본 연구에서는 유채박 섬유질을 고부가가치로 활용하기에 앞서 적합한 화학적 전처리 조건을 찾고자, 산 및 알칼리 촉매로 다양한 조건 하에 처리한 후, 각 인자들에 따른 유채박의 분해율 및 유리당 함량을 측정하였다. 유채박은 $H_2SO_4$, HCl, NaOH 촉매 중 HCl 촉매 하에서 가장 효과적으로 분해되었으며, 특히 1%의 촉매 농도에서 높은 분해율을 보였다. 반면 $H_2SO_4$, HCl 촉매 하에서 유채박 투입량이 낮을수록 분해율이 증가하였으나, NaOH 촉매 하에서는 유채박 투입량에 따른 분해율 차이가 거의 관찰되지 않았다. 분해 후 측정된 총 유리당 함량은 HCl를 처리한 경우가 가장 높았으며, 유채박 투입량이 증가함에 따라 총 유리당 함량이 감소하였으나 이에 따른 영향은 미미했다. 또한 2% 촉매에서 총 유리당 함량이 높았으나 HCl 촉매의 경우 1%일 때가 다른 처리 조건들보다 총 유리당 함량이 높았다. 각각의 유리당으로는 $H_2SO_4$, HCl 촉매 하에서 glucose, galactose, arabinose, fructose가 주로 분리되었으며 NaOH 촉매 하에서는 대부분 sucrose가 분리되었다. 촉매 농도가 증가함에 따라 glucose, galactose 함량은 증가하였고, fructose 함량은 감소하였으며, 거의 모든 유리당에서 유채박 투입량이 증가함에 따라 그 함량이 감소하였다. 상기 결과를 종합해 보면 총 유리당은 유채박을 1% HCl를 사용하여 2 g/100 mL의 비율로 화학적 처리하는 것이 본 연구 범위 내에서 총 당을 분리해내는데 가장 우수한 것으로 조사되었으며 glucose, galactose는 2% HCl-0.5 g/100 mL, fructose는 0.5% $H_2SO_4$-0.5 g/100 mL 조건에서 효율적인 분리가 이루어짐을 확인하였다. 따라서 목표하는 당에 따라 적합한 촉매, 촉매 농도, 시료 투입량을 조절하여 분리해낼 수 있을 것으로 생각한다. 현재 분리되어 나온 당을 바탕으로 기능성 당 및 수용성 식이섬유를 얻는 연구를 수행하고 있으며, 실질적으로 대량의 당들을 순도 높게 얻기 위해서는 처리 규모(시료양, 촉매)를 늘리거나 각각의 당들을 효과적으로 정제하는 연구도 필요할 것으로 생각한다.
MFGM 당단백질의 하나인 PAS-7을 GPC 및 affinity chromatography에 의해 정제하여 2-AB로 형광 표식한 후, anion-exchange column 및 reversed-phase column을 이용해 5개의 성분을 분리하였다. 그 중 가장 상대량이 많은 성분 e에 대하여 RAAM2000을 이용한 당쇄구조 해석을 실시하여, 성분 e는 RAAM2000 GPC에 의하여 4개의 성분으로 분리되어 각각 calibration standard 12.10, 8.88, 5.84 및 4.86GU의 용출위치에 검출되었다. 이 용출위치와 당쇄구조는 livrary의 component-7457과 일치하며, 12.2GU의 크기로 분자량은 1788로 판단되며 library의 당쇄와 약 85%의 확률로 일치했다. 그 결과 성분 e의 당쇄구조는 환원말단에 $\alpha$1-6결합된 fucose를 1개 함유하며, core부분의 비환원말단에 N-acetyllactosamine branch를 2개 함유한 전형적인 biantennary 당쇄구조인 것으로 추축되어, 이전 HPLC, acetolysis, sequential exoglycosidase 소화, NMR분석에 의해 보고된 성분 7N1A의 구조와 일치함으로써, OGS RAAM2000을 이용한 PAS-7의 당쇄구조 해석의 유용성이 증명되었다.
We here analyzed and proposed the structures of the N-linked sugar chains of PAS-7 from bovine milk fat globule membrane. The N-linked sugar chains were liberated from PAS-7 by hydrazinolysis and, after modifying the reducing ends with 2-aminopyridine (PA), were separated into one neutral (7N,55%) and two acidic (7M mono-, 43%; 7D, di-, 2%) sugar chain roups. The latter were converted into neutral groups (7MN and 7DN) by sialidase digestion. The structure of each of these PA-neutral sugar chains was determined by sugar analysis, sequential exoglycosidase digestion, partial acetolysis, and 1H-NMR spectroscopy. The results show that the 10 sugar chains were of the biantennary complex type with and without fucose. The structure of 7N2A one of the major sugar chains, was proposed as; [structure: see text] A structural comparison between PAS-6 and -7 indicated that although they shared the same protein core, their sugar moiety was markedly different, involving the existence of a different pathway during the post-transcriptional modification.
비지의 발효조건을 확립하여 비지의 발효에 관여하는 주요 미생물 두 균주를 분리, 동정하였으며 또한 발효과정중 유리 아미노산의 함량, 핵산관련물질의 함량, 환원당 및 소당류의 함량 변화를 조사하였다. 비지의 발효조건은 $55^{\circ}C$에서 48시간 발효시킨 비지가 재래식으로 발효시킨 비지와 가장 유사하였다. 발효과정중 pH는 서서히 증가하였으며 비지의 발효에 관여하는 주요 미생물군은 Bacillus subtilis와 Bacillus lichemiformis로 동정되었다. 비지의 발효과정중 수분 함량은 48시간 발효 후에는 80.8%에서 58.4%로 감소하였으나 다른 일반성분은 거의 변화가 없었다. 총 유리 아미노산 함량은 발효과정을 통하여 급격히 증가하였다. 또한 발효된 비지에 있어서 유리 아미노산의 종류 및 양도 증가하였는 데 Phe>Lys>His>Tyr>Glu>Asp 의 순서로 증가하였다. 핵산관련물질의 변화에 있어서 처음 36시간 동안은 거의 변화가 없다가 48시간 발효 후에는 1/6배로 감소하였으며 5'-IMP와 5'-GMP 혼합구는 처음 36시간 동안은 서서히 증가하다가 48시간 발효 후에는 약 3.5배로 증가하였다. 한편 환원당 함량은 비지의 발효과정중 계속 증가하였으며 stachyose 및 raffinose 혼합구는 미량이기는 하나 점차 감소하였다. 이로부터 비지의 발효과정중 5'-IMP와 5'-GMP의 증가는 유리 아미노산 및 환원당의 증가와 함께 발효된 비지의 맛성분에 영향을 주는 중요한 요인이라 생각되며 발호된 비지를 메주제조시 혼합하여 콩의 대체 원료로 이용하는 것에 대한 연구가 필요하다고 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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