처리됨에 따라 4.27%, 3.08%, 1.85%인 저메톡실펙틴이 조제되었다. 아세틸함량은 0.09~0.12%로서 겔 형성에 방해를 주는 범위는 아니였고, anhydrouronic acid 함량은 94.2~96.8%로 순도가 높았다. 효소 작용을 받는 정도가 많아짐에 따라 점도와 분자량은 감소하였다. (4) 저메톡실 펙틴들은 효소 작용을 받은 정도가 많음에 따라 consistency가 낮아졌으며 $18^{\circ}C$에서 측정한 값이 $4^{\circ}C$에서 측정한 값보다 낮았다. (5) 겔들의 %sag은 상품 펙틴겔보다 높았다. (6) Instron에 의한 texture 측정 결과는 고메톡실펙틴 겔의 경우 견고도와 탄성이 가장 높은 것으로 나타났다. 겔의 부착성은 pH 8.5에서 10분 처리한 것이, 응집성은 pH 7.5에서 10분 처리한 것이 가장 높았다. 겔들의 점착성과 저작성은 상품 저메톡실펙틴이 높았다.
The various extracellular enzymes produced by lactic acid bacteria isolated from kimchi were assayed to improve the shelf-life of kimchi. Peroxidase was not detected in all tested lactic acid bacteria and small amount of ascorbic acid oxidase was detected in Pediococcus pentosaceus and Lactobacillus brevis. In case of $\alpha$-amylase, 27.8 and 20.9 unit/mg were shown in Pediococcus acidilactici and Pediococcus pentosaceus, respectively but $\beta$-amylase and protease activities were very low. The enzyme related to textural property of kimchi, pectinesterase showed low activity but polygalacturonase activity was 0.28 unit/mg in Lactobacillus homohiochii and 0.27 unit/mg in Lactobacillus plantarum.
The softening of the femented vegetables and the fruits was resulted from the degradation of pectin substances, cellulose, hemicellulose by polygalacturonase(PG), pectinesterase(PE), Cx-cellulase, $\beta$-galctosidase. The conversion of insoluble pectin to soluble pectin in cell wall-middle lamella was a major factor in the changes of firmness. Ca2+ was substantially increased firmness. However, Ca2+ could be removed from cell wall by chelating agents such as oxalic acid and citric acid. And Ca2+ was replaced with Na+ by ion exchange reaction. Ca2+ deficient tissue was vulnerable to attack by PG. Preheating treatment and Ca2+ addition is most effective in inhibiting the vegetable food softening and in increasing middle lamella-cell wall regidity, which PE activation by preheating treatment and Ca2+ addition could created more anionic carboxyl groups for cationic materials binding such as Ca2+ and chitosan and for polypectategel formation. Excessive demethylation by PE was associated with loosening of middle lamella cell wall components and softening.
This study was carried out to investigate the effects of Ca-gluconate (Ca-glu) on fruit firmness and softening enzyme activities of hydroponically grown tomato (Solanium esculentum Mill.). The obtained results revealed that the rate of weight loss was markedly increased from at storage to 5 days after storage (DAS) in control, and was constantly increased until 7 DAS as 4.1% in Ca-glu treatment. Fruit firmness was more rapidly decreased in Ca-glu induced fruit compared to control. Results showed that fruit firmness in control and Ca-glu treated fruit were 0.67 and $0.95kg{\cdot}{\varphi}12mm^{-1}$, respectively. In our investigation, no difference was revealed in Hunter's 'a' value between control and Ca-glu treated fruit. Total carotenoids content of control fruit were rapidly increased while the Ca-glu treated fruit were gently increased. Lycopene content was higher ($63.3{\mu}g{\cdot}g^{-1}\;FW$) in control than Ca-glu treatment ($56.8{\mu}g{\cdot}g^{-1}\;FW$). The activity of Polygalacturonase (PG) was rapidly increased with increasing storage period as from 0.4 to 1.2 units whereas the PG activity of Ca-glu treatment was gently increased from 1 to 7 DAS, and rapidly increased from 7 to 11 DAS. However, the pectinesterase (PE) activity was rapidly increased in control fruit, when the storage period was increased, but interestingly, the Ca-glu treated fruit was slowly increased from 1 to 7 DAS, and rapidly increased 7to 11 DAS. ${\beta}$-galactosidase activity of Ca-glu induced fruit was rapidly increased from 1 to 7 DAS as from 1.6 to 3.0 units, and gently increased from 7 to 11 DAS. ${\beta}$-galactosidase activity of control were higher than Ca-glu treatment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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