• 한국정보통신학회논문지
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• 제15권4호
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• pp.1000-1006
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• 2011

본 연구에서는 vir유전자의 발현에 있어서 페놀화합물, Ti 플라스미드들의 종류(cctopine, nopaline), A. tumefaciens 들의 영향에 대해서 조사하였다. 9종류의 페놀화합물들을 3종류의 A. tumefaciens들과 3종류의 Ti 플라스미드들을 대상으로 조사하였다. Nopaline Ti 플라스미드를 포함하는 A. tumefaciens MW107에 존재하는 vir유전자는 4-hydroxyacetophenone, phenol, catechol, resorcinol, acetosyringone과 vanillin등 6종류의 페놀화합물들에 의해서 상대적으로 높게 발현되었다. Octopine Ti 플라스미드들을 포함하는 A. tumefaciens MW105와 MW108의 vir유전자들은 acetosyringone에서만 발현되었다. 따라서 vir유전자의 발현을 유도시키는 요인들은 Ti 플라스미드 종류, A. tumefaciens와 페놀화합물들의 종류에 따라서 서로 다르다는 결과를 얻었다.

• Journal of Ginseng Research
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• 제10권1호
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• pp.45-54
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• 1986

인삼에 이용할 수 있는 vector system의 개발연구의 일환으로 우선 Agrobacterium spp.를 인삼의 잎, 줄기 및 뿌리에 접종하여 crown gall tumor의 형성 및 탈분화 그리고 Agrobacterium spp.의 opine화합물의 이용정도등을 조사하였던 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. Agrobacterium tumefaciens C58은 인삼의 모든 부위에서 crown gall tumor를 형성하였으나 secondary tumor나 teratoma는 형성하지 못했다. 2. Wild type Agrobacterium tumefaciens Y101, Y104, Y109는 crown gall tumor를 형성하였으며, tumor의 형태, 크기 그리고 생장 정도는 strain별로 차이가 있었다. 3. Agrobacterium tumefaciens Y194는 특히 amorphic tumor를 형성하였다. 4. 줄기에서 형성된 tumor조직에서 callus를 유기하고자 phytohormone free배지 및 2,4-D 첨가 배지에 접종한 결과 전혀 callus가 형성되지 않았다. 5. 뿌리에서 형성된 callus가 형성되긴 하였으나 출현빈도가 극히 낮았으며, 정상 조직과는 달리 2,4-D의 효과가 미미하였다. 6. Agrobacterium spp.에 의한 opone화합물의 이용능력을 조사한 결과, Agrobacterium tumefacciens Y104, Y110 과 C58은 nopaline type이었고 Y109는 octopine type이었으며, Y101은 nopaline과 octopine 어느것도 이용하지 못하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제22권4호
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• pp.201-205
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• 1995

Nopaline synthase promoter의 upstream element region을 본딴 nos-RP 요소라고 불리워진 합성 oligomer는 nos wild type promotor의 5' end에서부터 - 101까지를 절단한 promoter의 upstream에 삽입하였다. Nos promoter의 활성은 nos promoter와 연결되어 있는 reporter gene인 Chlorarnphenicol과 $\beta$-glucuronidase유전 인자들이 발현되는 현상을 연구함으로써 측정하였다. 형질 전환된 유전인자를 가지고 있는 담배 식물에 대한 분석은 nos minimal promoter의 활성이 합성 nos-RP 요소가 삽입됨으로써 회복될 수 있음을 보여 주었다. 또한 Nos minimal promoter의 upstream에 nos-RP 요소의 삽입은 여러 가지 환경적인 요소들인 auxin, dithiothreitol, salicylic acid 그리고 methyl jasmonate에 의해서 활성이 증가됨을 보여 주었다.

• KSBB Journal
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• 제7권3호
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• pp.155-160
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• 1992

식량으로 쓰이는 식물 단백질은 공통적으로 Isoleucine, Lysine, Methionine, Threonine, Tryptoplan등 5가지 필수아미노산이 결핍되어있다. 본 연구에서는 이러한 필수아미노산을 다량 함유한 단백질을 발현시킬 수 있는 합성유전자를 fekaqo에서 높은 수준으로 발현시키고자 강한 식물 promoter로 알려진 CaMV 35S, CaMV duplicate 35S promoters를 사용하였다. 형질 전환 및 재분화된 식물을 분석한 결과 본 합성 유전자가 식물 nuclear genome 안으로 도입을 안정하여 잘되었고 mRNA수준까지는 유의적인 증가를 보였으나 단백질 수준에서는 유의적 수준의 증가를 관찰할 수 없었다.

• Journal of Plant Biology
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• 제32권1호
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• pp.23-32
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• 1989

We have developed a plasmid vector, pKCH1, for the purpose of higher plant transformation. It contains the promoter region of cauliflower mosaic virus 35S transcript (P35s) and the terminator region of nopaline synthase gene (Tnos) with unique cloning sites, Bam HI and Xba I, between them. After inserting a foreing gene at the cloning sites, P35s-foreign gene-Tnos cassette can be recovered by using a restriction enzyme Hind III.

• KSBB Journal
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• 제7권3호
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• pp.191-200
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• 1992

토양 시료로부터A. tumefaciens를 분리 동정하고 이를 옥수수의 형질전환에 이용하기 위하여 binary vector를 이용하여 형질전환시킨 후 옥수수의 중배축 조직과 공존배양을 실시하였다. Schroth의 선택배지에서 선별된 colony들은 단일 형태를 나타내었다. 분리 균주는 해바라기 유식물의 잎조직에 종양을 형성하였으며, 거대 plasmid를 가지고 있었는데 이는 대조균주인 C58이나 Ach5의 plasmid와는 다른 종류였다. 분리균주들에 의해 형성된 tumor의 형태 및 균주의 생리, 생화학적 특성들에 의하여 공시균주를 A. tumefaciens biovar 1으로 동정하였으며 nopaline 형으로 추정하였다. 분리 균주중 AK204를 사용하여 옥수수 조직을 형질전환시키기 위하여 선택maker를 가지고 있는 binary vector(pGA642)를 균주내로 전이 시켰다. 이로 인하여 형질전환된 AK204를 옥수수 중배축 조직과 공존배양하므로서 옥수수 조직세포를 형질전환 시킨 결과, 1차적으로 Km에 저항성을 띠는 형질전환체를 선발할 수 있었으며, 그들의 가용성 단백질의 PAGE pattern이 변화되었음을 확인하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제39권5호
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• pp.355-360
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• 1996

시험관내에서 합성한 오이모자이크 바이러스 RNA단편을 성공적으로 절단한 ribozyme (한국농화학회지 37: 56-63(1994))을 담배 식물체에 발현시켜 바이러스 저항성 식물체를 만들려고 하였다. 해당 ribozyme의 염기서열을 함유한 DNA 단편을 꽃양배추 바이러스 35S promoter와 nopaline 합성효소 terminator에 연결시키고 연결 부위 및 ribozyme의 염기서열을 확인하였다. 염기서열을 확인한 합성유전자를 Agrobacterium tumefaciens LBA4404에 합성유전자를 함유한 E. coli HB101을 E. coli HB101(pRK2073)를 helper로 Agrobacterium tumefaciens LBA4404와 함께 배양하는 tri-parental mating system을 이용하여 도입시켰다. Ribozyme 유전자를 함유한 Agrobacterium 세포를 담배잎 조각과 함께 배양한 후 항생제인 kanamycin을 함유한 MS 배지에서 자란 열개의 작은 식물체를 재분화하였다. 형질전환한 식물체내에 ribozyme 유전자가 존재하는지의 여부는 합성효소증폭반응(PCR)을 이용하였던바, 일곱개체가 예상된 570 염기쌍의 DNA 단편을 가지고 있었다. 이들 중 네 개체로부터 RNA을 분리하여 formamide를 함유한 agarose에서 전기영동한 후 35S-ribozyme-nos의 DNA 단편으로 Northern hybridization을 행하였던 바, 식물세포내의 nuclease에 의해 ribozyme RNA가 분해된 듯 감지 할 수 없었다. 따라서 ribozyme을 이용하여 바이러스 저항성 식물체를 얻으려면 nuclease에 의해 분해되지 않는 ribozyme이 필요할 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제12권1호
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• pp.96-105
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• 2002

식물 단백질의 영양가 향상을 위한 일환으로 필수아미노산의 조성이 풍부한 인공단백질을 암호화하는 인공유전자를 담배 식물체에서 발현을 시도하기 위하여, 식물에서 외래유전자의 발현에 널리 사용되는 Cauliflower mosaic virus (CaMV)의 35S promoter를 이중으로 중첩되도록 하고, (Lys-Glu-Trp)이 64번 반복되는 인공유전자 및 nopaline synthase (nos) terminator를 갖고있는 binary vector pART4-4를 구성하였다. 이 재조합 플라스미드는 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질전환에 의해 Nicotiann tabacum (Var. Xanthi)으로 도입되었다. Kanamycin이 포함된 신초 유도 배지 및 뿌리 유도배지를 이용하여 정상적으로 재생된 담배 식물체로부터 도입된 인공유전자의 발현을 분석하였다. 추출한 genomic DNA를 EcoRI으로 자른 다음 Southern blot 분석에 의하면, 효소 절단 시 예상되는 1.1 kb에서 band를 형성하였으며 각각의 형질전환 식물체에 인공유전자가 1 또는 3 개씩 도입되어 있음을 확인하였다. Northern blot 분석에 의하면 약 1.2 kb 전사체가 비교적 안정하게 발현되었으며, 잎, 줄기, 뿌리로부터 RNA를 분리하여 promoter의 조직 특이성 발현을 분석한 결과, 잎에서 생성되는 RNA가 줄기나 뿌리 조직보다 안정하게 발현되었다. 형질전환 식물체에서 Western blot에 의한 단백질 분석 결과, 잎에서 추출한 단백질로부터 원하는 크기인 33 kDa의 인공단백질이 생성됨을 확인하였으며 발현 수준은 전체 세포 단백질의 0.1%로서 낮은 수준이었다.

• 미생물학회지
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• 제25권1호
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• pp.17-22
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• 1987

For the purpose of securing of strains which can be usefully utilized to study symbiosis between Rhizobium and legume plant, A. tumefaciens T7 was isolated and characterized and then subgroup biovar was determined. A. tumefaciens T7 induced smooth tumor like nopaline type one and did not grow at $37^{\circ}C$ and in the presence of 2% NaCl on yeast extract mannitol medium. The strain was able to grow on the New and Kerr selective media and utilize erythritol but not phenylalanine, tryptophan, and tartarate as a sole carbon source. Negative results were obtained from 3-keto-lactose production and oxidase test. The strain produced alkalifrom malonate and citrate and showed acid litmus milk reaction At least two large plasmids were detected in the cell lysate. According to all of these results, it could be concluded that subdivision of isolated strain was biovar 2.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제17권4호
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• pp.274-279
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• 2012

For the quantitative analysis of genetically modified (GM) maize in processed foods, primer sets and probes based on the 35S promoter (p35S), nopaline synthase terminator (tNOS), p35S-hsp70 intron, and zSSIIb gene encoding starch synthase II for intrinsic control were designed. Polymerase chain reaction (PCR) products (80~101 bp) were specifically amplified and the primer sets targeting the smaller regions (80 or 81 bp) were more sensitive than those targeting the larger regions (94 or 101 bp). Particularly, the primer set 35F1-R1 for p35S targeting 81 bp of sequence was even more sensitive than that targeting 101 bp of sequence by a 3-log scale. The target DNA fragments were also specifically amplified from all GM labeled food samples except for one item we tested when 35F1-R1 primer set was applied. A reference plasmid pGMmaize (3 kb) including the smaller PCR products for p35S, tNOS, p35S-hsp70 intron, and the zSSIIb gene was constructed for real-time PCR (RT-PCR). The linearity of standard curves was confirmed by using diluents ranging from $2{\times}10^1{\sim}10^5$ copies of pGMmaize and the $R^2$ values ranged from 0.999~1.000. In the RT-PCR, the detection limit using the novel primer/probe sets was 5 pg of genomic DNA from MON810 line indicating that the primer sets targeting the smaller regions (80 or 81 bp) could be used for highly sensitive detection of foreign DNA fragments from GM maize in processed foods.