흰쥐 간세포에 존재하는 비소결합물질의 특성을 조사하기 위하여 4 ppm의 비소를 포함하는 NaASO$_2$수용액의 식수로 15일간 흰쥐에 공급하였다. 비소처리군의 간 cytosol분획의 정상단백 질의 함량은 감소하였으나 8종류의 stress protein의 함량은 증가하였다. Cytosol에 존재하는 비소결합체물질은 한 종류이고,glycine, glutamic acid 및 cysteine의 3종류의 아미노산으로 구성되어있으며 분자량은 500D이었다.Glutathione은 비소와 5:1의 몰비로 결합하였으며 glutathione과 비소의 복합체는 gel filtration chromatography에서 비소결합물질과 같은 이동성을 나타내어 cytosol에 존재하는 미소결합물질은 glutathione으로 추정되었다. Glutathione에 결합한 비소는 미토콘드리아의 호흡, 형태전환 및 팽윤과 수축기능에 있어서 대조군과 별다른 차이를 나타내지 않았다. 이와 같은 결과들로써, 생체에 직접 처리한 비소에 의하여 stress protein합성이 촉진되며, 간 cytosol에 존재하는 비소결합물질은 glutathione으로 추정되고, 비소와 복합체를 형성함으로써 비소의 세포독성에 대한 방어기능을 나타내는 것으로 생각된다.
There is a marked increase in geriatric disease, especially liver disease, due to the continuous increase in alcohol and fat consumption. Since the fatty liver, induced by alcohol or fat, is basically from abnormalities in the lipid metabolism, it is possible that fatty acid binding protein(FABP) which is related to the fatty acid metabolism may also be abnormal in these livers. FABP is a small molecular weight protein family present in cytosol in high concentration. It has been proposed as a fatty acid transfer protein and as a binding protein responsible for controlling intracellular free fatty acid concentration. In this research, we have examined the relationship between liver FABP and fatty liver induced by alcohol or high cholesterol diet. Rats were fed one of either semipurified liquid diets; control diet containing 65% carbohydrate, 20% protein, and 15% fat or high cholesterol diet containing 1%(w/w) cholesterol or alcohol diet containing 37% of alcohol instead of carbohydrate. After 5 weeks of feeding period, all rats received commercial chow diet for 5 weeks to examine recovery effect. Liver and blood samples were collected at 0, 1, 3, 5 and 10 weeks to analyze lipid compositions. FABP was purified from liver cytosol and injected to rabbit to obtain antiserum. Liver FABP amount was determined by SDS-PAGE and western blotting methods. Fatty acid binding capacity was determined by binding of 14Cpalmitate with the delipidated liver cytosol. Consumption of alcohol increased serum cholesterol, triglyceride concentration and decreased HDL-cholesterol concentration after 5 weeks. Serum apolipoprotein B concentration increased after 3 weeks and LDL-cholesterol and apolipoprotein A concentration changed after 1 week. Liver cholesterol and triglyceride concentration increased after 3 weeks. Consumption of high cholesterol diet changed liver and serum lipid composition after 3 weeks. Swiching to normal diet for 5 weeks did not normalize most of lipid composition in serum and liver except serum and liver except serum cholesterol, triglyceride and liver cholesterol. Liver cytosol FABP content and the fatty acid binding capacity decreased dramatically after 1 week with alcohol consumption. This results indicate that FABP content changes before the changes before the changes of blood or liver lipid composition, suggesting changes of FABP may cause development of the fatty liver induced by alcohol and can be used as an index of detecting a early development of fatty liver.
This study was designed to investigate the effects of mulberry (Morus alba L.) leaf extract (MLE) on oxygen radicals and their scavenger enzymes in liver membranes of rats. Sprague-Dawley (SD) male rats (160$\pm$10 g) were fed basic diet (control group), and experimental diets (MLE-100 and MLE-300 groups) added 100 and 300 mg/kg BW/day for 6 weeks. Hydroxyl radical (.OH) levels resulted in a significant decreases (15.2% and 18.1%, 5.6% and 8.0%, respectively) in liver mitochondria and microsomes could be not obtained. These are no significant differences in superoxide radical ($O_2$) levels of liver cytosol in MLE-100 and MLE-300 groups compared with control group. Lipid peroxide (LPO) levels were slightly decreased about 13.6% and 6.1% in liver mitochondria and microsomes of MLE-300 group compared with control group. Oxidized protein (OP) levels were remarkably decreased about 16.9% and 27.2% in liver microsomes only of MLE-100 and MLE-300 group compared with control group. Mn-SOD activities in liver mitochondria were remarkably increased (18.2% and 28.7%, respectively) in MLE-100 and MLE-300 groups, and Cu,Zn-SOD activities in liver cytosol were also significantly increased (11.3% and 20.2%, respectively) in MLE-100 and MLE-300 groups compared with control group. Mn-SOD activities in liver mitochondria were remarkably increased (18.2% and 28.7%, respectively) in MLE-100 and MLE-300 groups, and Cu,Zn-SOD activities in liver cytosol were also significantly increased (11.3% and 20.2%, respectively) in MLE-100 and MLE-300 groups compared with control group, but significant difference between GSHPx activities in liver cytosol could be not obtained. These results suggest that anti-aging effect of mulberry leaf extract (MLE) may play a pivotal role in attenuating a various age-related changes.
0.5 mg of natural ginsenoside mixture and 0.8 $\mu$Ci of synthesized 14C-ginsenosides were administered orally to a rat and killed at one hour after the ginsenoside administration and the liver was fractionated into nuclear fraction, mitrochondria microsomes and cytosol fraction. Radioactivity distribu lion in subcellular fractions of the liver showed that 32o1c of total radioactivity absorbed in the liver was in cytosol fraction but a significant portion of the radioactivity was also found in mitochondria (26.6%) and microsomal fraction (18.l%). 5.8% of the total radioactivity was recovered from the nuclear fraction as well. This suggested that ginsenosides might be distributed into all subcellular fractions. Activities of mitochondrial aldehyde dehydrogenase, lactate dehydrogenase and malate dehydrogenase of the liver of rat at two hours after the ginsenoside administraion were found appreciably stimulated, suggesting that the ginsenoside concentration in the liver might be around 10-5%, since optimum concentrations for most enzyme catalyzed reactions in vitro were known to be 10-6% 10-4%. A significant portion of the radioactivity recovered from subcellular fractions of the liver was found in protein fractions, suggesting that proteins might interact with ginsenosides. Examination of protein-ginsenoside interation by gel filtration, equilibrium dialysis and amonium sulfate precipitation technique suggesting that proteins and ginsenosides do not bound covalently but weakl\ulcorner combined. When purified ginsenoside Rbl and Rgl were incubated with rat liver cytosolic enzymes for 20 min, the above ginsenosides were hydrolyzed quickly, suggesting that ginsenosides might be rapidly hydrolyzed and metabolized in the liver. It was also observed in vitro that the ginsenosides such as Rbl and Rgl were easily hydrolyzed by rat liver cytosol preparation suggesting that absorbed ginsenosides might be quickly hydrolyzed and metabolized in the liver.
To estalish bio-indices for detection of the development of multistep hepatotumorigenesis, rats were fed water containing 0.01% diethylnitrosamine (DEN) ad libitum for 13-14 weeks. Hepatocellular carcinoma was developed by treatment with DEN, DEN only was able to induce hepatic tumors in rats without any other cocarcinogen. Compared to control group, liver cytosol protein concentration in all treated grous was significantly decreased (p<0.05). From week to week, $20{\alpha}$-hydroxysteroid dehydrogenase ($20{\alpha}$-HSD) activity was increased and the highest activity was observed on the 12th week (p<0.05). In addition, the urine biopterin concentration was also significantly increased compared to control groups (p<0.05) in a time course manner. These results indicated that $20{\alpha}$-HSD activity, urine biopterin and liver cytosol protein concentration might be very useful maker to hepatic tumorigenesis.
This study was designed to investigate the effect of silk fibroin (Mw 500)power (SFP) on oxygen radicals and their scavenger enzymes in liver membranes of rats. Sprague-Dawley (SD) male rats (160$\pm$10 g) were fed basic diet (control group), and experimental diets (SFP-2.5 and SFP-5.0 groups) added 2.5 and 5.0 g/kg BW/day for 6 weeks. Hydroxyl radical (.OH) levels resulted in a considerable decreases (5.8% and 8.4%, 3.7% and 11.1%, respectively) in liver motochondria and micorsomes of SFP-2.5 and SFP-5.0 groups compared with control group, and $O_2$radical level was remarkably decreased about 15% and 20% in liver cytosol of SFP-2.5 and SFP-5.0 groups compared with control group. Lipid peroxide (LPO) levels were significantly decreased (8.3% and 18.0%, 13.4% and 18.4%, respectively) in liver mitochondria and microsomes of SFP-2.5 and SFP-5.0 groups compared with control group. Oxidized protein (OP) levels were remarkably decreased about 11.6% in liver mitochondria of SFP-5.0 group compared with control group. Mn-SOD activities were remarkably in creased (17.6% and 28.8%, respectively) in mitochondria of SFP-2.5 and SFP-5.0 groups, and Cu/Zn-SOD activities were also effectively in creased (about 14.4%) in liver cytosol of SFP-5.0 groups, but significant difference between GSHPx activity in liver cytosol of these two groups could be not obtained. These results suggest that anti-aging effect of silk fibroin may play an effective anti-aging role in a aattenuating a oxidative stress and increasing a scavenger enzyme activity in liver membranes.
식이성 단백질 함량이 toluene에 의한 간 손상에 어떠한 영 향을 미치는지를 검토할 목적으로 흰쥐를 저 단백식이 (casein 7%, LP) 및 고단백식이 (casein 20%, SP)로 성장시킨 후 체중 100g당 toluene과 olive oil의 동량흔액 0.2ml를 1일 1회 4번 투여한 다음 24시간 후 처치하였다. 체중 100g당 간무게는 SP군이 대조군에 비하여 약 28%, LP군은 약 17%의 유의한 증가를 보였으며 혈청 xanthine oxidase(XO)활성은 SP군에서는 약 35%의 유의한 증가를 나타내었으나 LP군에서도 증가되었으나 유의성은 없었다. 한편 toluene투여로 인한 간 glycogen, glutathione(GSH) 함량 감소율에 있어서는 SP군이 LP군 보다 높게 나타났으며 간세포의 대조군에 대한 cytosol, mitochondria 단백함량 감소율 역시 SP군이 LP군 보다 증가되는 경향을 보였다. 그리고 병리조직검사 소견에서는 SP군에서 swelling 정도가 LP군에 비하여 심화되어 나타남을 알 수 있었다.
This study was designed to investigate the effects of silkworm (Bombyx mori L.) powder (SWP) on oxygen radicals and their scavenger enzymes in liver membranes of rats. Sprague-Dawley(SD) male rats(160$\pm$10g) were fed basic diet (control group), and experimental diets(SWP-200 and SWP-400 groups) added 200 and 400 mg/kg BW/day for 6 weeks. Hydroxyl radical (.OH) levels resulted in a consistent decreases (4.0% and 7.2%, 5.0% and 14.1%, respectively) in liver mitochondria and microsomes of SWP-200 SWP-400 groups compared with control group, and O2 radical level was significantly decreased about 12% in liver cytosol of SWP-400 group compared with control group. Lipid peroxide(LPO) levels were significantly decreased (14.4% and 9.1%, respectively) in liver mitochondria and microsomes of SWP-400 group only compared with control group. Oxidized protein (OP) levels were remarkably decreased about 12.7% and 16.3% in liver microsomes only of SWP-200 and SWP-400 groups, but significant difference between liver mitochondria could not obtained. Mn-SOD activities were remarkably increased (15.8% and 25.2%, respectively) in mitochondria of SWP-200 and SWP-400 groups, but significant difference between Cu, Zn-SOD activities in these group could be not obtained. GSHPx activity was significantly increased in liver cytosol of SWP-400 group compared with control group. These results suggest that silkworm powder may play an effective role in a attenuating a oxidative stress and increasing a scavenger enzyme activity in liver membranes.
Protein carboxyl Ο-methylation is a kind of enzymatic reaction producing carboxyl methylester catalyzed by protein carboxyl Ο-methyltransferases at the carboxyl group of amino acid residues in polypeptide. Since the finding of carboxyl methylesterl many studies have been focused on the under-standing of biological functions in eukaryotes but still not clear except for roles in Ras attachment to membrane and protein repair. In this study, we investigated the protein carboxyl methylation in porcine liver and testis in respect of identification and characterization of carboxyl methylesters and natural proteinous substrates using pH stability of the esters and electrophoresis under acidic and basic conditions. We detected several kinds of methyl esters, 3 kinds each in cytosolic fractions from liver and testis. Under the treatment of strong acid and base, the ratio between base-stable substrates and unstable ones in liver (4 : 6) was different from the ratio obtained in testis (6 : 4). The methyl accepting capacities were affected by enzymatic proteolysis between the range of 55 to 65% in liver and of 35 to 45% in testis. Separation of the methylated proteins by acidic electrophoresis in the presence of urea and SDS revealed distinctively natural substrates of 26, 33 and 80 kD in the cytosol from liver and of 14, 25, 32 and 86 kD from testis. Most of the labelling, however were lost following electrophoresis under moderate alkaline condition, except for molecules of newly detected 7 and 17 kD in livers and 15, 29, 40 and 80 kD in testis. From these results, it was proposed that protein carboxyl Ο-methylation in each organs may be catalyzed by different classes of protein carboxyl Ο-methyltransferases. In addition, it is suggested that the protein carboxyl methylation in liver and testis may have different patterns in respect of natural substrates.
This study was performed to investigate the effect of dietary protein and calcium levels on cadmium detoxication in rats. Seventy male Sprague-Dawley rats weighing 208 $\pm$ 19 g were blocked into 10 groups of 7 animals according to body weight. Five groups were fed 15% protein-0.6% calcium diet with 100ppm cadmium in drinking water for first 15days and the other 5groups fed same diet without cadmium in drinking water for same period and served as controls. After this 15-day intoxication period, each one of cadmium intoxication and control groups were fed each of 4 kinds of detoxifying diets different with protein(40%, 15%) and calcium(1.3%, 0.6%) levels without cadmimum in drinking water for following 15 days of detoxifying period. Results were summarized as follows: 1) Food intake, body weight gain, F.E.R. and weights of liver, kidney and femur were increased by detoxifying diets and high protein diet was most effective in weight gains of liver and kidney. 2) When cadmium and metallothionein contents of initial intoxication group and those of all detoxication groups were compared, cadmium and metallothionein contents in the liver were not changed, but those in kidney increased, and those in intestine decreased markedly. 3) Only dietary protein level affected cadmium and metallothionein distribution among organs, and cadmium contents of whole blood, liver, kidney and femur were lower in high protein diet, but metallothionein contents in liver and kidney were higher in high protein diet. 4) Gel filtration chromatogram showed that most of cadmium in the cytosol was bound to metallothionein fractions in high protein-high calcium group. Results obtained indicated that high protein diet was effective in cadmium detoxication by increasing the induction of metallothionein synthesis. But high calcium diet did not play a role in cadmium detoxication.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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