• 미생물학회지
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• 제31권4호
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• pp.292-299
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• 1993

국내에서 분리된 Agrobacterium tumefaciens KU12 는 많은 식물체에서 종양을 유발하여 octopine 을 유일한 탄소원과 질소원으로 이용할 수 있다. A. tumefaciens KU12 내에는 크기가 각각 45.5 kb, 240 kb 및 240 kb 이상인 3종류의 플라스미드가 존재하는 것으로 확인되었다. KU12내에 존재하는 octopine type Ti plasmid 를 확인하기 위하여 플라스미드를 가지고 있지 않은 A. tumefaciens A136 을 direct transformation 방법에 따라 KU12 에서 분리한 플라스미드 시료로 형질전환시킨후 질소원으로 octopine 만을 가지로 있는 AB 최소배지를 이용하여 Ti plasmid 에 의해 형질전환된 형질정환체를 선별하였다. 선별된 형질전환체를 A. tumefaciens KU911 이라고 명명하였으며 KU911 내에는 240 kb 크기의 플라스미드만이 존재하였다. 종양형성능 및 Southern hybridization 을 이용하여 octopine type Ti plasmid 인 pTiKU12 로 명명된 240 kb 크기의 플라스미드가 Ti plasmid 임을 확인되었다.

• 한국정보통신학회논문지
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• 제15권4호
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• pp.1000-1006
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• 2011

본 연구에서는 vir유전자의 발현에 있어서 페놀화합물, Ti 플라스미드들의 종류(cctopine, nopaline), A. tumefaciens 들의 영향에 대해서 조사하였다. 9종류의 페놀화합물들을 3종류의 A. tumefaciens들과 3종류의 Ti 플라스미드들을 대상으로 조사하였다. Nopaline Ti 플라스미드를 포함하는 A. tumefaciens MW107에 존재하는 vir유전자는 4-hydroxyacetophenone, phenol, catechol, resorcinol, acetosyringone과 vanillin등 6종류의 페놀화합물들에 의해서 상대적으로 높게 발현되었다. Octopine Ti 플라스미드들을 포함하는 A. tumefaciens MW105와 MW108의 vir유전자들은 acetosyringone에서만 발현되었다. 따라서 vir유전자의 발현을 유도시키는 요인들은 Ti 플라스미드 종류, A. tumefaciens와 페놀화합물들의 종류에 따라서 서로 다르다는 결과를 얻었다.

• Journal of Ginseng Research
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• 제10권1호
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• pp.45-54
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• 1986

인삼에 이용할 수 있는 vector system의 개발연구의 일환으로 우선 Agrobacterium spp.를 인삼의 잎, 줄기 및 뿌리에 접종하여 crown gall tumor의 형성 및 탈분화 그리고 Agrobacterium spp.의 opine화합물의 이용정도등을 조사하였던 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. Agrobacterium tumefaciens C58은 인삼의 모든 부위에서 crown gall tumor를 형성하였으나 secondary tumor나 teratoma는 형성하지 못했다. 2. Wild type Agrobacterium tumefaciens Y101, Y104, Y109는 crown gall tumor를 형성하였으며, tumor의 형태, 크기 그리고 생장 정도는 strain별로 차이가 있었다. 3. Agrobacterium tumefaciens Y194는 특히 amorphic tumor를 형성하였다. 4. 줄기에서 형성된 tumor조직에서 callus를 유기하고자 phytohormone free배지 및 2,4-D 첨가 배지에 접종한 결과 전혀 callus가 형성되지 않았다. 5. 뿌리에서 형성된 callus가 형성되긴 하였으나 출현빈도가 극히 낮았으며, 정상 조직과는 달리 2,4-D의 효과가 미미하였다. 6. Agrobacterium spp.에 의한 opone화합물의 이용능력을 조사한 결과, Agrobacterium tumefacciens Y104, Y110 과 C58은 nopaline type이었고 Y109는 octopine type이었으며, Y101은 nopaline과 octopine 어느것도 이용하지 못하였다.

• 미생물학회지
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• 제25권3호
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• pp.173-179
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• 1987

한국산 A, tumefaciens의 3균주에서 분리한 Ti plasmid의 type과 분자량을 조사한 결과로 이들 모두는 octopine type 이었으며 각 plasmid의 분자량은 pTi12가 44Kb이었고, pTi14는 180Kb이었으며, pTi14는 172Kb이었다. 이중 pTi12를 Smal 및 HindIII로 가수분해한 결과 8개의 Smal digest fragment와 10개의 Hind III digest fragment를 얻었으며 Southern hybridization techniques을 이용하여 잠정적인 physical map을 작성하였다.

• 미생물학회지
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• 제32권1호
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• pp.53-59
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• 1994

Agrobacterium tumefaciens KU12내에 존재하는 240kb 크기으 octopine형 Ti 플라스미드인 pTiKU12와 45kb 크기의 잠재 플라스미드인 pTi12를 제거하여 무독성의 A. tumefaciens 균주를 제조하였다. Octopine형 Ti 플라스미드인 pTiKU12는 고온(37${\circ}C$)에서의 배양과 ethidium bromide가 첨가되어 있는 배지에서의 배양을 각각 실시하여 제거하였으며, 잠재 플라스미드인 pTi12는 pTi12의 복제기원이 클로닝되어 잇는 재조합 플라스믿인 pYWXP와의 비화합성을 이용하여 제거하였다. pYWXP는 ethidium bromide가 첨가되어 있는 배지에서 고온(37${\circ}C$)으로 배양하여 제거하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권4호
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• pp.822-828
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• 2004

Nopaline-type Agrobacterium tumefaciens strain C58 cannot utilize octopine (Oct) as the sole carbon and nitrogen sources. This strain harbors two plasmids; a virulent plasmid, pTiC58, and a megaplasmid, pAtC58. From strain NT1, which is a derivative of C58 harboring only pAtC58, we isolated spontaneous mutants that utilize Oct as the sole nitrogen source. These Oct-catabolizing mutants, however, could not utilize the opine as the sole carbon source. In contrast, strain UIA5, a plasmid-free derivative of C58, could not give rise to such mutants. The mutations isolated from NT1 were mapped to socR in pAtC58, which is a negative regulator of the soc operon responsible for the uptake and catabolism of an Amadori opine, deoxyfructosyl glutamine (Dfg). A derivative of UIA5 carrying a clone of the soc operon with a transposon inserted in socR also utilizes Oct as the sole nitrogen source. However, UIA5 harboring the operon with mutations in each of the structural genes in the soc operon, socA, B, C, and D, lost the ability to generate spontaneous Oct-utilizing mutants, suggesting that soc genes in pAtC58 are required for the utilization of Oct as a nitrogen source, and that derepressed expression of these genes allows cells to utilize Oct. In contrast, Oct-catabolizing mutants derived from C58, which grew using Oct as the sole nitrogen source, could also utilize the opine as the sole carbon source. These mutants did not carry any detectable mutations in socR or the region upstream to the gene in pAtC58, suggesting that mutations occurring elsewhere in the genome, most likely in pTiC58, allow the uptake and catabolism of the opine.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제1권1호
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• pp.41-48
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• 1984

한국형 Agrobacterium tumefaciens의 분리 및 tumor inducing ($T_1$) plasmid의 유전적 특성을 비교 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. Agrobacterium군은 사과나무($A_1-A_3$), 미류나무($W_1{\sim}W_6$), 은사씨나무($P_1-P_3$) 및 장미($R_1$)의 crown gall tumor에서 도합 13종을 분리하였으며 각 군의 plasmid를 관찰한 결과 ATCC 15955보다 $P_1$ 및 $A_2$가 크기가 컸으며 $W_2$, $W_3$, $W_6$ 및 $P_3$는 작았으며 각균의 tumor 유도는 해바라기에 ATCC 15955와 Korean type $W_2$ ($KW_2$)을 접종한 것에서만 각각 접종 4주 및 6주만에 crown gall을 관찰하였다. 아울러 두균종의 $T_1$ plasmid($pT_1$)를 정제하여 몇종의 게한효소를 처리 하였으며 $pT_i$ ATCC 15955와 $pT_1KW_2$는 EcoR I 처리로 25개 및 27개의 band를, Hind III로 23개와 21개, BamH I으로 각각 20개 및 Hpa I으로 12개 및 27개의 band를 관찰하였으며 크기는 $pT_i$ ATCC 15955가 200 kbases(kb)로 $pT_1KW_2$가 87 kb로 관찰 되었다. 아울러 cctopine은 $W_1-W_6$ 및 $P_1-P_3$균에 의한 tumor조직에서 관찰 되었고 이들균을 octopine type균으로 사료 되었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제30권4호
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• pp.293-299
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• 1987

Bradyrhizobium japonicum ROKS 26 균주를 glycine및 Iysozyme을 처리하여 spheroplast를 형성시킨 후 Agrobacterium tumefaciens에서 분리한 Ti plasmid를 분리하여 형질전환 시키고 octopine 영양 요구성에 의하여 transformants를 분리하였다. 그 결과 Ti plasmid가 도입된 transformants의 형질전환율은 $1{\times}10^{-7}$ 정도 되었다. 얻어진 transformant의 plasmid를 조사한 결과 도입된 Ti plasmid 존재가 확인되었으며, 2차원 전기영동법으로 균체 단백질을 분석한 결과 수용세포인 Bredyrhizobium japonicum ROKS 26과 transformant간의 단백질 구성 차이도 화인되었다. 또한 transformant의 근류 형성력을 조사한 결과 본래의 근류의근류형성력을 가지고 있었으나, crown gall형성에 있어서는 Agrobacterium tumefaciens 15955에 의한 gall보다는 크기에 있어 차이가 있었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제49권3호
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• pp.192-195
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• 2006

국내에서 개발된 비타민 E 강화 유전자변형 들깨의 정성 PCR 분석법의 개발을 위해 들깨의 내재 유전자로써 KAS-I (Beta-ketoacyl-ACP synthase I)를 선별하였고, 이러한 내재유전자를 특이적으로 증폭시킬 수 있는Primer(Pfru3-F/R)쌍을 이용한 PCR에서 95 bp의 PCR증폭 산물을 얻었으며, 들깨를 포함한 16개 작물에 대해 PCR을 수행한 결과에서 들깨만이 특이적으로 증폭되는 것을 확인하였다. 또한, 비타민 E 강화 유전자변형 들깨에 삽입된 TMT(${\gamma}$-tocopherol methyltransferase) 유전자와 OCS(Octopine synthase) terminator 연결 부위를 증폭시켜 148 bp의 PCR 산물을 얻을 수 있는 primer(TMTO-F/R)를 제작하였으며, 이러한 두 쌍의 primer를 이용하여 국내 개발된 비타민 E 강화 유전자변형 들깨의 PCR 정성 분석법을 확립하였다.

• Journal of Plant Biology
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• 제38권1호
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• pp.19-24
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• 1995

The vir genes expression of Ti plasmid is induced by a family of related phenolic compounds. We investigated the effects of various phenolic compounds, Ti plasmids and hosts on the expression of the vir genes in the same type of octopine Ti plasmids, pTiKU12, pTiAch5 and pTiA6. The vir gene induction of pTiKU12 was remarkably stimulated by p-coumaric acid in relation to acetosyringone, but those of pTiAch5 and pTiA6 were more stimulated by acetosyringone than by p-coumaric acid. The effect of phenolic compound on the vir gene induction was different according to the kind of Ti plasmids. Also, the vir gene expression of A. tumefaciens KU913, which has pTiKU12 was about 6.2 times as much as that of A. tumefaciens KU915, which has pTiKU12 in KU12 host, in the presence of ferulic acid. But no difference was shown in the presence of p-coumaric acid. The vir gene induction abilities of phenolic compounds are different according to the kinds of phenolic compounds, Ti plasmids and hosts.