The effect of gamma irradiation on the prevention of breeding a patulin-producing mold and reducing patulin content was evaluated in an apple model system. Penicillium griseofulvum, a patulin-producing standard mold strain was artificially inoculated into apples and a gamma irradiation was performed. The $D_{10}$-values of the conidia of P. griseofulvum in an aqueous suspension and the apple model system were calculated at 0.28 and 0.48 kGy, respectively. The viable cell counts of the inoculated conidia in the apples showed 2 decimal point reductions at a dose of 1 kGy. Breeding and growth of the survived conidia was prevented during 10 weeks of post-irradiation storage period, especially at $4^{\circ}C$. The concentration of patulin in the non-irradiated apples was gradually increased and reached about 950 ppm at $25^{\circ}C$ and 410 ppm at $4^{\circ}C$, but the production of patulin was not observed during storage after 1 kGy of gamma irradiation.
Patulin은 곰팡이의 이차 대사산물로 주로 썩은 사과의 병반에서 발견된다. 사과주스 중에 포함된 patulin에 대한 실험법은 LLE법을 이용한 방법이 대부분이다. 이를 대체하기 위해 SPE 법을 통한 사과주스 중 patulin 분석법을 본 연구에서 시행하였다. 시료인 사과주스를 다공성 중합체인 고체상 카트리지에 주입한 후 1% sodium bicarbonate 용액 5 mL와 1% acetic acid 5 mL를 차례로 흘려 방해물질 등을 제거해준 다음 정제가 끝난 카트리지를 상온에서 1시간 정도 방치한 후 ethyl acetate/ethyl ether 5 mL를 이용해 추출하였다. 추출된 용액을 질소 농축기를 이용해 완전 농축한 후 1% acetic acid 용액 0.5 mL를 넣고 혼합 후 syringe filter로 여과하여 amber vial에 보관하여 분석에 사용하였다. HPLC 분석에 사용된 이동상은 THF 8 mL를 1 L 정용 플라스크에 넣고 물로 채워 사용하였다. HPLC 분석조건은 이동상을 0.7 mL/min 유속으로 흘려 276 nm에서 흡광도를 측정하였고, 샘플주입은 $20\;{\mu}g/L$로 하였다. LOD는 30 ng/mL 수준이었다. 실험 결과 SPE 법은 기존의 식품공전시험법(LLE)보다 분석시간이 1/3로 줄어들었고, 적은 양의 용매만으로 추출 및 정제가 가능하였으며 실험과정이 간단하여 공전의 방식보다 손쉽게 분석할 수 있었다. 특히, strata-X를 통한 SPE 추출방법은 재연성과 회수율 또한 우수해 저 농도 분석에도 적합하였다. 이와 같이 기존 분석법에 비해 신속하고 간소하며 정확한 정량분석 및 우수한 회수율과 신뢰도를 얻을 수 있어 다량의 분석을 요하는 연구기관 및 단체에 매우 효율적일 것으로 사료된다.
본 연구에서는 국내산 사과의 주스 가공과정에서 patulin 함량 최소 방법을 모니터링 하였다. 중심합성계획법으로 ascorbic acid 첨가량(100, 200, 300 및 400 ppm)과 활성탄 사용량(50, 100, 150 및 200 ppm)을 독립변수로 설정하고 각각의 조건에서 사과주스를 제조한 결과 patulin 잔류량은 ascorbic acid 함량 237.77 ppm, 활성탄 함량 106.58 ppm에서 최소점을 나타내었다가 점차 증가하는 경향을 나타내었다. 당도는 활성탄 사용량보다는 ascorbic acid 첨가량에 영향을 더 많이 받는 것으로 나타났으며, 총 페놀성 물질 함량의 정상점은 안장점으로 나타났다. 또한, 총 플라보노이드 함량의 예측된 정상점은 최대점으로 나타나 ascorbic acid와 활성탄 함량이 증가할수록 높은 함량을 나타내었다. 이상의 결과 사과주스 가공시 patulin 잔류량은 ascorbic acid 246~274 ppm (v/v), 활성탄 93~122 ppm (v/v)에서 최소화 되는 것으로 나타났으며 사과주스 가공 품질인자의 $R^2$는 모든 구간에서 1~10% 수준에서 유의성이 인정되었다.
GABA transminase (4-aminobutyrate aminotransferase), which catalyzes the breakdown of the major inhibitory neurotransmitter, GABA, in mammalian brain, was inactivated by preincubation with the mycotoxin patulin. The time course of the reaction was significantly affected by the substrate .alpha.-ketoglutarate, which aforded complete protection against the loss of catalytic activity. The recovery from the inhibition of patulin by the addition of dithiothreitol (DTT) supports that patulin reacts with the sulfhydryl residue in the catalytic domain of the enzyme. The reconstitution of the reduced enzyme and apoenzyme with pyridoxal-5-P(PLP) was inhibited by another mycotoxin, penicilic acid. This mycotoxin may interact with lysyl residue of the enzyme. Therefore, it is postulated that the critical sulfhydryl and lysyl residues in the catalytic domain of the enzyme react with mycotoxin patulin and penicillic acid, respectively.
A total of 65 isolates of Penicillium were isolated from decayed post-harvest fruits of apple pear citrus and grape. The Penicillium species isolated from the apple were idnetified as P. aurantiogriseum and P. expansum those from the pear were P. crustosum and P. expansum and those from the grape were P. aurantiogriseum and P. expansum, From decayed citrus fruits. P. digitatum and P. italicum were isolated. Citrinin and patulin from these species in the YES(yeast extract sucrose) broth were extracted with ethyl acetate and purified by thin-layer chromatography(TLC) and high performance liquid chromatography(HPLC) Among 51 isolates of Penicillium from apple pear and grape 7 isolates produced citrinin 13 isolates produces patulin and 12 isolates produced citrinin and patulin also. All 14 isolates of Penicillium from citrus produced only patulin.
본 연구과제의 목표는 국내에 유통되고 있는 과실쥬스 및 음료의 파튤린 오염 실태에 대한 현황파악을 통해 과실쥬스 및 음료에 대한 기준 규격 제 개정 등 추가적인 관리 필요성 여부를 재검토하는 것이다. 이를 위해 다양한 지역에서 유통되고 있는 570건의 과실쥬스, 과실음료 및 과일쥬스농축액에 대하여 파튤린 오염 여부를 조사하였다. 그 결과 현재 기준 규격이 정해져 있는 사과쥬스의 기준인 $50{\mu}g/kg$을 초과하는 제품은 없었다. 따라서 현재 시중에 유통되고 있는 과실쥬스 및 음료의 경우 일단 파튤린 오염으로부터는 안전한 것으로 평가되었다. 그러나 사과를 사용하여 제조된 제품 외에 오렌지를 사용한 제품에서도 사과제품에서와 유사한 수준으로 파튤린이 검출된 결과는 이미 기초연구를 통해 알려져 있는 바와 같이 사과 이외의 과일을 사용하여 제조되는 과실쥬스나 음료에서도 파튤린이 검출될 수 있음을 확인하여 주었다. 다른 한편 과실쥬스 및 음료 제조에 사용되고 있는 원재료에 해당하는 과실쥬스농축액에 대해서도 파튤린 오염 여부를 조사하였다. 검사에 사용한 농축액은 사과를 포함하여 배, 감귤, 오렌지, 포도, 딸기 등 6종의 과일을 사용하여 제조된 제품이었으나 파튤린은 배농축액에서만 검출되었다. 이와 같은 결과는 앞서 과실쥬스 및 음료에 대한 분석 결과와 함께 현재 사과쥬스 및 사과쥬스농축액에 대해서만 규정되어 있는 파튤린 검출허용기준을 다른 과일제품에 대해서도 확대할 필요성이 있음을 시사하는 것이라 사료된다. 또한 본 연구 결과를 분석해 보면 검체 570건 중 8건에서 파튤린이 검출되어 파튤린 검출율은 1.4%로 낮은 수준인 것으로 나타났다. 이는 1) 정부의 효과적인 규제 관리, 2) 업체의 향상된 품질 관리 능력, 3) 이전 연구들과는 달리 LC/MS/MS 분석을 병행 실시한 것 등이 복합적으로 작용한 결과인 것으로 사료된다.
An antitumor antibiotic named YS-1649 was isolated from the culture filtrate of a newly isolated fungus identified as Penicillium sp.. The fermentation yield reached about 40 mg per liter of the broth. YS-1649, a $\gamma$-Iactone - structured antibiotic, has the molecular fomular of $C_7H_6O_4$, Its structure was determined to be patulin by spectral analysis. It is active against some bacteria and showed cytotoxic effect on the proliferation of human breast cancer cell line, MCF-7, at concentrations of more than 0.048 $mu g/ml$. This compound also showed strong cytotoxic effect on the proliferation of human cancer cell lines, A549 and ACHN.
곤포 사일리지에서 분리한 Penicillium, Aspergillus, Fusarium속 균의 곰팡이독소 생산 여부를 조사한 결과, Penicillium paneum 균주의 배양여액에서 citrin과 patulin이 검출되었고, Aspergillus flavus 균주의 배양여액에서는 아프라톡신이 검출되었으나 A. fumigatus가 생산하는 것으로 알려진 글리오톡신은 검출되지 않았다. Fusarium proliferatum 균주는 Fusarium속 균이 일반적으로 많이 생산하는 fumonisin, zearalenone, deoxynivalenol 등 곰팡이 독소가 검출되지 않았다.
Penicillium expansum causes blue mold rot, a prevalent postharvest disease of pome fruit, and is also the main producer of the patulin. However, knowledge on the molecular mechanisms involved in this pathogen-host interaction remains largely unknown. In this work, a two-dimensional gel electrophoresis-based proteomic approach was applied to probe changes in P. expansum 3.3703 cultivated in apple juice medium, which was used to mimic the in planta condition. The results showed that the pH value and reducing sugar content in the apple juice medium decreased whereas the patulin content increased with the growing of P. expansum. A total of 28 protein spots that were up-regulated in P. expansum when grown in apple juice medium were identified. Functional categorization revealed that the identified proteins were mainly related to carbohydrate metabolism, secondary metabolism, protein biosynthesis or degradation, and redox homeostasis. Remarkably, several induced proteins, including glucose dehydrogenase, galactose oxidase, and FAD-binding monooxygenase, which might be responsible for the observed medium acidification and patulin production, were also detected. Overall, the experimental results provide a comprehensive interpretation of the physiological and proteomic responses of P. expansum to the host plant environment, and future functional characterization of the identified proteins will deepen our understanding of fungi-host interactions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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