• Applied Biological Chemistry
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• 제30권2호
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• pp.169-178
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• 1987

Kluyveromyces marxianus로 부터 inulase를 생산하고 정제하며 intra 및 extracellular inulase의 성질을 조사하였다. 본 균주는 stationary phase인 24시간째 intra 및 extracelullar enzyme의 생산이 최고에 달했으며 유기 질소원으로 YNB를 사용하고 배양 중 pH를 조절해 줌으로써 효소 생산을 향상시킬 수 있었다. 조효소는 DEAE-cellulose에 의해 intra 및 extracellular inulase 모두 2개의 fraction으로 분리되었고 각 fraction의 전기영동 양상은 비슷하여 주 band를 비롯 모두 3개의 glycoprotein band가 관찰되었으며 이중 주 band만 inulase 및 invertase activity를 보유하고 있었다. 정제 효소의 inulase 및 invertase의 최적 pH는 각각 5.0과 4.5였고 intra가 extracellular enzyme 에 비해 다소 넓은 범위의 pH에서 높은 활성을 나타내었다. 모든 fraction의 최적 온도는 inulase가 $40^{\circ}C$, invertase가 $50^{\circ}C$였으며 intracellular enzyme이 더 넓은 범위의 온도에서 안정하였고 열에 대한 안정성도 intracellular inulase가 extracellular inulase보다 높게 나타났다. Km value는 intra가 $16{\sim}19mM$, extracellular inulase가 $9{\sim}11mM$로써 extracellular inulase가 inulin에 대한 친화력이 더 높았으나 모두 exo-type의 inulase로 판명되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제27권6호
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• pp.471-476
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• 1999

Inulin fructotransferase(depolymerizing)(EC 2.4.1.93)(inulaseII) which converts inulin into di-D-fructofuranose-1,2':2,3'-dianhydride (DFAIII) was purified from Arthrobacter ureafaciens KCTC 3387 using column chromatography on DEAE-Toyopearl 650M and gel filtration of Sephadex G-200. The enzyme was purified 7-fold with a yield of 11% from a culture supernatant. The purified enzyme gave a single band on polyacrylamide gel electrophoresis, and the molecular weight of the enzyme was estimated to be 45,000 by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum pH and temperature for the enzyme reaction were pH6.5~7.0 and $55{\circ}C$, respectively. The enzyme was stable within a pH range of 5.0 to 10.6 and up to $60^{\circ}C$. The Km of this enzyme for DFAIII production was 11.9mM. The enzyme was inactivated by $Hg^{2+}$ and after exhaustive digestion of inulin by this enzyme, 1-kestose and nystose were produced in addition of DFAIII.

• 한국식품과학회지
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• 제13권1호
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• pp.67-73
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• 1981

Streptomyces chibaensis로부터 분비하는 이눌라아제를 일연(一連)의 에탄올 침전, DEAE-cellulose 칼럽크라마토그래피 및 Sephadex-200 gel frltration 방법에 의(依)해서 120배 분리정체하였고 정제된 효소의 최적 pH는 6.5이고 pH $5.0{\sim}9.0$ 범위내에서는 비교적 안정성을 보였다. 효소는 $Mn^{++},\;Mg^{++}$ 및 $Ca^{++}$의 존재하에서는 약간 활성화되었고, $Hg^{++}\;Ag^{++}$의 존재하에서는 강한 비활성화를 보였다. 정제된 효소는 endo 형(型)으로 Km 값은 $4.54{\times}10^{-4}M$이었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제17권3호
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• pp.205-210
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• 1988

돼지감자로부터 inulase를 분리한 다음 황산 암모늄침전, Sephadex G-100 겔 투과 및 DEAE-cellulose 크로마토그래피를 통하여 정제하여 최종적으로 회수율 42%의 6,470배 정제된 효소를 얻었다. 이 효소의 분자량은 57,000으로서 하나의 폴리펩티드로 구성되어 있었다. 이 효소의 최적 pH와 최적온도는pH5.0과 $33^{\circ}C$이었으며 몇 가지의 기질중 inulin에 대해서만 특이적으로 작용하였고 이에 대한 Km값은 20mM, Vmax는 943unit/mg-단백질이었다. 또한 이 효소는 metalloenzyme이 아니며 $Mg^{2+},Ca^{2+},\;Hg^{2+}$등의 금속 이온에 의해 그 작용이 완전히 저해되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제11권1호
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• pp.47-52
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• 1983

Aspergillus sp.C-58 균주가 생산하는 extracellular inulase에 대하여 pH, charcoal처리 및 ammonium sulfate로 분별염석한 후 DEAE- cellulose를 이용한 column chromatography에 의하여 3개의 효소단백질(Peak I, II, III)로 분획되었으며 그 비율은 31. 1 : 1.7 : 1이였다. P- I, II의 I/S는 그 비율이 0.23 및 0.24로 거의 동일하였으나 P-III는 1.1로 P-I및 P-II와 상이하였다. Peak I 효소에 대하여 DEAE-Sephadex A-50을 이용한 ion exchange chromatography에 의하여 추출효소에 비교하여 약 408배 정제되었으며 다시 Sephadex G-75 및 Sephadex G-100에 2회 gel filtration하여 약 482배 정제되었다. 이상과 같이 정제한 Peak I의 효소액은 poly acrylamide를 이용한 disc gel electrophoresis 및 ultra centrifugation에 의하여 단일 단백질로 확인되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권5호
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• pp.484-489
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• 1990

Bacillus subtilis의 세포내 이눌라아제가 부분정제되고 그의 작용 모드와 일반적 특성이 조사되었다. 이 효소는 gel filtration에 의하여 분자량을 추정하였을 때 49,000이었고, 등진점은 5.2 이었다. 기질에 대한 친화성의 지표인 Km값은 설탕에 대해서는 10mM, 라피노오스에 대해서는 18mM 이었다. 이 효소는 산성쪽에서는 불안정한 단백질로서 pH6.6에서 최대 활성을 보였으며 최적온도는 10분간 반응시켰을 때 50'C였다. 이 효소의 작용모든는 이눌린같은 구조를 가지는 과당 중합체를 과당 끝부분으로부터 하나씩 잘라가는 exo-cleavage 형이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권5호
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• pp.551-558
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• 1992

Streptomyces sp. S56으로부터 endoinulase를 생산하고 정제하여 물화학적으로 성질을 조사하였다. 조효소는 DEAE-cellulose column chromatography 및 Sephadex G-200 gel filtration에 의하여 정제하였으며, 정제된 효소는 polyacrylamide gel 전기영동결과 단일 band로 나타나서 전기영동상 순수하게 분리되었다. 정제효소의 최적 pH는 5.5-6.0, 최적온도는 $50^{\circ}C$였으며, 최적 온도에서의 열안정성은 1시간 처리후 42%의 잔류활성을 보였다. 정제효소는 금속이온 중 $Mn^{2+}$에 의해서는 활성이 증가되었으나, $Ag^{+}$, $Hg^{+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Fe^{3+}$, $Mo^{6+}$ 에 의해서는 활성이 50% 이상 감소하였다. EH한 EDTA, 8-hydroxyquinoline에 의하여 활성이 저해되는 것으로 보아 metalloenzyme인 것으로 추정되었다. 본 효소는 inulin 내부의 $\beta$-2,1 결합을 가수분해하여 fructose oligomer를 생산하는 inulase 활성만을 가지고 있었으며 invertase 및 $\alpha$-glucosidase 활성은 나타내지 않았다. Inulin에 대한 Km값은 0.287mM, $V_{max}$ $0.109{\mu}mol/min$이었다. 효소의 촉매작용에 관하여는 amino acid residue는 tryptophan로 추정되었으며 그 외에 arginine, tyrosine, lysine, methionine, histidine, cysteine 및 cystine의 chemical modification 실험결과 효소활성저해가 나타나지 않아 이들 amino acid residue는 효소작용에 직접적으로 관여하지 않는 것으로 추정되며 carboxyl기도 효소활성에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.