• Reproductive and Developmental Biology
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• 제35권1호
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• pp.67-75
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• 2011

The faulty regulation of imprinting gene lead to the abnormal development of reconstructed embryo after nuclear transfer. However, the correlation between the imprinting status of donor cell and preimplantation stage of embryo development is not yet clear. In this study, to determine this correlation, we used the porcine spermatogonial stem cell (pSSC) and fetal fibroblast (pFF) as donor cells. As the results, the isolated cells with laminin matrix selection strongly expressed the GFR ${\alpha}$-1 and PLZF genes of SSCs specific markers. The pSSCs were maintained to 12 passages and positive for the pluripotent marker including OCT4, SSEA1 and NANOG. The methylation analysis of H19 DMR of pSSCs revealed that the zinc finger protein binding sites CTCF3 of H19 DMRs displayed an androgenic imprinting pattern (92.7%). Also, to investigate the reprogramming potential of pSSCs as donor cell, we compared the development rate and methylation status of H19 gene between the reconstructed embryos from pFF and pSSC. This result showed no significant differences of the development rate between the pFFs ($11.2{\pm}0.8%$) and SSCs ($13.3{\pm}1.1%$). However, interestingly, while the CTCF3 methylation status of pFF-NT blastocyst was decreased (36.3%), and the CTCF3 methylation status of pSSC-NT blastocyst was maintained. Therefore, this result suggested that the genomic imprinting status of pSSCs is more effective than that of normal somatic cells for the normal development because the maintenance of imprinting pattern is very important in early embryo stage.

• KSBB Journal
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• 제10권5호
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• pp.525-532
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• 1995

키토산 유도체 인 sulfated N→acetyl chitosan을 합성하여 이 화합물을 쥐에 이식한 B16/BL6 mela noma에 대하여 폐암전이의 억제효과를 조사하였다. 키토산의 황산유도체는 13C-n.m.r.에 의하여 확인한 결과 3, 6, O-disulfate 엄을 알 수 있었다. SuI fated N-acetyl chitosan을 100mg/kg을 투여하였을 때 B16/BL6의 melanoma cells을 가장 효과적 으로 억제하였고 종양 무게의 증식도 대조군에 비해 억제되었다. 폐암의 전이에 있어서 B16/BL6에 sulfated N-acetyl chitosan을 LV. V로 주사하였을 때 B16/BL6의 melanoma의 전이 세포의 수는 자발적인 전이에 있어서도 용량 의존형(20 ~ 1OOmg/kg) 에 따라 줄어들었다. B16/BL6을 접종한 후 sulfated N-acetyl chitosan을 I.V.로 투여했을 때 전이세 포의 수는 현저히 감소하였다. Sulfated N-acetyl chitosan은 laminin의 종양세포에의 세포접착 능력을 부분적으로 억제하였다. 이와 같은 결과는 chitosan의 유도체인 sulfated N-acetyl chitosan이 세포접착 능력이 실험적으로 자발적인 암전이 모델에 효과적으로 작용하였다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제19권4호
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• pp.357-363
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• 2015

The purpose of this study was to compare the inhibitory effect of bevacizumab on human Tenon's fibroblasts (HTFs) cultured from primary and recurrent pterygium. Cultured HTFs were exposed to 2.0, 5.0, 7.5, and 15.0 mg/mL concentration of bevacizumab for 24 hours. The 3-[4,5-dimethylthiazol- 2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide and lactate dehydrogenase leakage assays were then performed to assess fibroblast metabolism and viability. The matrix metalloproteinase (MMP), procollagen type I C terminal propeptide (PIP), and laminin immunoassays were performed to examine extracellular matrix production. Changes in cellular morphology were examined by phase-contrast and transmission electron microscopy. Both metabolic activity and viability of primary and recurrent pterygium HTFs were inhibited by bevacizumab in a dose-dependent manner, especially at concentrations greater than 7.5 mg/mL. Both types of HTFs had significant decreases in MMP-1, PIP, and laminin levels. Distinctly, the inhibitory effect of bevacizumab on MMP-1 level related with collagenase in primary pterygium HTFs was significantly higher than that of recurrent pterygium. Significant changes in cellular density and morphology both occurred at bevacizumab concentrations greater than 7.5 mg/mL. Only primary pterygium HTFs had a reduction in cellular density at a bevacizumab concentration of 5.0 mg/mL. Bevacizumab inhibits primary and recurrent pterygium HTFs in a dose-dependent manner, especially at concentrations greater than 7.5 mg/mL. As the primary HTFs produces larger amounts of MMP-1 compared to recurrent HTFs, significant reduction in MMP-1 level in primary pterygium HTFs after exposure to bevacizumab is likely to be related to the faster cellular density changes in primary pterygium HTFs.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제42권2호
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• pp.184-205
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• 1995

연구배경: Bleomycin(BLM) 투여로 유발되는 폐손상 및 폐섬유화는 특발성 폐섬유증의 실험적 모델로써 BLM의 폐독성 기전은 산소유리기에 의한 직접 독성과 염증세포, 섬유모세포 및 세포외 기질에 의한 간접 독성으로 나누어 설명하고 있다. 이에 저자는 폐손상의 주요 원인이 되는 산소유리기의 생성과 이미 형성된 산소유리기를 보집할 수 있는 산화방지제들을 투여함으로써, BLM에 의한 폐손상 및 폐섬유화의 발생과 그 억제기전을 이해하고자 본 실험을 시행하였다. 방법: 웅성 백서에 폐손상 및 폐섬유화의 대표적인 실험적 방법인 bleomycin (BLM)을 투여함과 동시에 산화방지제로 구리의 킬레이트제인 penicillamine, 철의 킬레이트제인 deferoxamine과 산소유리기의 보집제인 vitamine E를 투여한 후 그 형태학적 변화를 보기 위해 기관지폐포 세척액 검사, 광학현미경 소견과 세포외 기질인 교원섬유 제 I, III, IV형과 비교원성 기질인 fibronectin과 laminin 그리고 근섬유모세포에 대한 NBD phallicidin에 대한 면역형광염색 및 면역조직화학염색소견을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 결과: 1) 기관지폐포세척액의 검사소견상 총 세포수는 BLM 단독투여군의 경우 제4일에 최고값에 도달한 후 감소하기 시작하여 제28일에 대조군과 비슷해졌지만, penicillamine과 deferoxamine 처치군은 제1일부터 제28일까지 계속 높았으며, vitamin E 처치군은 제3일부터 현저한 차이로 감소하여 제7일부터 대조군과 비슷해졌다. 기관지폐포 세척액의 각 염증세포구성비는 BLM 단독투여군은 초기 즉 제1, 3, 4일에 중성구가 현저히 증가하다가 제7일부터 감소하여 제28일에 대조군과 비슷해졌지만, vitamin E 처치군은 중성구가 제3일부터 BLM 단독투여군의 1/3이하로 현저히 감소하였다. 2) 광학현미경소견은 BLM 단독투여군의 경우 다른 실험군에 비해 섬유화가 가장 심하였고, penicillamine 처치군은 중성구의 침윤이 지속적으로 많았으며, deferoxamine 처치군은 폐포 중격의 림프구 침윤이 뚜렷하였고, vitamin E 처치군은 페포 중격 및 폐포강내 대식세포 증가가 많았다. 이러한 소견은 기관지폐포세척액 소견과 잘 일치하였다. 산화방지제 처치군의 섬유화 소견은 deferoxamine 처치군이 가장 뚜렷하였고, penicillamine 처치군은 적었지만 관찰되었으며, vitamin E 처치군은 거의 없었다. 3) 세포외 기질의 변화로 폐포 간질의 기저막에 양성반응을 나타내는 제 IV형 교원섬유와 laminin 및 Jones' methenamine silver 염색결과는 비슷한 양상이었는데, BLM 단독투여군, penicillamine 처치군과 deferoxamine 처치군은 모두 제28일군에서 음성반응을 나타냈으나, vitamin E 처치군은 제28일까지 대조군과 비슷하게 기저막이 유지되었다. 섬유화 부위에 증가된 세포외 기질은 제 I 형 교원섬유와 fibronectin 이었으며, 제 III 형 교원섬유는 각 국에서 초기에 일시적으로 양성반응을 나타내었다. NBD phallicidin은 BLM 단독투여군에서 특히 제 28일군 육아조직의 방추형세포에 양성반응을 보였다. 결론: Bleomycin 투여에 의한 폐손상 및 폐섬유화 기전은 bleomycin이 구리 또는 철 이온의 존재하에 생성한 산소유리기에 의해 유발될 수도 있으나, 주로 중성구의 활성화로 인한 산소유리기에 의해 유발되고, 폐의 섬유화 제 I 형 교원섬유와 fibronectin의 증가로 초래되었다. 폐손상의 억제는 킬레이트제 보다는 산소유리기의 보집제인 vitamin E 투여시 가장 효과가 있었는데 이것은 초기의 중성구 증가 및 중성구의 활성화 정도에 따라 간질내 폐포의 기저막 유지 및 재생이 가능하고 이것이 폐의 탄력성을 유지시켜 폐손상을 억제할 수 있기 때문으로 사료된다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.206-206
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• 1994

1차년도에 F9 EC cell의 분화유도 시스템을 확립한뒤 계속적으로 해양생물로 부터 분리한 여러가지 물질을 처리하여 세포의 형태 변화 및 분화 관련 유전자 즉 laminin Bl, type IV collagen, RAR-$\beta$ 의 발현을 조사하였다. 그 결과 다수의 물질이 F9 세포를 분화시키는데 효과가 있는 것으로 나타났으며, 효과있는 물질들에 대한 구조분석이 계속적으로 실시되고 있다. 뿐만 아니라 분화효과가 있는 물질중에서 그 구조적으로 특이한 성질을 가진 물질에 대하여 이 물질이 암세호의 분화에 미치는 기작에 대해 조사하였다. 구체적인 실험내용을 요약하면 다음과 같다. 1. F9 EC cell에 스크리링할 물질의 처리 후 형태 변화 관찰 2. 분화 maker 유전자의 발현 조사 3, 작용 기작에 대한 조사

• 동의생리병리학회지
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• 제18권2호
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• pp.496-499
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• 2004

We have previously observed that Bambusae Caul is in Liquamen (BCL) stimulates the adipose conversion of 3T3-L1 cells and molecular chaperones were involved in the process of the assembly and replacement of laminin subunits in Bovine aortic endothelial cells(BAEC). Endothelial cells are exposed to continuous shear stress due to the blood flow. Heat shock protens(hsp) are a well-known stress response protein, namely, stress proteins. To investigate effects of BCL on the stress proteins induced by heating in endothelial cells, we have analyzed synthetic amounts of stress proteins in sodium dodecyl sulfate gel electrophoresis under reducing conditions. Under the condition of heating stress, BCL inhibited the synthesis of stress proteins in endothelial cells. These results suggest that BCL may have an important role for expression of stress proteins induced by heating in endothelial cells.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제9권1호
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• pp.119-121
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• 1999

Tumor cell interaction with the extracellular matrix is defined as the critical event of tumor invasion that signals the initiation of a metastatic cascade. Sesquicillin has been identified as an inhibitor of melanoma cell adhesion to the components of the extracellular matrix (ECM) in cultured broth of fungal strain F60063. Sesquicillin strongly inhibited the adhesion of B16 melanoma cells to laminin, fibronectin, and typeIV collagen. It also inhibited B16 melanoma cell invasion of reconstituted basement membrane Matrigel in vitro in a dose-dependent manner. These results suggest that sesquicillin is a new class of nonpeptidic ECM adhesion inhibitor having anti-invasive activity.

• BMB Reports
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• 제29권1호
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• pp.68-72
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• 1996

Ursodeoxycholic acid (UDCA) and lithocholic acid (LCA), secondary bile acids, have been shown to have a cell differentiation activity in mouse F9 teratocarcinoma stem cells. Treatment with bile acids induced morphological changes, including cytoplasmic and nuclear membrane blebbing, aggregation of organelles, and chromatin condensation, corresponding to apoptosis. Moreover, the bile acids induced intemucleosomal DNA fragmentation, a hallmark of apoptosis. In addition, the expression of c-jun was increased, but that of c-myc and laminin was decreased during apoptosis induced by the bile acids in F9 cells. These results suggest that the bile acids can induce apoptosis in F9 cells. Furthermore, the c-jun expression may be related to the apoptosis induced by UDCA or LCA in F9 cells.

• 한국동물학회지
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• 제37권1호
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• pp.40-48
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• 1994

세포분화에 따른 Small GTP-binding protein의 역할을 밝히기 위하여 Retinoic acid(RA)와 dibutyryl cyclic AMP(dbcAMP)로 분화를 유도한 F9 기형암종세포의 형태적인 변화와 함께 Small GTP-binding protein의 분포를 조사하였다. RA와 dbcAMP를 처리한 세포는 분화유도 5일경(초기 분화 단계)에 분명한 세포의 경계를 보이기 시작하여 7일경(분화 후기 단계)에는 거의 모든 세포가 등근 분화된 형태로 전환되었다. 이 분화과정 동안 세포막에는 많은 microvilli와 lamellopodia 같은 구조물이 나타났다. 아울러 초기 분화 단계에 많은 량의 laminin이 발현되었으며 분화 후기에 microtubule의 재분포가 관찰되었다. 세종류의 Small GTP-binding protein(25 23, 21 KD)이 F9 세포의 막성분과 세포질에서 관찰되었으며 분화가 진행됨에 따라서 세단백질 모두 증가되는 양상을 보였다 이러한 결과는 Small GTP-binding protein이 F9 세포의 분화에 특별한 기능을 가지고 있음을 시사해 주고 있다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제6권2호
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• pp.89-96
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• 2002

성장을 멈추고 있는 원시난포(primordial follicle)에서 난포발달이 개시되어 1차난포(primary follicle)로 발달하는 조절기전은 잘 알려져 있지 않다. 이 초기 난포발달 과정에 관여하는 유전자를 알아내기 위해 suppression subtractive hybridization(SSH)을 사용하였다. 생후 1일과 5일째의 생쥐 난소로부터 얻은 cDNA로 forward와 reverse subtraction을 수행하여 각각 day1과 day5-subtracted cDNA library를 얻었다. 이를 cloning한 결과, 357개 clone의 염기 서열을 BLAST와 RIKEN을 이용해 분석하여 27개의 clone은 novel gene으로 330개의 clone은 데이터 베이스와 일치함을 알았다. 이 중에 기능이 알려진 유전자는 day1에서는 42종, day5에서는 47종이 각각 차이 나게 발현하고 있는 것으로 나타났다. Day1-subtracted cDNA library에서는 GDF8, lats2, septin2, wee1등 4개 유전자를, day5-subtracted cDNA library에서는 HSP84, laminin2, MATER, MTi7, PTP 및 wrn등 6개 유전자를 선택하여 LCM-RT-PCR방법으로 실제로 원시난포와 1차난포에서 차이 나게 발현되고 있는 것을 확인하였다. 본 연구에서 얻은 유전자 발현 양상의 결과는 앞으로 생쥐뿐만 아니라 사람 난소에서 primordial-primary follicle transition에 관여하는 기전을 연구하는데 중요한 정보를 제공할 수 있을 것으로 사료된다.