• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권4호
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• pp.585-591
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• 2001

To compare the p10 promoter activity of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV)K1 and K4, recombinant viruses Bm101-LacZ and Bm104-LacZ with a lacZ gene under the control of each p10 promoter were constructed. The $\beta$-galactosidase activity due to Bm101-LacZ was about 5.5- and 1.1-fold higher than that due to Bm104-LacZ and BmK1-LacZ, respectively. expressing ${\beta}$-galactosidase under the control of a polyhedrin promoter. The recombinant virus BmK1-104LacZ with the same genome structure as Bm101-LacZ, except for a p10 promoter region, produced a similar ${\beta}$-galactosidase activity to that due to Bm104-LacZ and 5.5-fold lower than that due to Bm101-LacZ. The virus yield, expression level of polyhedrin, and polyhedra productivity for each recombinant virus was almost similar. These results suggested that the difference in the expression level of ${\beta}$-galactosidase resulted from a difference in the p10 promoter regions, and that an expression vector using the p10 promoter of BmNPV-K1 could be usefully exploited in the mass production of foreign proteins with silkworm larvae by means of oral ingestion.

• 생명과학회지
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• 제9권1호
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• pp.50-57
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• 1999

STAT들은 다양한 cytokine이나 성장호르몬 등에 의해 활성화되어 핵으로 빠르게 이동되어 유전자 발현을 조절한다. 우리는 D-raf 유전자의 5' 발현조절영역에서 STAT결합부위 염기서열을 발견하였다. 본 연구는 D-raf 유전자발현조절에 있어서 STAT결합부위의 역할을 형질전환 초파리를 사용하여 조사하였다. STAT결합부위에 염기치환돌연변이를 도입시킨 D-raf promoter부분을 P인자 벡터의 IacZ유전자에 융합시킴으로써 리포터 플라스미드 pDraf-STATmut-lacZ를 제작하였다. 이 리포터 플라스미드를 이용하여 얻은 Draf-STATmut-lacZ형질전환 초파리의 lacZ발현을 발생단계별, 조직별로 조사한 결과, 거의 모든 발생단계에서 정상형 Draf-lacZ 형질전환 초파리의 lacZ발현에 비해 크게 감소하였다. 본 연구결과들은 STAT결합배열 부위가 D-raf유전자발현조절에 있어서 중요한 역할을 함을 개체수준에서 증명하고 있다.

• KSBB Journal
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• 제10권1호
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• pp.38-45
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• 1995

Aspergillus oryzae에서 A. nidulans의 glyceral d dehyde-3-phosphate dehydrogenase (gpdA)와 trpC, prmoter의 발현 능력 을 E. coli lacZ gene fusion을 이용하여 비교.분석하였다. A. oryzae 내에서 발현된 E. coli $\beta$galactosidase의 specific activIty를 조사하여 본 결과, gpdA promoter를 가지는 transformant들 에서는 2,000unit/ug of protem 정도의 activity를 보이는 반면, trpC, promater를 가지고 있는 transformant들에서는 10.5~52.3unit/ug of protein 정도의 activity를 보였다. 이 결과로부터 A. oryzae 내에서 A. nidulans의 gpdA promoter가 trpC, promoter에 비해 70 배 정도 더 강한 발현 능력을 보이고 있음을 알 수 있다. Western blot 분석에서도 gpdA promoter를 가지고 있는 transf ormant에서 더 많은 E. coli $\beta$-galactosidase가 발현된 것 을 보여 주고 있다. 또한 southern blot 분석에서는 이러한 강한 발현이 transform된 plasmid의 copy number와 상관 없음을 보여주고 있다.

• 대한의생명과학회지
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• 제12권3호
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• pp.139-143
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• 2006

Jopock (Jpk) has previously been ascertained that induces both bacterial and mammalian cell death. The Escherichia coli cells expressing Glutathion S-transferase (GST) fused Jpk showed elongated phenotype and inhibited cell growth which led eventual cell death. In an attempt to search the genetic suppressor of the lethal protein Jpk in bacterial cells, we constructed a unidirectional protein expression vector inserting tac promoter next to the C-terminus Jpk in pGEX-Jpk. The function of additional tac promoter was confirmed by substituting lac promoter in Plac-TOPO plasmid. The cells harboring plac- TOPO, which regulates $lacZ{\alpha}$ gene expression under lac promoter, formed blue colonies in 5-bromo-4-3 $indolyo-{\beta}-D-galactoside$ (X-gal) plate. When lac promoter was changed to tac promoter, same results were observed. Since the addition of tac promoter did not affect the toxic effect of Jpk, the pGEX-Jpk-ptac could be a useful vector for the screening of suppressor(s) for Jpk, in which GST-Jpk and a putative Jpk-suppressing protein are coexpressing from two unidirectional tac promoters, which response to the same inducer, $isopropyl-{\beta}-D-thiogalactopyranoside (IPTG)$.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제53권1호
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• pp.1-7
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• 2010

xylA 프로모터는 대장균의 xylose 대사에 관여하는 xylose 오페론 상의 중요한 프로모터이다. 이 프로모터는 xylose에 의해 강하게 조절을 받는다고 알려져 있다. 이러한 특징은 새로운 발현 백터를 구축하는데 충분한 조건을 갖추고 있다고 생각된다. 본 연구에서는 이러한 xylose에 의해 유도 되는 발현벡터를 구축하기 위하여 600 bp의 xylA 프로모터를 증폭하여 pUC18의 AatII와 HindIII 사이에 삽입하여 pXA600을 구축하였다. 또한 조절단백질인 XylR의 영향을 조사하기 위하여 xylR 유전자를 삽입하여 pXAR600을 구축하였다. 발현의 강도를 측정하기 위하여 3,048 bp의 lacZ유전자를 xylA 프로모터의 하류에 연결하여 pXA600-lacZ와 pXAR600-lacZ를 구축하고 대장균 JM109에 형질전환시켰다. 구축된 pXA600-lacZ와 pXAR600-lacZ는 LB 배지에서 배양하였을 때 xylose 유도하에서 각각 1,641 unit와 2,304 unit의 $\beta$-galactosidase 활성을 보였으며, DM 배지상에서 배양했을 때 xylose 유도 시 각각 6,282 unit와 9,320 unit의 $\beta$-galactosidase 활성을 보였다. 또한 왜래 유전자의 발현 가능성을 확인하기 위하여 S. thermocyaneoviolaceus의 내열성 xylanase를 코딩하는 xynA 유전자를 실제로 구축된 pXA600과 pXAR600에서 발현을 확인하여 pXA600 및 pXAR600이 새로운 xylose 유도성 발현벡터로서의 사용 가능성을 확인하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권1호
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• pp.7-12
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• 1995

본 연구는 lacZ' 유전자의 promoter 개발을 위하여 착수하였다. lacZ' 유전자의 heterologous promoter I과 II를 효모 염색체의 Bam HI DNA 단편에서 분리하였다. Promoter I의 크기는 2.5 Kb 정도이고 ${\beta}-galactosidase$ 활성은 124.6 U/mg protein이었으며 promoter II의 크기와 효소활성은 4.0 Kb와 168.8 U/mg이었다. 형질 전환체에서의 YEp plasmid 안정성은 52.7%에서 67.4% 정도였다. YEp plasmid로부터 YIp plasmid를 재조합하였으며 이 YIp plasmid는 대장균에서나 효모에서도 발현되었다. 효모로부터 분리한 promoter I과 II는 재조합된 YEp와 YIp plasmid의 promoter로서 이용 가능하였다.

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 대한불임학회 2006년도 The 5th Biannual Meeting of Pacific Rim Society for Fertility and Sterility
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• pp.176.2-176.2
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• 2006

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권2호
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• pp.334-337
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• 2008

A tightly regulated gene expression system composed of a single-copy target gene under the control of a lac promoter derivative and lacI gene in a multicopy plasmid is proposed, and its ability to control the flux of a metabolic pathway is demonstrated. A model system to control the flux of acetyl-CoA to acetyl phosphate was constructed by integrating pta, a gene encoding phosphotransacetylase, under a tac promoter into the chromosome of E. coli with a pta-negative background and transforming a multicopy plasmid containing the $lacI^Q$ gene into the strain. The production rate of acetate was shown to be tightly controlled when varying the concentration of the inducer (IPTG) in he model system.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제8권5호
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• pp.449-454
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• 1995

The present study was conducted to assess gene expression of bacterial lacZ driven by the SV40 promoter at early developmental stages of bovine embryos. The lacZ gene was linearized with BamHI digestion and introduced into the pronucleus by microinjection at 20 hrs after the commencement of in vitro fertilization. Intact bovine blastocysts were not stained with X-Gal, suggesting that there is no endogenous beta-galactosidase activity in these blastocysts. In contrast, the bovine blastocyst cells microinjected with the lacZ gene exerted a characteristic greenish-blue color originating from the bacterial beta-galactosidase activity, albeit at a low rate, i.e. 2.1% of the total fertilized oocytes injected. It was concluded, therefore, that the lacZ gene driven by the SV40 promoter could be used for an indirect screening method in which the presence of transgene is evaluated from the product of transgene expression.

• Journal of Microbiology
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• 제40권3호
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• pp.205-210
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• 2002

To study interactions between $C_{4}$-dicarboxylic acid transport protein D and E$\sigma$$^{54}$ in the dctA promoter regulatory region, we used the challenge phage system. An ant＇-｀lac fusion was recombined onto the challenge phage, and this ant＇-｀lac fusion along with Pant and the R. meliloti dctA promoter regulatory region were cloned onto a plasmid. The plasmid bearing the ant＇-｀lac fusion was used as a reporter plasmid in a coupled transcription-translation system. Addition of purified $\sigma$$^{54}$ to the coupled system specifically repressed transcription of the plasmid-borne ant＇-｀lac fusion. When DCTD was added along with $\sigma$$^{54}$ to the coupled system, transcription of the ant＇-｀lac fusion was even further repressed, suggesting that DCTD may stabilize closed complexes between E$\sigma$$^{54}$ and the dctA promoter.