An enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was developed for the detection of residual gentamicin(GM) in edible animal products. The immunogen(GM-KLH conjugate) and coating antigen(GM-BSA conjugate) were prepared by coupling GM sulfate to keyhole limpet hemocyanin(KLH) and bovine serum albumin(BSA) in the presence of 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, respectively. Polyclonal antibody to GM was produced in rabbits(New Zealand White, female) by using the immunogen and the antibody titer was measured by indirect ELISA. A competitive ELISA was developed using GM-bovine serum albumin conjugate as a coating antigen, GM(as standards or sample), polyclonal antibody to GM, secondary antibody conjugated with horseradish peroxidase as an enzyme, and H2O2 and o-phenylenediamine dihydrochloride as a substrate and a chromophore, respectively. The detection limit of GM was 10 ng/ml and the standard curve of GM(n=26) was linear up to 10 $\mu\textrm{g}$/ml in this competitive ELISA system. There were no cross-reactivities of the partially purified antibody between GM and the various antibiotice such as amikacin, benzyl-penicillin, chloramphenicol, erythromycin, furazlidone, kanamycin, neomycin, oleandomycin, streptomycin, sulfathiazole and thiamphenicol(CR50<0.05%)
녹차중(綠茶中)의 L-ascorbic acid를 정량(定量)함에 있어서 흔히 사용되고 있는 DNP법(法)을 적용할 때 불순물(不純物)에 의한 방해(妨害)여부와 그의 제거방법(除去方法)에 대하여 검토(檢討)한 결과(結果)는 다음과 같다. 즉, DNP법(法)으로 AsA를 측정시 ethyl glyoxal, diacetyl, caffeine둥 불순물질 및 아미노산(酸)들이 방해하였으며, 이들 물질을 제거하는 수단으로 브롬산화(酸化)후 o-phenylenediamine을 반응시킨 다음 chloroform으로 추출제거(抽出除去)하고 Amberlite $IR-120(H^{+})$로 아미노산(酸)을 제거(除去)한 후에 DNP법(法)으로 비색정양(比色定量)하면 L-ascorbic acid 함량(含量)을 정확히 측정(測定)할 수 있었다. 또한 분석소요시간(分析所要時間)이 TLC법(法)에 비해서 현저히 단축되고 재현성(再現性)도 좋아서 녹차중(綠茶中)의 ascorbic acid 정량(定量)에는 본법(本法)이 적합함을 확인하였다.
This report shows that hydroxyl radical, generated by a Fenton reaction involving adenosine $5'-diphosphate/Fe^{2+}$ complex ($5-15\;{\mu}M$) and $H_2O_2$ ($2\;{\mu}M$), induced differentiation of HL-60 cells in a dose- and time-dependent manner. This is evidenced by the increases in 12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate- and fMLP-stimulated superoxide production capability. The cells exposed to hydroxyl radical for defined periods (24∼96 hr) continued to differentiate even after the hydroxyl radical generating system had been removed. The differentiated cells displayed fMLP-stimulated calcium mobilization and increased expression of myeloid-specific antigen CD11b and CD14. The extent of the differentiation was markedly reduced by desferrioxamine ($100\;{\mu}M$), dimethylthiourea (5 mM), N,N'-diphenyl-1,4-phenylenediamine ($2\;{\mu}M$), and N-acetyl-L-cysteine (5 mM). The induction of differentiation by hydroxyl radical was enhanced by 3-isobutyl-1-methylxanthine ($200\;{\mu}M$) and Ro-20-1724 ($8\;{\mu}M$), and inhibited by dipyridamole (2 ${\mu}M$). These results suggest that hydroxyl radicals may induce commitment of HL-60 cells to differentiate into more mature cells of myelomonocytic lineage through specific signal-transduction pathway that is modulated by phosphodiesterase inhibitors.
This study aimed to evaluate the antimutagenic and anticarcinogenic activity of turmeric essential oil as well as to establish biochemical mechanisms of action. Antimutagenicity testing was accomplished using strains and known mutagens with and without microsomal activation. Anticarcinogenic activity was assessed by topical application of 7, 12 - dimethylbenz[a]anthracene (DMBA) as initiator and 1% croton oil as promoter for the induction of skin papillomas in mice. Inhibition of p450 enzymes by TEO was studied using various resorufins and aminopyrene as substrate. Turmeric essential oil (TEO) showed significant antimutagenic activity (p<0.001) against direct acting mutagens such as sodium azide ($NaN_3$), 4-nitro-O-phenylenediamine (NPD) and N-methyl-N-nitro N'nitrosoguanine (MNNG). TEO was found to have significant antimutagenic effect (>90%) against mutagen needing metabolic activation such as 2-acetamidoflourene (2-AAF). The study also revealed that TEO significantly inhibited (p<0.001) the mutagenicity induced by tobacco extract to Salmonella TA 102 strain. DMBA and croton oil induced papilloma development in mice was found to be delayed and prevented significantly by TEO application. Moreover TEO significantly (P<0.001) inhibited isoforms of cytochrome p450 (CYP1A1, CYP1A2, CYP2B1/2, CYP2A, CYP2B and CYP3A) enzymes in vitro, which are involved in the activation of carcinogens. Results indicated that TEO is antimutagenic and anticarcinogenic and inhibition of enzymes (p450) involved in the activation of carcinogen is one of its mechanisms of action.
This study was conducted to evaluate the possibility of application of a microenzyme-linked immunosorbent assay(micro-ELISA) for the serodiagnosis of specific toxoplasma antibodies in swine sera and this test was performed as a microplate system by coating the polystyrene plates with toxoplasma soluble antigen, incubated serially diluted sera, then added horse radish peroxidase labelled goat anti-swine IgG(r) conjugate followed by o-phenylenediamine as substrate. The color development by enzyme-substrate reaction was determined by the photometric reading [ELISA reader at 490nm (OD)] and visual reading. The soluble antigen was prepared from the tachyzoites in mouse peritoneal cavity. A total of 1,200 swine sera from pig slaughter-house and a total of 116 swine sera from pig breeding station (S-C farm) were tested for the detection of antibodies to Toxoplasma gondii. The results obtained were summarized as follows: 1. The optimal reactions of indirect ELISA for the test sera were determined by the dilution of antigen 1:256 and 1:3,200 of horse radish peroxidase conjugate [anti-swine IgG(r)]. 2. The specific togoplasma antibody(IgG) in pigs infected with Tp artificially were detected as the serum titers of 1:64 or 1:128 at one week postinfection. 3. Of a total of 1,200 swine sera from pig slaughter-house 505 samples of sera were detected as positive (42.1%) and of a total of 116 swine sera from S-C pig breeding station 68 samples of sera as positive (58.6%). 4. The specific antibody(IgG) detection rates against a total of 1,200 test sera from pig slaughter-house were not significant between male (43.1%) and female (40.7%). 5. The indirect ELISA was proved to be a sensitive and specific procedure for the serodiagnosis of swine toxoplasmosis and also evaluated as an effective screening test for the large scale of test samples in laboratory.
Critical parameters affecting sensitivity and specificity of an enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) for detection of antibodies to avian infections bronchitis virus(IBV) were standardized. By adopting the optimized conditions an equation calculating ELISA antibody titers from the observations at single serum dilution was formulated. The purified antigen of IBV Mass-41 strain was dispensed into polystyrene microplate wells at a concentration of 300ng per well($100{\mu}l$) and the plates were coated by completey drying at $37^{\circ}C$. Diluted chicken serum and horseradish peroxidase conjugated goat anti-chicken IgG were added in order in $100{\mu}l$ volumes per well and allowed to react for 30 minutes each at room temperature. Just before use and after each reaction the plates were washed three times with distilled water. Finally o-phenylenediamine solution was added as an enzyme substrate. After incubation for another 15 minutes at room temperature absorbances were read at 492nm. Hyperimmune serum against Mass-41 strain was used as internal reference positive(IRP) serum. After repeated titration of IRP and negative serum, a constant titer of IRP was determined. Serum titrations were carried out for various sample sera together with IRP and negative sera and the observed titers of sample sera were corrected by reflecting the ratio between observed and constant titers of IRP serum. These corrected titers of the sample sera were plotted against sample/positive(S/P) OD ratios. All the OD's measured in the serum titrations were also corrected by substracting negative serum OD. The following equation was formulated from the above data; $Log_{10}$ ELISA titer=$5.568({\log}_{10}S/P)+4.161$ Thus it was possible to calculate ELISA titer by measuring absorbance at 1/400 single serum dilution. Titer measured by cross ELISA tests employing Mass-41 strain and three local IBV isolates were similar. These results suggest that the ELISA tests standardized in this study can be used for evaluating not only vaccinal immunity but also for infection status against fields IBV's.
우리나라 동치미 발효에 관여하는 유산균의 항돌연변이활성을 조사하기 위하여 숙성중의 동치미부터 300여주의 유산균을 분리하였다. 이들 균주들의 항돌연변이활성이 활성을 Salmonella enterotica serovar typhimurium TA100과 TA98을 이용하여 조사하고 직접 변이원 MNNG, NPD, 4-NQO와 간접변이원으로서 AFB1에 대하여 항돌연변이 활성이 가장 우수한 DLAB19균주를 최종 선별하였다. 최종 선별한 DL-AB19의 형태학적, 배양학적 및 생리학적 특성을 조사하여 Bergeys Manual Systematic Bacteriology의 분류 기준에 따라 동정한 결과 Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris 또는 그 유연균으로 동정하였다. Leu. mesenteroides subsp. cremoris DLAB19의 배양 상징액의 MNNG, NPD, 4-NQO 및 AFB1에 대한 항돌연변이 활성은 100$\mu$ι/plate 첨가시활성이 가장 높게 나타났다. 또한 B. subtilis의 포자를 이용한 spore-assay 방법을 사용하여 MNNG와 4-NQO에 대한 항돌연변이 활성을 가지고 있음을 재확인하였다.
본 연구에서는 화학적 구조가 다른 2종의 dianhydride 단량체인 1,2,4,5-benzenetetracar boxylic dianhydride (PMDA)와 4,4'-(4,4'-isopropylidenediphenoxy)bis(phthalic anhydride) (BPADA) 및 2종의 diamine 단량체인 m-phenylenediamine (m-PDA)와 4,4'-oxydianiline (ODA)의 몰 비를 조절함으로써 9종의 폴리이미드를 합성하였다. 합성된 폴리이미드를 사용하여 casting method로 2층형 Flexible Copper Clad Laminate(FCCL)을 제조한 후, 열적 특성, 흡수율 및 접착력을 평가하였다. 제작된 폴리이미드의 유리전이온도$(T_g)$와 시료가 5 wt% 손실되는 분해 온도를 측정한 결과, m-PDA와 PMDA의 함량이 증가할수록 유리전이온도 및 시료가 5 wt% 손실되는 온도가 증가하였다. 폴리이미드의 흡수율은 ODA와 BPADA가 증가할수록 감소하였다. 이는 ODA와 BPADA의 상대적으로 긴 분자 구조 때문으로 판단된다. 박리 시험을 실시한 결과, ODA와 BPADA의 함량이 증가할수록 접착력이 증가하였다.
Gas chromatography를 이용하여 methylglyoxal, diacetyl 및 triose reductone과 같은 dicarbonyl류(類)를 분리측정(分離測定)할 수 있는 조건(條件)을 실험(實驗)하였던 바 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. MG, DAc, DTR의 혼합물(混合物)에 OPD를 반응시켜 quinoxaline 유도체(誘導體)를 만들고 이것을 클로로포름으로 추출(抽出)하면 MG 및 DAc는 거의 100%추출(抽出)되었고, DTR은 에틸에테르에 추출(抽出)되었다. 2. SE-30을 충진제로하여 얻어진 column 조건(條件)에서 MG-OPD와 DAc-OPD는 완전히 분리측정(分離測定)할 수 있었다. 3. 당류중(糖類中) glucose의 OPD 축합물형성조건(縮合物形成條件)은 D-glucose 180mg을 0.1N-NaOH 용액 10ml에서 5분간(分間) 가열후 OPD와 반응(反應)시켜 pH 6. 0에서 클로로포름으로 추출(抽出)하여 GLC에 겉면 5개의 peak가 나타났고, 그 중에서 2개는MG-OPD와 DAo-OPD임을 확인하였다. 그러나 중성(中性) 및 산성가열(酸性加熱)인 경우는 peak가 확실치 않았다.
The metal complexes can be influenced not only by the central metal atoms and the substituent groups, but also by the native of the chelating atoms. For example, near-infrared absorbing chromophores were synthesized by the reaction of phenylenediamine derivatives with a solution of pottassium hydroxide followed by the addition of nickel(II) chloride. These dyes provide absorbing infrared light over 780-840 nm with an extinction coefficient of $2.5-6.0{\times}10^4$. By introduction of alkyl, alkoxyl, cyano, and other functional group into the parent dye, these dyes greatly improved the solubility in organic solvent. New near-infrared absorbing donor-acceptor chromophores have been investigated by varying the electron donating and accepting strength of the two halves of the molecule. The cyanine chromophores permit the simplest way of obtaining systems that absorb well into the near-infrared region of the spectrum. Cyanine dyes possess high extinction coefficients that initially increase with Increasing chain length. These chromophores could be useful in near-infrared optical materials.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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