• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 2003년도 Annual Meeting of KSAP : International Symposium on Pharmaceutical and Biomedical Sciences on Obesity
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• pp.87-87
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• 2003

Taurine (2-aminoethanesulfonic acid, $^{+}NH_3CH_2CH_2{SO_3}^{-}$) is endogenous $\beta$-amino acid which is essential in fetal nutrition and development and is present in abundant quantities in several tissues of fetus. In utero, taurine deficiency causes abnormal development and abnormal function of brain, retina, kidney and myocardium. Thus, transfer of taurine into fetus is important during embryonic development. Taurine transporter (TauT) has 12 hydrophobic membrane -spanning domains, which is typical of the $Na^{+}$- and $Cl^{-}$-dependent transporter gene family. Among the various biosynthetic enzymes of taurine, cysteine sulfinic acid decarboxylase (CSD) is the rate-limiting enzyme for biosynthesis of taurine. However, the enzyme activities of taurine biosynthesis are limited in early stage of embryonic development. To analyze the expression period of TauT and CSD during embryonic development, we have investigated the gene expression of TauT and CSD using reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) in mouse and chicken embryos. RT-PCR anaylsis revealed that both TauT and CSD mRNAs were already expressed at Day-4.5 in mouse embryo. In chicken whole embryo, TauT and CSD mRNAs began to appear on developing times of 48 hrs and 12 hrs, respectively. TauT mRNA was detected in the organs of heart, brain and eye of the day-3 chicken embryo. Our data show that TauT and CSD mRNAs were expressed in early stage of embryonic development.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제2권2호
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• pp.205-212
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• 1998

$Na^{+}$이온 비의존적으로 작동하는 포도당 수송체 (glucose transporter 1, Glut1)는 생쥐 배아의 세포막을 경계로 포도당을 수송하는 주요통로이다. 성장인자 가운데 insulin-like growth factor-I (IGF-I)은 생쥐배아에서 포도당의 유입을 증가시키는 것으로 알려져있으나 이러한 효과가 IGF-I 의한 Glut1의 전사조절 효과에 기인한 것인지는 알려져 있지 않다. 본 연구는 포도당과 IGF-I 생쥐의 착상전 배아 발생과 Glut1 발현에 미치는 영향을 조사함으로써 이들에 의한 배발생 조절기작을 이해하고자 시행하였다. 2-세포기 배아는 배양액내 pyruvate 존재하에 포도당의 유무와 관계없이 포배로 발생하였다. IGF-I은 2-세포기에서 체외 발생한 중기포배내 할구수를 유의하게 증가시켰다. 2-세포기부터 체외발생한 상실배의 Glut1 전사체의 양에는 배양액내 포도당의 유무에 따른 차이가 없었으며, IGF-I은 포도당과 무관하게 Glut1의 발현을 증가시켰다. 이러한 결과에서 상실기 생쥐배아의 경우 단순히 포도당의 결핍에 의해 Glut1의 발현이 전사수준에서 촉진되지 않으며, Glut1 발현의 증가는 IGF-I에 의한 배발생 촉진효과와 관련이 있는 것으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제41권3호
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• pp.115-119
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• 2014

Objective: This study was designed to investigate the survival rate of vitrified mouse blastocysts depending on the presence or absence of sucrose in vitrification solution. Methods: Mouse two-cell embryos were collected and cultured to blastocysts. Two vitrification solutions were prepared. The control solution was composed of 25% glycerol, 25% ethylene glycol, and 0.5 M sucrose (G25E250.5S) containing 2.5 mL glycerol, 2.5 mL ethylene glycol, 2 mL SSS, and 0.855 g sucrose in 5 mL PB1. The experimental solution was composed of 25% glycerol and 25% ethylene glycol (G25E25) and contained 2.5 mL glycerol and 2.5 mL ethylene glycol in 5 mL PB1. Artificial shrinkage was conducted by aspirating the blastocoelic fluid using an ICSI pipette. To examine the effect of sucrose in the vitrification solution on the survival rate of mouse blastocysts, the shrunken-equilibrated blastocysts were rehydrated or vitrified after being exposed to one of the two vitrification solutions. After exposure and the vitrification-thawing process, the re-expansion rate and hatching rate were evaluated after 6 hours of in vitro culture. Results: The re-expansion rate of mouse blastocysts exposed to vitrification solution with and without sucrose were not different in the experimental solution (without sucrose) (98%) and the control solution (with sucrose) (92%) (p>0.05). The hatching rate was higher in the experimental solution (95%) than in the control solution (88%), but did not differ across two treatments (p>0.05). The re-expansion rate of mouse blastocysts vitrified in the control solution was 92% and 94%, respectively (p>0.05), and the hatching rate was higher in the experimental solution (90%) than in the control solution (74%) (p<0.05). Conclusion: Sucrose need not be added in vitrification solution for freezing of artificially shrunken mouse blastocysts.

• 한국가축번식학회지
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• 제21권1호
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• pp.47-52
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• 1997

본 연구는 체외생산된 생쥐 1-세포기배의 초자화동결이 체외/체내 발달율과 수정란 이식후 태어난 산자의 염색체에 미치는 영향을 검토하기 위해 실시하였다. 체외수정하여 얻어진 생쥐 1-세포기배는 EFS40 (40% ethlyene glycol, 30% Ficoll, 0.3 M sucrose) 동결액을 이용하여, 상온 ($25^{\circ}C$)에서 30초 동안 노출한후, 액체질소에 침지하여 초자화동결하였다. 동결후 융해된 생쥐 1-세포기 수정란은 M16 배양액에서 4일동안 배반포기까지 배양하였고, 이때 배반포기까지의 체외배 발달율은 71.5%였으며, 배양된 배반포기배는 가임신 3일된 대리모의 한쪽 또는 양쪽 자궁각에 (6~8개/자궁각) 이식하였다. 모든 대리모는 분만을 유기하였으며, 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 임신율과 체내 생존율 즉, 산자 생산(80.0, 39.6%)에 있어서 대조군 (77.8, 50.0%)과 유의차가 없었다. 또한 수정란 이식후 태어난 모든 산자의 염색체 (n=40)는 정상이었다. 이상의 결과로 미루어볼 때 본 실험에서 이용된 초자화동결방법은 생쥐 1-세포기배의 동결에 효과적으로 이용될 수 있음을 시사한다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제3권1호
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• pp.75-85
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• 1999

생쥐 초기 배아의 형태형성에 영향을 주는 세포질내 인자의 기원과 작용기작을 연구하기 위해 단백질 합성과 단백질 활성화 효소 (protein kinase)의 억제제를 처리한 배아의 세포질로 재조합된 배아에서 발생과 RNA합성, 단백질 인산화를 조사하였다. 단백질 합성 억제제인 cycloheximide (CHX)가 함유된 배양액에서 24시간 배양한 1-세포 배아의 제핵된 세포질을 두 개의 전핵을 모두 가진 절반의 1-세포 배아와 재조합한 P+P-CHX군의 배아 발생과 유전자의 활성화는 P+P군의 배아와 유사하였으나, 밀집 형성과 밀집형성이 일어나는 세포 시기는 빨라져서 P+2군과 유사하였다. 또한 초기 배아의 발생 시 1-세포기에서 2-세포기 사이에 일어나는 단백질 인산화가 형태형성과정에 미치는 영향을 알아보기 위해, tyrosine protein kinase와 serine-threonine protein kinase의 억제제인 genistein (Gen)과 6-dimethylaminopurine (6-DMAP)이 처리된 배아의 제핵된 세포질과 2개의 전핵을 가진 절반의 1-세포 배아를 융합시킨 P+2-Gen과 P+2-DMAP군 배아의 발생과 밀집현상을 대조군인 P+P와 P+2군과 비교하였다. P+2-Gen과 P+2-DMAP군 배아에 발생은 대조군에 비해 빨랐으며, 특히 P+2-Gen군 배아는 밀집이 4-세포기에 일어나 8-세포기에 일어나는 P+2-DMAP군의 배아에 비해 일어나는 시간과 세포 시기가 빨라졌다. SDS-PAGE 방법으로 분석한 재조합 3시간째 P+2-Gen과 P+2-DMAP군의 단백질 인산화량은 대조군인 P+P와 P+2군에 비해 증가하였으나 종류의 변화는 없었다. 한편 2차원 전기영동법을 이용하여 P+2-DMAP군의 배아에서 P+2-Gen에 비해 80KD와 110KD 단백질의 인산화가 억제된다는 결과를 얻었다. 이상의 결과들은 생쥐의 초기 배아에서 형태 형성의 조절은 유전자 활성화 또는 난자내 모계 mRNA에 의해 수정 후 합성되는 새로운 단백질에 의한 것이 아니고, 난자내에 존재하는 인자에 의해 조절됨을 시사한다. 이 인자들 중 단백질의 인산화는 배아 발생과 형태형성에 밀접한 관계가 있으며, 특히 초기 1∼2세포기 사이에 serine-threonine protein kinase에 의해 인산화되는 단백질이 밀집현상을 조절하는 데 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제23권3호
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• pp.333-339
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• 1996

난구세포는 lactate와 pyruvate를 쉽게 생성하고, 이로 인해 배양액내 에너지원의 농도를 변화시켜 난자의 수정과 배양에 영향을 주는 것으로 알려져 있다. Glucose, lactate 및 pyruvate의 농도가 상이한 M16, MTF 및 CZB배양액에서 난구세포를 포함한 생쥐난자의 체외 수정과 발달을 관찰하여, 이들 기질의 영향에 대하여 살펴보고 배양액의 유용성을 재검토하고자 하였다. Glucose를 제거한 배양액 (CZ2 배양액)에서 수정율과 배반포 형성율은 다른 배양액에 비해 유의하게 감소되었으나 (p<0.05), 생쥐 난관액과 동일한 기질 농도로 조성된 MTl (난간액이 난구세포를 포함하고 있을 때) 및 MT2배양액 (난관액이 난구세포를 포함하고 있지 않을 때)과 glucose를 포함한 modified CZB배양액에서는 영향이 없었다. 이와 같은 결과로 기질의 농도를 생리적 수준으로 조정한 배양액의 이용은 난구세포를 포함한 생쥐 난자의 체외수정과 그 발달을 향상시키지 못하고, glucose의 제거는 악영향을 나타내는 것으로 사료된다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제15권3호
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• pp.231-237
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• 2011

The objective of this study was to elucidate the dynamics of microtubules in post-ovulatory aging in vivo and in vitro of mouse oocytes. The fresh ovulated oocytes were obtained from oviducts of superovulated female ICR mice at 16 hours after hCG injection. The post-ovulatory aged oocytes were collected at 24 and 48 hours after hCG injection from in vivo and in vitro, respectively. Immunocytochemistry was performed on ${\beta}$-tubulin and acetylated ${\alpha}$-tubulin. The microtubules were localized in the spindle assembly, which was barrel-shaped or slightly pointed at its poles and located peripherally in the fresh ovulated oocytes. The frequency of misaligned metaphase chromosomes were significantly increased in post-ovulatory aged oocytes after 48 hours of hCG injection. The spindle length and width of post-ovulatory aged oocytes were significantly different from those of fresh ovulated oocytes, respectively. The staining intensity of acetylated ${\alpha}$-tubulin showed stronger in post-ovulatory aged oocytes than that in the fresh ovulated oocytes. In the aged oocytes, the spindles had moved towards the center of the oocytes from their original peripheral position and elongated, compared with the fresh ovulated oocytes. Microtubule organizing centers were formed and observed in the cytoplasm of the aged oocytes. On the contrary, it was not observed in the fresh ovulated oocytes. The alteration of spindle formation and chromosomes alignment substantiates the poor development and the increase of disorders from the post-ovulatory aged oocytes. It might be important to fertilize on time in ovulated oocytes for the developmental competence of embryos with normal karyotypes.

• 한국가축번식학회지
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• 제18권4호
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• pp.285-297
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• 1995

The mammalian oviduct is a place where ontogeny of an animal begins. Nowadays, however, it is possilbe to manipulate a part of physiological events occurring in the oviduct so that fertilization of gametes and early embryonic development of zygotes could proceed outside oviductal environment. Rabbit zygotes readily develop to blastocysts in a conventional culture condition. Most of the mouse fertilized eggs do so when cultured under a specific environment, e.g., in a medium containing ethylenediamine tetraacetic acid. Similarly, a significant number of zygotes from rat, sheep, pig or cattle can develop to blastocysts if they are cultured in the presence of particular component which appear to be somewhat species-specific. Instead of changing the components of medium, somatic cells including oviductal epithelial cells, have widely been used to improve mammalian embryonic development in vitro. Many investigators have reported that mammalian zygotes, whether fertilized in vivo or in vitro, could develop to blastocysts when they were cultured on a monolayer of various kinds of somatic cells or even in a somatic cell-conditioned medium. While little is known about the nature of embryotrophic factor(s) produced in vitro by somatic cells, the existence fo oviduct-specific protein(s) has consistently been demonstrated in many laboratories. Some of these proteins are reported to be associated with oviductal eggs. However, the physiological role of these proteins has still to be determined. Recently we observed that the perivitelline space of mouse oocytes was fluorescently stained with various fluorochrome-protein conjugates following ovulation into the oviducts or upon their expossure to oviductal extracts. Furthermore, it was also found that cattle or pig oviductal fluid gave similar results when examined using mouse ghost ZP. These observations lead to suggest that mammalian oviduct induces changes of biochemical properties of oocytes. Further studies are needed to clarify the nature of oviductal factor(s) and the physiological meaning of the reaction.

• 한국가축번식학회지
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• 제18권3호
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• pp.191-197
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• 1994

광수용기에서 특이적 발현을 유도하는 로돕신 유전자에 존재하는 다양한 점 돌연변이 의해서 일반적으로 색소성 망막염을 초래한다. 이 질병의 측징은 광수용기 세포의 퇴화로 인한 광수용기의 기능상실을 초래하고, 결과적으로 시각상실을 유발한다. 로돕신 유전자는 광수용기의 바깥분절에 존재하며, 빛 에너지를 흡수하여, 시각반응을 야기한다. 본 실험에 사용된 로돕신 유전자는 총 12.5kb의 돼지 로돕신 게놈 유전자로서, 망막에서 특이발현을 유도하는 4kb의 프로모터, 돌연변이를 지닌 5.6kb의 유전자, 그리고 poly A site로 구성되어 있다. 호르몬 투여에 의해 과배란이 유기된 C57BL/6J 생쥐 난자의 웅성전핵에 미세주입법에 의해 도입한 후, 위임신한 생쥐의 난관에 이식하였다. 그 결과 태어난 산자로부터 돌연변이 로돕신 유전자를 지닌 6마리의 형질전환동물을 PCR과 Southern blot analysis를 통하여 확인할 수 있었다. 또한, 이 형질전환 동물들은 로돕신 유전자를 그 자손에게 안정적으로 전달하는 것을 확인하였다. 본 연구는 광수용기 퇴화의 원인규명 및 치료방법을 연구하기 위하여 돌연변이를 지닌 질환모델동물을 생산하는데 있다. 이들 형질전환 동물은 로돕신 유전자의 돌연변이에 의해 야기되는 시각상실의 기전에 관한 연구와 사람의 장님을 치료하기 위한 질환모델동물로서 유용하게 이용될 것이다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제20권1호
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• pp.31-36
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• 1993

The effects of freezing and 1,2-propanediol on early and late pronucleate stage mouse ova were investigated in terms of survival after thawing and development in vitro. The samples were divided into two groups according to different age in pronucleate ova: ova in(1) early pronuclear stage with two distant pronuclei at 18h after hCG injection, and (2) late pronuclear stage with adjacent pronuclei at 30h. Zygotes in the late pronuclear stage have been proven to be more resistant to 1,2-propanediol, showing a significantly higher developmental rate than zygotes in early stage (80.3 versus 66.3%, <0.05), but survival rate was similar in the two groups (91.0 versus 93.5%). After freezing and thawing, survival and developmental rates were decreased in both groups when compared to the control group (54.3 versus 92.3%, 47.7 versus 73.3%. respectively). And developmental rate in the late pronuclear stage zygotes showed significantly higher than in early (55.4 versus 40.0%) after thawing. In conclusion, early pronucleate mouse ova have a lower developmental capacity in vitro and a lower survival rate after freezing and thawing than late ova. These findings suggest that the timing of freezing could be important for survival and further development in vitro in cryopreservation of human pronucleate ova.