산양유 $\beta-casein$의 효소에 의한 가수분해 특성과 가수분해물의 ACE 저해 효과를 측정하고자 산양유의 $\beta-casein$을 양이온 교환 컬럼인 Mono S HR 5/5를 이용하여 분리하였으며 분리된 $\beta-casein$을 동물성 분해효소인 trypsin으로 처리하여 가수분해 특성을 확인하였고 가수분해물의 ACE 저해활성을 측정하였다. Mono S HR 5/5 양이온 교환 컬럼을 이용한 산양유 산 케이신으로 부터 순수한 $\beta-casein$의 분리는 SDS-PAGE를 이용하여 확인한 결과 순수한 $\beta-casein$의 분리가 이루어졌음을 확인할 수 있었다. $\beta-casein$을 $37^{\circ}C4$에서 trypsin으로 처리하여 전기영동으로 확인한 결과 가수분해 직후부터 $\beta-casein$ 위치의 band가 희미해지기 시작하고 저분자량의 band가 나타나기 시작하였으나 120분이 지난 후에는 모든 band가 가수분해되어 사라졌고 산양유에서 분리된 $\beta-casein$을 trypsin으로 처리하여 120분 경과 후 그 가수분해물을 이용하여 ACE 저해효과를 측정한 결과 가수분해하지 않은 $\beta-casein$은 $1.80\pm1.21\%$의 ACE 저해활성을 보였으나 trypsin으로 가수분해하여 ACE 저해 활성을 측정하였을 때 $25.36\pm0.79\%$의 저해 활성을 나타내었으며, trypsin에 의한 $\beta-casein$가수분해물의 $IC_{50}$을 측정한 결과 $308.7\pm2.77({\mu}g/mL)$로 나타났다.
최근 급속도로 당뇨병 환자가 증가하면서 인슐린 시장이 크게 성장하고 있다. 또한 최근 식물체를 이용하여 의약용 단백질 생산이 경제적인 측면과 안정성 측면에서 매우 효과적임이 보고되고 있어 이를 이용한 분자농업이 주목을 받고 있다. 본 연구에서는 인슐린 단백질을 식물체에서 생산하기 위한 유전자 발현 construct를 설계하기 위한 실험으로서 식물발현용 preprominiinsulin construct를 제조하기 위한 단계적 실험을 수행하였다. 우선 proinsulin이 무세포 식물 전사/번역시스템에서 성공적으로 발현됨을 확인하였다. Prominiinsulin construct를 제조하여 대장균에서 발현시키는데 성공하였으며, 이를 트립신으로 절단한 후 인간 항인슐린 항체를 이용한 western 분석을 통하여 효과적으로 A-펩타이드와 B-펩타이드가 형성되며 이후 적절하게 접힘이 일어나고 hexamer로 조립됨을 확인하였다. 이후 식물체에서 재조합 인슐린 유전자가 발현되는지를 확인하기 위하여 RFP 결합 construct를 제조하여 담배의 현탁배양세포인 BY-2 세포에 형질전환시켜 RFP 결합 preprominiinsulin이 성공적으로 발현됨을 확인 하였다. 이러한 성공적인 연구 결과를 토대로 향후 이 construct는 RFP 단백질을 제거하여 35S 프로모터에 직접 유도되는 [N 말단 ${\rightarrow}$ tobacco E2 시그널 펩타이드 ${\rightarrow}$ B-펩타이드(1-29 AA) ${\rightarrow}$ AAK ${\rightarrow}$ A-펩타이드(1-21 AA) ${\rightarrow}$ RR ${\rightarrow}$ His6 ${\rightarrow}$ KDEL ${\rightarrow}$ C 말단] construct를 제조하여 담배 식물체에 형질전환시켜 분자농업을 통해 인간 인슐린 단백질을 생산하는데 활용하고자 한다.
Swine whipworm(Trichuris suis) is cosmopolitan nematode which can cause serious pathology in immature stage(larva2~larva5) of infected pigs, such as anorexia, diarrhea, anemia, and death in heavy infections. In this larval stages, it is very difficult to diagnose the infection of whipworm and to differentiate from other common swine gastrointestinal disorders such as 21 day scours which are associated with TGE virus, rota virus, coccidium, and the stress of weaning. In this experiment, the isolated antigens of Trichuris spp. were carried out to examine the structure and specificity of antigens and to select the reasonable antigens which would be used in serological diagnosis by electrophoresis, Western blotting, ELISA. The results of this experiment were as follows; 1. The common fractions of each Trichuris suis antigen were identified 28,32,45, 80kDa by SDS-PAGE with silver stain and four major fractions could be detected in positive swine sera by Western blot analysis. 2. The OD(optical density) values of somatic and excretory-secretory antigens which were reacted against positive(negative) sera from pigs infected with Trichuris suis by ELISA reader were; 1) OD values($mean{\pm}SD$) of adult somatic antigen against positive(negative) sera were $0.30{\pm}0.12(0.09{\pm}0.006)$ and third-stage larva of somatic antigen were $0.28{\pm}0.038(0.10{\pm}0.005)$. And OD values of excretory-secretory antigens of adult and third-stage larva were $0.24{\pm}0.031(0.11{\pm}0.005)$ and $0.08{\pm}0.013(0.10{\pm}0.003)$, respectively. 2) OD values of adult somatic, larval somatic antigen and adult excretory-secretory antigen response to positive sera were significantly (p<0.01) associated with negative swine sera. And the Cut-off OD values(minimum positive value) were determined to be mean negative value plus 3 SD that would minimized the risk of false positives. 3. The OD values of somatic antigens of T suis and T vulpis against swine positive(negative) sera were $0.30{\pm}0.120(0.09{\pm}0.006)$ and $0.25{\pm}0.141(0.09{\pm}0.003)$. These data mean that the somatic antigens of T suis and T vulpis were able to diagnose T vulpis infection in dogs as well as T suis infection in pigs. These results suggest that somatic antigen of third-stage larva and excretory-secretory antigen of adult T suis could be used the diagnostic antigen by serological test(ELISA) in immature Trichuris spp. infection.
시카고 광역도시지역 중에서 사회경제적 특징이 모식적으로 포함되는 지역을 선정하여, 어떠한 영향으로 그 특성들이 형성분포되는가를 파악하기 위하여 본 연구가 시작되었다 연구대상지역에 대한 지형공간정보체계(GSIS)의 접근으로서 14개의 변수와 44개의 관측값을 선정하여 3종류의 통계적 방법으로, 지역성에 대한 사회경제적 양상을 비교하였으며, 이를 3가지의 도식화 방법으로 GSIS에 의한 결과를 도출하였다. 군집분석 I (Grouping analysis)에서의 결과를 볼 때 위성도시에 해당되는 ELMHRST, ELMWOOD PARK, MELROSE PARK, NORTH LAKE에서 연수입치가 높게 나타나서 상기 분석치를 인정할 수 있었다. 인자분석(Factor analysis)에서는 사회-민족적, 경제적, 남미유입인(HISPANICS), 흑인, 인생 기대치, 차량수 등이 주요 관점이었는데, 사회민족적 인자가 가장 중요한 상관관계 계수를 나타내고 있어 대도시의 지역 특성에 의한 결과로 작용된 것을 알 수 있다. 지공간 입체도화방식에 의한 사회경제적 특색들이 3가지 도식으로 표현되었다. 그 결과에 의하면 경제적 수준이 높은 지역으로서 서부의 DuPage County의 위성도시들과 시카고 동부의 Lake Michigan 인접지역이 가장 높게 나타나 있어, 지역분화에 따른 사회경제적 표현이 상이하게 나타났다. 따라서 흑인과 남미유입인의 거주지역과 백인의 거주지역은 사회경제적 기준에 의해서 구분되고 있는 것으로 나타났다. 그 예로선 상한연 수입이 $30,311인데 비하여 하한 연수입이 $4,364에 불과하여 큰 격차를 나타낸다.
GroE that is a heat shock protein composed of GroEL and GroES is known as an immunodominant target of both the humoral and cellular immune responses in bovine brucellosis. This study was carried out to characterize groE gene encoding heat shock proteins of B. abortus isolated in Korea and to evaluate the immunogenicity of the GroE protein expressed in E. coli system. In PCR the specific signals with the size of 2,077 bp were detected in five strains isolated from the mammary lymphnodes of the dairy cattle that were serologically positive and the reference strains. In comparison of the sequences of nucleotides and amino acids among the strains, GroES showed 100% identity in both sequences. GroEL was evaluated 99.0~99.9% in nucleotides and 98.0~100% homology in amino acids. The groE gene including groES and groEL was inserted into pET29a vector and constructed pET29a-GroE recombinant plasmids. The inserted groE was confirmed by digestion with Nco1 and EcoR1 endonucleases and nucleotide sequencing. E. coli BL (DE3) was transformed with pET29a-GroE, named as E. coli BL (DE3)/pET29a-GroE. In SDS-PAGE, it was evident that the recombinant plasmid effectively expressed the polypeptides for GroES (10 kDa) and GroEL (60 kDa) in 0.5, 1 and 2 hours after IPTG induction. The immuno-reactivity of the expressed proteins were proved in mouse inoculation and Western blot analysis.
To investigate the functional and immunological properties of the Ca-release channel in the sarcoplasmic reticulum(SR) of the eel skeletal muscle, $[^3H]ryanodine$ binding, SDS gel electrophoresis, $^{45}Ca\;release$ studies, and immunoblot assay were carried out in the SR of the eel skeletal muscle. Maximal binding sites(Bmax) and $K_D$ values of $[^3H]ryanodine$ for Ca-release channel of the SR of the eel skeletal muscle were $19.44{\pm}1.40\;pmole/mg$ protein and $15.55{\pm}1.69\;nM$, respectively. $[^3H]Ryanodine$ binding to RyR was increased by calcium and AMP. The SR of the eel skeletal muscle has two high molecular weight bands on the SDS PAGE. The mobility of upper band was more slower than the single band of the rabbit skeletal muscle, and that of the lower band was similar with the single band of canine cardiac muscle. Vesicular $^{45}Ca-release$ was activated by calcium. Ca-induced $^{45}Ca-release$ was significantly inhibited by $MgCl_2(2\;mM)$, ruthenium red$(10\;{/mu}M)$ or tetracaine(1 mM), but not by high concentration of calcium itself. AMP-induced $^{45}Ca-release$ was slightly occurred only in the absence of calcium, it was not inhibited by $MgCl_2$ or ruthenium red. Caffeine also increased $^{45}Ca-release$ from the SR vesicles, but it was not affected by $MgCl_2$ or ruthenium red. Polyclonal Ab against rat skeletal muscle RyR is reacted with that of rabbit, but not reacted with that of the eel skeletal muscle. These results suggested that ryanodine receptor of the SR of the eel skeletal muscle is showing some similar properties with that of mammalian skeletal muscle, but might be an another isotype channel having two bands which is less sensitive to AMP, not cross-reacted with antisera against rat RyR, and not inhibited by high concentration of calcium.
견층을 자연 건조하므로써 변성을 받지 않은 시료에 대하여 Bacillus licheniformis 단백질 분해 효소 정련과 비누 정련의 특성을 비교하기 위하여 널리 사용되고 있으며 용해할 때 비교적 피브로인에 대한 degradation이 적은 두가지 용해볍으로 용해한 견 피브로인 수용액에 대하여 분자 구조상의 차이가 있는지를 구명하고져 실험한 결과는 다음과 같다. 1. 견 피브로인 수용액의 편광 현미경으로 관찰한 결과 구정은 관찰되지 않았으나 나뭇잎 모양의 피브릴 구조가 나타났고 전자 현미경으로 관찰한 결과 구정의 크기는 30~120mm 정도였으며 정련 방법과 견 피브로인을 용해하는 방법에 따른 차이는 없었다. 2. 견 피브로인 수용액의 점도 측정 결과 비누 정련견 피브로인 수용액보다 효소 정련 견 피브로인 수용액의 intrinsic viscosity가 낮았다. 3. 견 피브로인 수용액에 대한 전기 영동 시험 결과 약 20kd에서 small submit와 50kd 이상에서 large subunit에 해당하는 폭 넓은 band가 나타났으며 정련 방법에 따른 차이는 없었다. 4. 견 피브로인 수용액을 냉동 건조한 분말에 대한 열 분해 온도는 비누 정련 견사와 효소 정련 견사간에 차이가 없었고 용해 방법에 따른 열 분해 온도는 cupric hydroxide-ethylene diamine법으로 용해하였을 때 조금 낮았다. 5. 견 피브로인 수용액을 송풍 건조한 시료에 대한 IR spectrum은 silk II형과 silk I형이 복합되어 나타났으며 정련 방법은 다른 차이가 없었다.
BAK1(Brassinolide insensitive associated receptor kinase 1)는 브라시노스테로이드 생합성 대사관련 신호전달 매체이다. BR 생합성 및 신호전달 돌연변이체는 매우 특징적인 난쟁이 표현형을 보인다. 과채류전용 양액배지인 Sonneveld 양액을 이용하여 양분결핍에 의해 왜성을 나타내는 토마토를 선발하였다. 선발된 토마토에 대해 이차원 전기영동법으로 단백질체를 분석한 결과, 발현차를 나타내는 28개의 단백질 spot이 분리되었다. 분리된 단백질 spot중 현저하게 발현이 억제된 단백질 spot 6개를 선발하여 단백질 서열을 결정하였다. 실험 결과, pI 4.5, 분자량 24 kDa를 나타내는 단백질은 브라시노스테로이드 생합성에 관여하며 왜성 표현형을 나타내는 신호전달 단백질, BAK1으로 동정되었다. BCK1, cystein proteinase, sulfutase, peroxidase, zinc finger factor로 동정 된 나머지 단백질들은 브레시노스테로이드 생합성관련 신호전달기작에 관여하는 단백질로 추정되었다. BAK1을 검정하기 위해 단백질 서열이 결정된 부위로부터 프라이머를 디자인하여 RT-PCR를 수행한 결과, 증폭된 500 bp의 산물이 정상과 발현차를 보여주었는데 이 결과는 양분조절에 의해서도 BAK1의 발현이 조절될 수 있음을 시사한다.
Microwave,초음파 및 초고압 처리에 의한 PSA의 항원성 변화를 살펴본 결과는 다음과 같다. microwave처리에 의한 변화를 알아본 결과 처리시간이 증가함에 따라 PSA와 항체와의 결합력이 감소하였으며 특히 10분 처리 시에 약 30% 정도로 가장 낮은 결합력을 나타내었다. SDS-PAGE 결과에서는 5, 10분 처리 시에 PSA band가 많이 약화되었으며 immunoblotting에서도 5, 10분 처리한 PSA가 항체와 거의 반응하지 않았다. 하지만 열을 배제하고 microwave 처리한 경우에는 처리구 모두 큰 변화 없이 높은 결합력을 유지하였다. 초음파 처리(5, 10, 30 및 60분)에 의한 PSA의 항원성 변화를 살펴본 결과에서는 초음파 처리구 모두 약 78% 정도의 높은 결합력을 보였으나 immunoblotting에서는 초음파 처리한 PSA가 항체와 거의 반응하지 않았다. PSA에 초고압 처리(200, 300 및 400 MPa)한 후 항원성 변화를 살펴본 결과 초고압 처리구 모두 PSA와 항체와의 결합력이 약 98%로 높은 결합력을 유지하였으며 immunoblotting에서도 초고압 처리구의 PSA가 항체와 강하게 결합하였다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 열을 배제한 microwave, 초음파 및 초고압 처리는 PSA의 항원성을 감소시키지 못하였으나 열을 배제하지 않은 microwave 처리는 시간이 증가함에 따라 PSA의 항원성을 크게 감소시켰으므로 이를 저 알레르기 돼지고기 식품 개발에 응용할 수 있을 것으로 사료된다.
기업의 "회사소개" 페이지는 기업이 중요시하게 여기는 가치가 무엇인지를 소개하고 있다. 본 연구에서는 이에 관한 글이 회사의 현재 및 미래의 재무성과의 연관성을 조사한다. 텍스트 마이닝 기법을 활용하여 2016년의 S&P500 기업의 기관 정보를 분석하여 회사소개 페이지에서 의도적으로 반복되는 단어를 파악하고, 이를 통해 요인분석을 수행하였다. 그 결과 홈페이지의 키워드는 6가지 요인으로 분류될 수 있음을 알 수 있었고, 그후 최소 자승 회귀분석을 수행하여 키워드의 요인과 기업의 현재 재무 성과 사이의 연관성을 결정하였다. 분석 결과 요인 2("구매 경험"과 관련된 키워드)가 현재 재무 성과의 대체 변수인 ROE와 긍정적인 상관관계가 있음을 보여주며, 요인 1("고객에게 알림"과 관련된 키워드)은 ROE와 부정적인 관계를 가짐을 알 수 있었다. 다만, 요인 1은 기업의 미래 재무 성과를 측정하는 대안 변수인 Tobin's Q와 긍정적인 관계가 있었다. 이 결과는 기업의 웹사이트에 소개된 글과 기업의 재무 성과 사이에 관계가 있음을 나타낸다. 따라서 웹 사이트에 대한 기관의 소개글은 현재 회사 성과 및 미래 회사 가치에 대하여 유용한 지표가 될 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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