Purpose: Extended-spectrum ${\beta}$-lactamase-producing bacteria-induced urinary tract infections are increasing and require more potent antibiotics such as carbapenems. We evaluated the clinical significance of extended-spectrum ${\beta}$-lactamase -urinary tract infection in children younger than 5 years to select proper antibiotics and determine prognostic factors. Differences were compared between age groups. Methods: We retrospectively studied 288 patients with their first febrile urinary tract infection when they were younger than 5 years. Patients were divided into extended-spectrum ${\beta}$-lactamase-positive and extended-spectrum ${\beta}$-lactamasenegative urinary tract infection groups. Clinical characteristics and outcomes were compared between the groups; an infant group was separately analyzed (onset age younger than 3 months). Results: Extended-spectrum ${\beta}$-lactamase urinary tract infection occurred in 11 % patients who had more frequent previous hospitalization (P=0.02) and higher recurrence rate (P=0.045). During the antimicrobial susceptibility test, the extended-spectrum ${\beta}$-lactamase-positive urinary tract infection group showed resistance to third-generation cephalosporins; however, 98% patients responded clinically. In the infant group, extended-spectrum ${\beta}$-lactamase-positive urinary tract infection occurred in 13% patients and was associated with a longer pre-onset hospitalization history (P=0.002), higher C-reactive protein level (P=0.04), and higher recurrence rate (P=0.02) than that in the older group. Conclusion: Extended-spectrum ${\beta}$-lactamase urinary tract infection requires more attention because of its higher recurrence rate. The antimicrobial susceptibility test demonstrated resistance to third-generation cephalosporins, but they can be used as first-line empirical antibiotics because of their high clinical response rate. Aminoglycosides can be second-line antibiotics before starting carbapenems when third-generation cephalosporins do not show bactericidal effects for extended-spectrum ${\beta}$-lactamase urinary tract infection.
본 연구에서는 도축장과 도축물에서 plasmid 매개성 광범위 ${\beta}$-lactam (extended spectrum ${\beta}$-lactamase) 분해효소를 생성하는 Klebsiella pneumoniae와Escherichia coli가 분리됨으로서 한국에서는 이들 균주가 임상범위를 넘어 자연계까지 확산되었음을 확인하였다. 디스크 확산 시험, 등전점 수치, 접합시험 등을 통하여 돼지의 분변으로부터 최종 10균주의 접합자를 얻었고 이들의 형별결정은 아미노산서열분석과 기준주와 대조등을 BCM Search Laucncher 및 NCBI blast를 통해 이루어졌다. 광범위 ${\beta}$-lactam 유형은 Klebsiella pneumoniae 8균주가 TEM-52형이었고 2균주 Escherichia coli가 SHV-12형이었다. CMY-1형은 본 연구에서 분리되지 않았다.
A strain SMF14 producing an extracellular $\beta$-lactamase was isolated from soil and identified to be a strain of Streptomyces aureofaciens. $\beta$-Lactamase was purified from the cell free culture broth through batchwise hydroxyapatite adsorption, anion exchange chromatography on DEAE Sephadex A-50, gel filtration on Sephadex G-75, and adsorption chromatography on hydroxyapatite. The molecular mass was estimated to be about 43 kDa by SDS-PAGE. The $\beta$-lactamase had substrate specificity to penicillins and it was inhibited by clavulanic acid, being classified to the group 2a of penicillinase.. The optimal reaction pH and temperature were pH 6.0~7.5 and $50^{\circ}C$. The $K_m, and V_{max}$ values of $\beta$-lactamase for penicillin G were calculated to be 1.72 mM and 5.4$\times$$10^5 \mu M \cdot min^{-1}$, respectively.
In this study, the ${\beta}$-lactamase (VPA0477) gene was used as a new target for the PCR-based detection of Vibrio parahaemolyticus. Primers specific for the ${\beta}$-lactamase (VPA0477) gene of V. parahaemolyticus, were designed and incorporated into a PCR-based assay. The assay was able to specifically detect all of the 191 V. parahaemolyticus strains tested, but did not result in amplification of 39 other Vibrio spp. and non-Vibrio spp. strains tested. The detection limit of the assay was 10 CFU of V. parahaemolyticus RIMD2210633 from pure culture broth. The ${\beta}$-lactamase (VPA0477) gene-based assay developed in this study was sensitive and specific, and has great potential for the accurate detection and identification of V. parahaemolyticus in seawater or seafood samples.
One hundred and twenty seven strains of Gram-negative rods (72 E. coli, 45 Klebsieila pneumoniae, 8 Enterobacter spp. and 2 Pseudomonas aeruginosa) isolated from bovine mastitis were examined for resistance to ampicilin, carbenicillin and cefazolin, ${\beta}$-lactamase activity and transferable ${\beta}$-lactamase plasmids. Stains resistant to ampicillin were 13.9% in E. coli, 93.3% in Klebsiella pneumoniae, 87.5% in Enterobacter. spp. and all in Pseudomonas aeruginosa, Resistance of E. coli, Klebsiella pneumoniae and Enterobacter spp. to ampicillin was due to the ${\beta}$-lactamases, but all Pseudomonas aeruginosa exhibited a high level of the non-enzymic resistance. Transferable plasmid-mediated ${\beta}$-lactamase synthesis was demonstrated in 61.9% of Klebsiella pneumoniae, 50% of E. coli and 42.9% of Enterobacter spp. The same ${\beta}$-lactamase plasmids specified different resistance levels to various ${\beta}$-lactam antibiotics in different recipients.
Cloning of the gene encoding extracellular .betha.-lactamase from Streptomyces sp. SMF13 in a plasmid pIJ702 and expression of the gene in Streptomyces invidans were carried out. Optimal conditions for the formation of protoplasts of S.lividans and the regeneration of the protoplasts were evaluated. Streptomyces sp. SMF-13 was selected as a donor strain of .betha.-lactamase gene and totla DNA of the strain was partially digested with Sau3A I. DNA fragments ranged from 4kb to 10 kb were ligated to pIJ702 AT Bgl II site and then the ligated DNAs were transformed to the protoplasts of S, livivans. The transformation efficiency was $2 *10^{3}$ .$\mu$g DNA for the ligated DNA mixture. One colony among a thousand colonies regenerated showed extracellular .betha.-lactamase and the size of the inserted DNA fragment was estimated to be 3.94 kb. The .betha.-lactamase activity in the culture broth of the recombinant strain was maximum at 3 days culture to be 1.0 unit/ml.
Identification of a soil microorganism strain X-8, producer of ${\beta}$-lactamase inhibitor, based on its morphological, physiological, biochemical and chemotaxonomical characteristics was performed. The strain X-8 was identified as Pseudomonas sp. The beta-lactamase inhibitor produced by this strain was highly achieved in fermentation medium contained glucose 0.5%, urea 0.25%, $K_2HPO_4{\cdot}3H_2O\;0.5%,\;MgSO_4{\cdot}7H_2O\;0.5%,\;FeSO_4{\cdot}7H_2O\;0.01%,\;CuSO_4,\;ZnSO_4,\;MnSO_4\;0.02%$. The beta-lactamase inhibitor was not extracted by organic solvent such as n-butanol and ethyl acetate but remained in aqueous layer. The n-butanol extract showed antimicrobial activity against M. smegmatis. The ${\beta}$-lactamase inhibitor was stable at pH 7.0~8.0 and 4$^{\circ}C$ for 24h. The ${\beta}$-lactamase inhibitor was bound on ion exchanger Diaion WA-30 and HP-20 and eluted with 2N-$NH_4OH$ and acetone, respectively.
$\beta$-lactam계 항생물질에 강한 내성을 가지는 세균 Bacillus subtilis J105는 항생물질 존재 하에서 $\beta$-lactamase를 유도생산하여 내성이 더 강해진다. 배지에 항생물질이 존재하지 않을 때는 내성을 유도하는 $\beta$-lactamase의 생산은 15시간 만에 plateau에 달했다. 그러나 배지 중에 ampicillin(500$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)이 존재할 때는 배양 25시간 만에 효소 생산이 plateau에 달하나 항생물질 비존재시와 비교하면 효소 활성은 약 20배인 2,900 units/$m\ell$나 많이 생산하는 것을 알 수 있었다. 또한, ampicillin 처리한 것과 무처리 균주를 여러 $\beta$-lactam계 항생물질에 적용하여 MIC를 비교해 본 결과 ampicillin 처리 균주의 MIC가 2~27배 가량 높은 것을 알 수 있었다. 이것은 본 균주가 ampicillin 처리함으로서 $\beta$-lactamase 생산을 유도하여 내성을 증가시킨 것으로 사료된다. 본 내성균주는 penicillin뿐만 아니라 cephalosporin계 항생물질에 대해서도 $\beta$-lactamase 생산을 유도하는 것을 알았다. 그 중에서도 300$\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 cloxacillin이 효소생산유도에 가장 최적 농도였다. 항생물질 첨가 시기를 균의 생육시 기별로 조사한 결과 대수증식기가 가장 효과적인 결론을 얻었다. 이상의 결과로 본 내성균주는 다양한 $\beta$-lactam계 항생물질에 의하여 내성이 강하게 유도되는 특이적인 균주임을 시사한다.
Ji, Gil Young;Song, Hyung Geun;Jo, Mi Young;Hong, Seung Bok;Shin, Kyeong Seob
대한의생명과학회지
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제22권2호
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pp.29-36
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2016
Among the several agents causing carbapenem resistance of Acinetobacter baumannii, the most common cause is OXA-23 ${\beta}$-lactamase, which is known to hydrolyze carbapenem. To effectively control dissemination of carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii (CRAB), development of both rapid and easy-to-use detection methods are required. The aim of this study is to develop a novel immunochromatographic assay (ICA) for rapid detection of OXA-23 ${\beta}$-lactamase. Of the seven monoclonal antibodies (mAbs) screened by ELISA, four mAbs (4G6, 4H6, 6G4, 9A4) exhibited high reactivity. Of these four specific antibodies, the combination of 6G4/4G6 showed the greatest reactivity and this combination of mAbs (6G4/4G6 mAbs) was used to develop the OXA-23 ${\beta}$-lactamase ICA. Of 102 A. baumannii isolates tested, the OXA-23 ${\beta}$-lactamase ICA results were consistent with PCR analysis except one false positive and one false negative isolate. The overall sensitivity and specificity were 98.36% and 97.56%, respectively. In conclusion, to the best of our knowledge, we have developed the first specific antibody set to detect OXA-23 ${\beta}$-lactamase using an ICA kit. This novel ICA can be used as a reliable and easy-to-use immunological assay for detection of OXA-23 ${\beta}$-lactamase producing CRAB in clinical laboratories.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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