A liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was developed and validated for the determination of caffeine in forensic aqueous sample. The centrifuged sample ($100{\mu}l$) was diluted 50-fold with distilled water. The diluted sample ($400{\mu}l$) was then diluted further with $200{\mu}l$ of 0.1% formic acid solution and $400{\mu}l$ of acetonitrile containing 500 ng of caffeine-(3-methyl-$^{13}C_3$) prior to LC-MS/MS analysis. The mobile phase was composed of 0.1% formic acid in distilled water (A) and acetonitrile (B). Chromatographic separation was performed by using a Zorbax SB-C18 ($100mm{\times}2.1mm$ i.d., $3.5{\mu}m$) column and caffeine was eluted within 1.1 min. Linear least-squares regression with a 1/x weighting factor was used to generate a calibration curve with the coefficients of determination ($r^2=0.9983$). The lower limit of quantification was $25ng/ml$ for the analyte. The process efficiency was 98.6~100.1%. Intra- and inter-day precisions were not more than 2.1% and 1.7%, while intra- and inter-day accuracies were ranged from -6.8 to 4.5%, respectively. The suitability of the method was examined by analyzing unknown forensic aqueous samples.
A simple HPLC method using UV detection was developed and validated for the determination of levodropropizine (LDP) In dog plasma. The sample was prepared for injection using a liquid-liquid extraction method with 1-phenypiperazine as the internal standard. The mobile phase was methanol - diethylamine solution (0.05 M) (20:80, v/v, pH adjusted to 3.0 with $H_3PO_4$) with a detection wavelength of 240 nm. The limit of quantitation (LOQ) of LDP in a biological matrix was determined to be 25.25 ng/mL. The calibration curve was linear across the concentration range of 25.25 to 2020 ng/mL. The intra-day and inter-day precision values (CV%) were within 7% and accuracy (R.E. %) was within 6% of the nominal values for medium (252.5 ng/mL) and high (2020 ng/mL) LDP concentrations. For the LDP concentration at the LOQ, the intra-day and inter-day precision and accuracy were within 20% and 10%, respectively. The average absolute recovery for LDP was 70.28%. This method was successfully used to analyze plasma samples in a steady-state bioavailability study of a newly developed sustained-release LDP tablets (SR) using immediate-release tablets (IR) as the reference. The relative bioavailability of the SR was determined to be $106.3\;{\pm}\;12.8%$ (n=6). The $C_{max}$ of the SR was significantly lower (p<0.05), and the $t_{max}$ was significantly longer than that of the IR (p<0.05). The results of ANOVA and two one-sided tests indicated that the SR exhibited acceptable sustained release properties and was bioequivalent to the IR.
This study aimed to develop and validate highly sensitive determination method of a prostaglandin ($PGE_1$, OP 1206) in human plasma by LC-MS/MS using column switching. Plasma stored at $-30^{\circ}C$ and treated with methanol effectively inhibited interferences synthesized post-sampling. Samples were added with internal standard and were separated by reversed-phase HPLC with a cycle time of 30min. The method was selective for OP 1206 and the regression models, based on internal standard, were linear across the concentration range 0.5-50 pg/mL with the limit of quantification of 0.5 pg/mL (limit of quantitation, LOQ) for OP 1206. The calibration curve of OP 1206 standards spiked in five individual plasma samples was linear ($r^2=0.9999$). Accuracy and precision at the concentrations of 0.5, 1.5, 5.0 and 40 pg/mL, and at the lower LOQ of 0.5 pg/mL were excellent at 20%. OP120 < 6 was stable in plasma samples for at least 24 hours at room temperature, 24 hours frozen at $-70^{\circ}C$, 24 hours in an auto sampler at $6^{\circ}C$, and for two freeze/unfreezing cycles. The validated determination method successfully quantified the concentrations of OP 1206 in plasma samples from simulated administrating a single $5{\mu}g$ OP 1206 formulation. Thus, this novel LC-MS/MS technique for drug separation, detection and quantitation is expected to become the standard highly-sensitive detection method in bioanalysis and to be applied to many low dose pharmaceutical products.
Lysimachia christinae Hance was commonly used in Oriental medicine for treating the hepatitis virus, cholecystitis and cholagogic efficiency. According to the previous study, it possesses high antioxidant and anti-inflammatory activity. Simultaneous determination analytical method of isolated eight compounds, cynaroside (1), 2-(3,4-dimethoxyphenyl) ethyl O-α-L-arabinopyranosyl-(1→2)-O-[6-deoxy-α-L-mannopyranosyl-(1→3)] β-D-glucopyranoside (2), stearylester ricinoleic acid (3), (E)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) but-3-en-1-yl palmitate (4), 2-hydroxy-24-methoxy-4-tetracosenoic acid (5), 2-hydroxy-24-propoxy-4-tetracosenoic acid (6), β-sitosterol (7), and androst-16-ene-3,6-diol (8) were established by using HPLC-DAD. This HPLC analysis was detected on a Dionex C18 column (5 ㎛, 120 Å, 4.6 mm × 150 mm) at 25℃. The mobile phase consisted of 0.1% trifluoroacetic acid and acetonitrile at a flow rate of 1 mL/min. Validation of the method was assessed by linearity, precision and accuracy test. Calibration curve was good at r2 > 0.9998. Limits of detection (LOD) ranged from 0.19 to 8.18 g/ml and Limits of quantification (LOQ) ranged from 0.19 to 24.80 g/ml. The relative standard deviations (RSD) values of precision test, intra- and inter- day, were less than 0.99% and 1.0%. The accuracy test results ranged from 98.81% to 106.49% and RSD values were less than 0.95%. These results showed that the HPLC-DAD method was very reliable and accurate for the quantity analysis of eight compounds in L. christinae extract for quality control.
Aluminium (Al) is one of the major elements in rocks and its concentration can be varied, depending on different rock types as well as sources. The present study aimed to propose an analytical method based on the UV-Vis as a cheap, simple, and common instrument equipped in most laboratories for Al quantification in rocks after the microwave assisted acid digestion. The aluminone and 8-hydroxyquinoline were investigated for the colorimetric assay. The results show that the 8-hydroxyquinoline reagent was more favorable in terms of the minimized affects of the potential interferences present in the digested solutions, i.e., Fe3+, Si4+ and F-. The calibration curve was constructed from 0.10 mg/L to 3.00 mg/L with the goodness of linearity (R2 = 0.9996). The limits of detection and quantification (LOD and LOQ) were estimated, i.e., 0.029 mg/L and 0.087 mg/L, respectively. The 8-hydroxyquinoline was applied to real rock samples, demonstrating favorable precision (RSD = 0.34 %-1.8 %) and no remarkable differences were found compared to the inductively coupled plasma-mass spectrometry (ICP-MS) as a reference measurement approach.
HPLC를 이용하여 조제분유 중 비타민 A 함량을 분석 할 경우 표준품 분취량 및 시료의 샘플 분취량에 따라 달라지는 불확 도 크기를 산정하기 위하여, 분석결과에 영향을 주는 여러 가지 불확도 인자를 파악하고 각각의 불확도를 계산하였다. 계산은 GUM과 Draft EURACHEM CITAC Guide에 근거한 수학적 계산 및 통계처리 방법에 의해 처리하였다. 측정 불확도의 원인으로서 측정량 계산에 사용되는 시료의 무게, 시료의 최종전량, 그리고 기기에 의한 측정결과값 등이 작용하였다. 측정 불확도 원인의 개별구성요소는 저울의 안정성, 분해능, 재현성, 표준액의 순도, 분자량, 농도, 표준액 희석, 검정선, 회수율 그리고 분석기기의 재현성 등이 작용하였으며, 반복측정된 값을 통계적인 방법에 의해 구할 수 있는 불확도는 A type, 그리고 교정성적서, 제조자의 시방서, 공개된 정보 및 상식에서 얻을 수 있는 모든 정보를 이용 하여 구할 수 있는 불확도는 B type으로 구분하여 불확도를 산정하였다. 표준품을 100 mg 계량하여 1,000 mg/L 로 제조하고 다시 적절한 농도로 희석하여 산출한 결과는 627 ${\pm}$ 33 ${\mu}$g R.E./100 g 이었고, 10 mg을 계량하여 100 mg/L 로 제조하여 산출한 경우는 627 ${\pm}$49 ${\mu}$g R.E./100 g 으로 측정 및 계산되었다. 시료량을 약 1 g, 2 g, 또는 5 g으로 차등을 준 결과 및 불확도는 각각 622 ${\pm}$ 48, 627 ${\pm}$ 33, 491 ${\pm}$ 23 ${\mu}$g R.E./100 g 으로 나타났다. 시료량이 커짐에 따라 불확도의 값이 적어지나 시료 5 g의 경우에는 결과값에 이상이 있음을 알 수 있듯이, 정확한 분석을 위해 식품공전에 명시되어 있는 시료량을 취하는 것에 주의해야 할 것이다. 비타민 A 함량 분석의 결과값에 영향을 주는 주요인자로 전처리 과정중의 검화와 액액분배 과정으로 파악되었으며, 이는 시험자의 숙련도에 따라 결과값의 편차가 발생할 수 있는 실험단계이다. 본 연구에서는, 회수율 실험의 결과와 인증표준물질의 표기값에 만족하였으므로, 검화와 액액분배에서 발생될 수 있는 오차를 최소화시킨 결과값을 도출 한 것으로 사료된다. 따라서 정확한 결과값을 도출하기위해 분석자의 숙련도 향상에 충분한 고찰이 필요할 것이다. 또한 도출된 결과값이 갖는 불확실성을 나타내는 측정불확도는 시료의 전처리 및 기기분석을 통하여 결과를 도출하는 과정 중 발생할 수 있는 모든 불확도인자를 산출하여 합성하였다. 본 연구의 결과에 의하면, 비타민 A의 정확한 분석결과를 산출하고 불확도를 최소화하기 위해 표준품은 0.1 g을 계량하여 적절한 농도로 희석 사용해야하며, 시료량은 조제분유의 경우 약 2g 정도 취하여 vitamin A를 검화하고 추출해야함을 알 수 있었다. 즉, 검화 플라스크에서 검화를 할 경우의 시료량은 vitamin A 함량에 따라 그 시료량을 달리하여 분석을 수행하여야 한다. 그리고 USP(retinyl acetate 30 mg/g) 표준품과 같이 농도가 낮은 표준품의 경우에는 최소한 0.1 g 이상을 계량하여 모용액을 제조하여 사용하여야 표준용액 제조 및 검량선에 의한 오차를 최소화할 수 있을 것으로 사료된다. 측정불확도에 대하여 시험자가 시험수행시마다 파악하고 계산하기란 시간적, 인력적 제약과 업무효율적 측면에서 현실적으로 어려운 점이 많으나, 본 연구에서와 같이 시험과정 중의 분석오차 발생인자들을 파악하고 이중 영향이 큰 주요인자들을 집중 관리하여, 그 인자들을 최소화하는 방법을 끊임없이 모색하여야 최종 시험 결과의 오차를 크게 줄일 수 있을 것으로 사료된다.
목 적 : 가와사끼병의 진단 지표로서 NT-proBNP의 유용성을 살펴보고자 하였다. 방 법 : 가와사끼병을 진단 받은 환아 58명에서 발병 10일 이내 급성기에 전기화학발광면역법(Electrochemiluminescence immunoassay)를 이용하여 NT-proBNP를 측정하였고, 그 중 51명에서 회복기(발병 60에서 81일 이내)에 NT-proBNP 값을 측정하여 비교하였다. 가와사끼병과 임상적으로 구별하기 어려운 급성 열성 질환이 있는 환아 34명을 대조군으로 하여 NT-proBNP를 측정하여 가와사끼병 환자군과 비교하였다. 또한 가와사끼병 급성기에 심장 초음파검사를 시행하여 심낭삼출과 관상동맥 병변의 여부를 확인하였고 좌심실 확장기말 내경(LVIDd)과 수축기말 내경(LVIDs), 좌심실 구출율(LVEF)과 좌심실 단축율(LVSF)을 측정하여 NT-proBNP 측정치와의 상관관계를 조사하였다. 가와사끼병과 다른 질환의 감별진단을 위해 receiveroperating characteristic curve를 이용하여 NT-proBNP의 cutoff value를 구하였다. 결 과 : 가와사끼병 급성기 NT-proBNP 측정치는 대조군에 비해 유의하게 높았다($1,501.6{\pm}2,132.6$ vs. $139.0{\pm}88.8pg/mL$, P<0.0001). 51명의 가와사끼병 환자군에서 NT-proBNP 값은 급성기에 증가하고 회복기에 크게 감소하였다($1,466.0{\pm}2,173.2$ vs. $117.5{\pm}95.5pg/mL$, P<0.0001). 가와사끼병의 감별진단을 위한 NT-proBNP의 cutoff value를 260 pg/mL으로 하였을 때 민감도 93%, 특이도 88%를 보였다. NT-proBNP는 심낭삼출이 있는 환아에서 심낭삼출이 없는 환아에 비해 높았다($1,784.2{\pm}1,903.1$ vs. $1,384.4{\pm}2,232.6pg/mL$). 관상동맥 병변이 있는 환아(n=3)가 적어 NT-proBNP와의 관계를 확인할 수 없었다. NT-proBNP 측정치와 LVEF index(r=0.104, P=0.46) 및 LVIDd index(r=0.171, P=0.22)은 상관관계가 없었다. 결 론 : NT-proBNP는 가와사끼병 급성기에 크게 증가하며 회복기에 감소한다. NT-proBNP >260 pg/mL일 때 가와사끼병을 강력히 의심할 수 있으며, NT-proBNP는 가와사끼병을 진단하는 지표로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.
홍삼추출물(RGE)의 쓴 맛을 개선하기 위해서 ${\alpha}-,\;{\beta}-,\;{\gamma}$-CD을 이용해서 RGE의 포접화합물을 제조하여, 관능평가를 통해서 RGE-${\gamma}$-CD에 의한 쓴 맛 개선효과가 가장 큰 것을 확인하였다. RGE와 ${\gamma}$-CD의 비율에 따라서 쓴 맛은 선형적으로 감소하지만, RGE 고유의 향 조차도 감소하기 때문에, RGE 대비 10%의 ${\gamma}$-CD를 첨가하여 포접화합물을 형성할 때 쓴 맛은 RGE 대비 78% 정도 감소하였고, 홍삼의 향은 62% 정도를 유지함으로써 기호도면에서 우수한 결과를 얻었다. SD계 흰쥐에 RGE, RGE-${\gamma}$-CD10의 제제를 총 사포닌의 투여량이 제제간에 동일하도록 투여한 후, 혈장 중 RGE에 들어있는 주요한 성분으로 알려져 있는 ginsenoside Rg1, Rb1을 지표물질로 설정하여 전 농도를 측정하여 두 제제간의 AUC를 비교한 결과, Rg1의 경우, RGE 제제 투여 후의 평균값이 $13.11{\mu}g{\cdot}hr/mL$, RGE-${\gamma}$-CD10 투여 후의 평균값은 $12.04{\mu}g{\cdot}hr/mL$로 유의적인 차이는 없었다. 한편, Rb1의 경우, RGE 제제로서 투여하였을 때의 AUC 평균값이 $25.84{\mu}g{\cdot}hr/mL$, RGE-${\gamma}$-CD10 투여 후의 평균값은 $81.48{\mu}g{\cdot}hr/mL$로 3배 이상 높아짐을 알 수 있었다. 본 연구에 의해 ${\gamma}$-CD로 RGE를 포접했을 경우 쓴 맛이 감소하고, ginsenoside Rb1의 생체이용율이 증가하여 RGE를 그대로 섭취할 경우보다 포접화합물로 섭취 시에 더 유용함을 확인하였다.
목적: 심근의 최대탄성도는 전부하 후부하에 독립적인 지표로서 SPECT를 이용하여 좌심실의 국소탄성도($rE_{max}$)를 비침습적으로 측정하였다. 게이트 심근 SPECT 영상에서 국소부피변화를 얻고, 요골동맥 긴장도를 측정하여 중심동맥의 압력 곡선을 얻어 측정한 최대탄성도를 관상동맥우회로 수술 전후 환자를 대상으로 수술전후 관류 및 기능지표와 비교하여보았다. 대상 및 방법: 관상동맥우회로 수술이 결정되어 시행한 환자 21명(남:여=17:4, $58{\pm}12$세)을 대상으로 $^{201}TI$ 휴식기 영상과 디피리다몰 부하 $^{99m}Tc$-sestamibi 게이트 SPECT를 수술전과 수술 후 3개월째 시행하였다. 동시에 요골동맥으로부터 압력곡선을 얻었다. 기능과의 관계를 보기 위해서 관류와 심벽두꺼워짐을 탄성도와 비교하였으며, 심벽두꺼워짐이 20%미만일 때 수술 후 10%이상 호전되지 않는 기능이상 분절에 대해 수술 전후의 탄성도를 비교하였다. 결과: 수술 전 탄성도가 $2.41{\pm}1.64$ mmHg/mL에서 $2.78{\pm}1.83$ mmHg/mL 으로 수술 후에 증가하였으나, 관류와 심벽두꺼워짐과는 낮은 상관성을 보였다. (r=0.35, p<0.001). 관류 60% 이상의 분절에서는 $2.65{\pm}1.67$ mmHg/mL 이었으나, 관류나 낮은 분절의 탄성도는 $1.30{\pm}1.24$ mmHg/mL 였다. 심벽두꺼워짐이 40% 이상 되는 분절의 수술 전 탄성도는 $3.01{\pm}1.92$ mmHg/mL 였고, 기능이 조금 약한 부분인 40%에서 20% 사이의 심벽두꺼워짐 값을 가진 분절에서는 $2.40{\pm}1.19$ mmHg/mL로 심각한 기능이상을 반영하는 20%미만 분절의 탄성도는 $1.13{\pm}0.89$ mmHg/mL의 분포를 보였다. 수술 전 심벽두꺼워짐이 20% 미만일 때 수술 후 10%이상 회복을 보인 생존심근와 그렇지 않은 비생존심근사이의 수술 전후 탄성도는 $1.27{\pm}1.07$ mmHg/mL에서 $1.79{\pm}1.48$ mmHg/mL, $0.97{\pm}0.59$ mmHg/mL에서 $1.22{\pm}0.71$ mmHg/mL로 생존심근의 수술 후 값의 향상이 조금 더 높았다. 그러나, 심벽두꺼워짐의 정도가 탄성도 높아짐의 정도 사이에는 상관성이 없었다(r=0.007). 결론: 수술 전 $rE_{max}$는 관류와 심벽두꺼워짐과 상관성이 약하게 있었다. 기능이상이면서 생존능이 있는 심근의 탄성도는 수술 후 증가하였지만 심벽두꺼워짐의 향상과는 상관성이 없었다. 심근기능의 전부하 후부하에 독립적인 지표인 탄성도는 실제 부피의 증가와 연관되지 않으면서도 생존능이 있는 심근의 기준과 일치하는 양상을 보였으므로 독립적인 매개변수로 사용될 수 있을 것으로 기대한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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