The stromatal forms of T. fuciformis and the mycelia of Hypoxylon sp. were collected. The DNA sequence in the ITS region of the 5.8S ribosomal genes of isolated strain KG103 was very similar to that of T. fuciformis AF042409 with a homology of over 98% in the EMBL/GenBank database through BLAST searching. A second isolate, No KG201, one of the symbiotic strains for cultivating T. fuciformis also exhibited high homology with Annulohhypoxylon stygium AJ390406. Potato Dextrose Medium exhibited the best mycelial growth of 14 mm/14 days and 85 mm/14 days for T. fuciformis and its symbiotic fungi, respectively. Optimum culture conditions for the micelial growth were pH 5 at $25^{\circ}C$. For the optimization of artificial cultivation of T. fuciformis in bottle with sawdust medium, several conditions such as type of sawdust, supplements, pH, moisture content, and incubation temperature were investigated. T. fuciformis and symbiotic fungi showed fast mycelial growth on corn cob media (77 and 52%) followed by oak tree sawdust and cotton seed meal. The optimal temperature for mycelial growth of T. fuciformis and symbiotic fungi on corn cob media was $25^{\circ}C$ at 55% of moisture content.
Two strains which have good traits in quality and speedy growing were selected based on previous report(Ryu, 2007) to breed a new strain carrying the traits in it. KNR2322 carrying high quality and KNR2503 carrying a speedy growing trait were cultivated to harvest monokaryons. The monokaryotic mycelia were characterized in growth rate, color, and stability. Selfing of monokaryons from KNR2322 and crossing between KNR2322- and KNR2503-derived monokaryons were performed. Two parental lines, $KNR2322-4{\times}37-6{\times}12(B)$ showing thremmatological values in weight and quality, 68.5g and 6.5 and $KNR2322-30{\times}KNR2503-60(A)$ was harvested in 13.5 days after scraping old medium were selected. Crossing between A and B resulted in two high quality and speedy growing strain, A8B8 and A8B10. Their days for harvest after scraping, weight, and quality were 14.0 days, 88.8g and 92.7g, 7.0 and 7.1. Originality tests were conducted with genomic DNAs of A8B8 and Keuneutari 3ho(commercial strain) by DNA fingerprinting a confrontation culture. The results showed polymorphism and a inhibition line between them. It suggested that the new strain have originality from the commercial strain. A8B8 have been registered in Korea Seed and Variety Service with as "Saesongi 1ho".
The results of examining characteristics of mycelial growth and culture condition for determining the condition of artificially culturing Fomitopsis pinicola are as follows. 1) Mycelial growth and density of F. pinicola. were the highest in the medium of PIDA(Pine Dextrose Agar;66.3mm/10d) followed by the order of GDA, PDA, CDA, PODA, ODA, YM, MCM, MEA(pH 4.7), CHA, and MEA(pH 4.7). 2) Optimal temperature for the mycelial growth and density of F. pinicola were shown to be $30^{\circ}C$, but the mycelia were dead at $40^{\circ}C$. the mycelial growth and density of KNAC9005 strains was the highest at $30^{\circ}C$(66.3mm/10d) followed by the order of 25, 20, 15, 35, 10, and $5^{\circ}C$. 3) Optimal pH for the mycelial growth and density of $40^{\circ}C$ was revealed to be 6.0(88.4mm/10d). above or below pH 6.0, the mycelial growth and density were shown to be retarded. 4) Optimal carbon, nitrogen and organic acid sources for the spawn growth of $40^{\circ}C$ were maltose(331mg/25ml/15d), peptone(347mg/25ml/15d), and glutamic acid(357mg/25ml/15d), respectively. Optimal level of biotin was 370mg/15d and optimal C/N ratio was 40.
Kim, Kyung-Soo;Kong, Won-Sik;Choi, Sun-Gyu;You, Chang-Hyun;Ko, Mi-Suk;Seo, Geon Sik
Journal of Mushroom
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v.2
no.2
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pp.49-59
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2004
To establish a genetic relationships of collected Ganoderma strains, mycelium growth according to media and temperature, colony morphology, chlamydospore formation and fruitbody morphology were investigated. For the identification of optimal growth conditions of the strains, five different growth media and four different temperature were tested. GCM (Ganoderma complete medium) at $30^{\circ}C$ was the most effective for mycelial growth of 68 strains with more or less variation. The strains were divided into 28 groups based on their colony shapes, and most of them belong to CM3 or CM8 group. Chlamydospores were observed in the mycelia of 16 strains including ASI 7022 on microscope, but not in most G. lucidum domestic strains, which showed relatively lagging growth on $35^{\circ}C$ in mycelial growth experiment. These results were not similar to those of G. lucidum but those of G. tsugae imported from USA. The strains were cultivated on oak sawdust media to see their fruit body formation. Ninety-seven among 115 strains formed fruitbodies in sawdust cultivation. They showed two forms of fruitbodies, 89.7% of flat type or 10.3% of antler type, although these shapes can be affected by $CO_2$ concentrations. These results suggest that the native strains formerly considered to belong to G. lucidum have to be re-classified with further study.
In this study, to produce Flammulina velutipes mushroom liquid spawn efficiently and effectively the effects of explosive aeration (supplying air with tiny bubbles) of the liquid culture medium on carbon dioxide concentration and residual sugar content in the medium on carbon dioxide concentration and residual sugar contentin the medium were measured. Carbon dioxide concentrations were measured at the outlet of the incubator. On the third day the explosive aeration greatly increased mycelial growth of the liquid spawn, and carbon dioxide concentration also greatly increased but decreased after 5 days. Free sugar contents in the liquid culture consistantly decreased up to 7 days and thereafter was not detected. The weight of the mycelia were maintained similar levels after 3 days. Total nitrogen content in the liquid medium constantly decreased during the 11days of explosive aeration. The content of free sugars in 7 days of culture was the lowest level, thus the inoculum incubated for 6~7 days was thought to be the most effective. Carbon dioxide concentration measurement at the outlet of the container during the liquid spawn incubation required low cost but was efficient to estimate the degree of mycelial growth to be used as a simple indicator.
This research was carried out to evaluate whether gamma ray is a useful tool for breeding new strains of mushrooms. For this research, 5 mutant groups, 20 strains of Hypsizigus marmoreus, 2 strains of Lyophyllum decastes, and 1 strain of Lyophyllum shimeji were used. Monokaryon spores from one variety of H. marmoreus were irradiated with 50~2,000 Gy of gamma ray. The propriety dose was 50~200 Gy for mutagenesis. Mutant monokaryon mycelia crossed each order to become dikaryon mycelia. The internal transcribed spacer (ITS) regions of rDNA were amplified using PCR, and the products were sequenced. The sequences of the ITS regions (16 partial rDNA, complete ITS1, 5.8 rDNA and partial rDNA) were analyzed by PCR, and strains of H. marmoreus, L. decastes, and L. shimeji were auto-sequenced. The lengths of the sequenced ITSs were 1,052~1,143 nucleotides. Genetic matrices were calculated using Nei-Li's genetic distance coefficient based on ITS sequence. The dissimilarities were 0~3.35% in strains of H. Hypsizigus. In addition, a phylogenetic tree was constructed based on ITS sequences using the neighbor-joining (NJ) method. The phylogenetic tree revealed that 23 strains and 5 mutant groups were divided into 12 clusters; the mutant groups fell into different clusters. These results show that mushroom spores were mutated effectively by gamma ray; therefore, gamma ray could be a useful tool for breeding new strains of mushrooms.
Five white fruitbodies of Ganoderma lucidum found from two different mushroom farms, and the characteristics of atypical fruiting structure formation of these strains were described. The white fruitbodies were spontaneously generated on Quercus-log during the cultivation. They did not differentiate to the normal fruitbodies with pileus, hymenium, stipe and coloration, and fruitbodies remained non-laccateed even after 3 months. Dikaryotic mycelia isolated from the five white fruitbodies differed from wild-type strains in the mycelial growth rate, colony color, and the capacity of atypical fruiting structure (AFS) formation on agar media. These white mutants readily induced brown colored AFSs on the colonies under ventilation and illumination conditions. Both isolates Gl-010 and Gl-011 that were obtained from a normal and white fruitbody, respectively, did not form AFSs in the dark and/or under black light blue (BLB) light illumination, but induced under the visible light. They required dim light for the AFS formation, and the AFS formation was inhibited up to $0.5{\mu}mol\;m^{-2}\;S^{-1}$ in light intensity. However, the other four isolates induced AFSs even in the dark and BLB illumination, although their parent strain, isolate Gl-030, did not form AFSs under any light conditions. The monokaryotic mycelia derived from basidiospores of the AFSs of the white mutants were compatible with the original culture (dikaryon) on a dual culture.
The culture conditions to maximize the production of laccase (EC 1.10.3.2) from Fomitopsis pinicola mycelia were investigated. Among the tested media for the enzyme production, mushroom complete medium (MCM ; 2% dextrose, 0.2% peptone, 0.2% yeast extract, 0.05% $KH_2PO_4$, and 0.05% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$) showed the highest activity of the enzyme. To optimize the culture condition for the laccase activity, influence of various carbon and nitrogen sources was investigated in MCM. Among various carbon and nitrogen sources, 2% glucose and 0.4% peptone showed the highest production of the enzyme, respectively. For the phosphorus and inorganic source, 0.05% $NaH_2PO_4$ and 0.05% $CaCl_2$ were best for the enzyme activity. The enzyme production was reached to highest level after the cultivation for 8 days at $25^{\circ}C$. Native polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) followed by the laccase activity staining using 2, 2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) as the substrate was performed to identify the laccase under culture conditions studied. Zymogram analysis of the culture supernatant showed a laccase band with molecular mass of 52 kDa. The optimum pH and temperature for the enzyme activity were $80^{\circ}C$ and pH 3.0.
To increase both the production of mushrooms and the usages of the residues (used media) for roughage, the pinchips(PC) and sawdusts(SD) of three Korean oak species were tested as cultivating media for Lentinus edodes with varing the composition of the media. The results are as follows. 1. Organic acids(tannic acid and citric acid), which were added in the PC medium to enrich the quality of mushrooms, did not increase the growths of the mycelia and the quality. 2. The mushrooms were able to be harvested from six months after beginning the cultivation. No significant differences were found among the qualities of the mushrooms produced by various treatments. 3. The contents of crude proteins(1.82-4.55%) in the used media were higher than those in woods (c.a. 0.7%), and the total digestible nutrients (44.0-46.0%) in the used medium were not much different from those in rice straws (c.a.48.0%). 4. The contents of some essential amino acids (methionine in the used medium of the tannic acid added PC or S.D. and isoleucine, phenylalanine and lysine in the used medium of the untreated PC or SD) were higher than those in the control (raw media). The contents of a few other essential amino acids (threonine, valine and arginine) were lower in the used media. Most nonessential amino acids in the used media, particularly in the used bed-log, appeared to decrease than those in the control.
In this study, the products of Acanthopanax senticosus fermentation were derived from the mycelia of 2 mushrooms, Ganoderma lucidum and Phellinus linteus, to determine their safety in Sprague-Dawley rats. Rats were orally administered the water extracts of A. senticosus fermentation products with G. lucidum (FM-5111) or P. linteus (FM-5131) at dose levels of 0.5, 1.0, or 2.0 g/kg for the single-dose toxicity test and 0.25, 0.5, or 1.0 g/kg for the repeated-dose toxicity test. There were no significant differences in body weight gain, feed intake, or water consumption between control and FM-5111- or FM-5131-treated rats. Hematological and blood biochemistry analysis revealed that none of the investigated parameters were affected by the A. senticosus fermentation products, and no remarkable lesions were observed upon histopathological analysis. We conclude that the A. senticosus fermentation products obtained from mushroom mycelia are safe for long-term administration and could be considered as multi-functional nutrients for the improvement of liver function and immunity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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