An extracellular matrix protein, transforming growth factor-beta-induced protein (TGFBIp/βig-h3), which is induced by transforming growth factor-β in the human cornea, skin, and matrix of many connective tissues, is associated with the adhesion, migration, proliferation, and differentiation of various cells. TGFBIp contains four homologous repeat domains, known as FAS1 domains, where certain mutations have been considered to cause corneal dystrophies. In this study, backbone NMR assignments of FAS1-3/FAS1-4 tandem domain were obtained and compared with those previously known for the isolated FAS1-4 domain. The results corroborate in solution the inter-domain interaction between FAS1-3 and FAS1-4 in TGFBIp.
The chromophore/protein interactions in the photocycle intermediates of photoactive yel- low protein (PYP) were probed by site-directed mutagenesis. The absorption spectra of L- intermediates produced from E46Q, T50V, and R52Q mutants were calculated using the absorption spectra of dark states and difference absorption spectra between L-intermediates and dark states, and compared with that of PYP$\_$L/. The absorption spectrum of R52Q$\_$L/ agreed with that of PYP$\_$L/, but those of E46Q$\_$L/ and T50V$\_$L/ were red-shifted. The effect of these mutations on the absorption spectrum for L-intermediate was comparable to that for the dark state, suggesting that the interaction around the phe-nolic oxygen of the chromophore is conserved in PYP$\_$L/ unlike the crystal structure. On the other hand, we have reported that the absorption spectra of Y 42F$\_$M/, T50V $\_$M/, and R52Q$\_$M/ agreed with that of PYP$\_$M/, but that of E46Q$\_$M/ was red-shifted, suggesting that the hydrogen bond of the chromophore with Glu46 is conserved but that with Tyr42 is broken in PYP$\_$M/. These results suggest that the chromophore inter-acts with Glu46 throughout the photocycle, but never directly interacts with Arg52. This model con- flicts with some of the structural model of PYP intermediates proposed based on the high-resolution X -ray crystallography.
This work is focused on analyzing ion-pair interactions and showing the effect of solvent induced inter-atomic attractions in various dielectric environments. To estimate the stability of ion-pairs, SCI-PCM ab initio MO calculations were carried out. We show that the solvent-induced attraction or ‘cavitation' energy of the ion-pair interactions in solution that arises mainly from the stabilization of the water molecules by the generation of an electrostatic field. In fact, even the strong electrostatic interaction characteristic of ion-pair interactions in the gas phase cannot overcome the destabilization or reorganization of the water molecules around solute cavities that arise from cancellation of the electrostatic field. The solvent environment, possibly supplemented by some specific solvent molecules, may help place the solute molecule in a cavity whose surroundings are characterized by an infinite polarizable dielectric medium. This behavior suggests that hydrophobic residues at a protein surface could easily contact the side chains of other nearby residues through the solvent environment, instead of by direct intra-molecular interactions.
Lim, Dong Yu;Lee, Tae Yeon;Lee, Jaehyeok;Song, Im-Sook;Han, Young Taek;Choi, Min-Koo
분석과학
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제34권5호
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pp.193-201
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2021
We have demonstrated a sensitive analytical method of measuring oleracone D in mouse plasma using a liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Oleracone D and oleracone F (internal standard) in mouse plasma samples were processed using a liquid-liquid extraction method with methyl tertbutyl ether, resulting in high and reproducible extraction recovery (80.19-82.49 %). No interfering peaks around the peak elution time of oleracone D and oleracone F were observed. The standard calibration curves for oleracone D ranged from 0.5 to 100 ng/mL and were linear with r2 of 0.992. The inter- and intra-day accuracy and precision and the stability fell within the acceptance criteria. The pharmacokinetics of oleracone D following intravenous and oral administration of oleracone D at doses of 5 mg/kg and 30 mg/kg, respectively, were investigated. When oleracone D was intravenously injected, it had first-order elimination kinetics with high clearance and volume of distribution values. The absolute oral bioavailability of this compound was calculated as 0.95 %, with multi-exponential kinetics. The low aqueous solubility and a high oral dose of oleracone D may explain the different elimination kinetics of oleracone D between intravenous and oral administration. Collectively, this newly developed sensitive LC-MS/MS method of oleracone D could be successfully utilized for investigating the pharmacokinetic properties of this compound and could be used in future studies for the lead optimization and biopharmaceutic investigation of oleracone D.
한국작물학회 2017년도 9th Asian Crop Science Association conference
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pp.36-36
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2017
Out of twenty common protein amino acids, there are many kinds of non protein amino acids (NPAAs) that exist as secondary metabolites and exert ecological functions in plants. Mimosine (Mim), one of those NPAAs derived from L. leucocephala acts as an iron chelator and reversely block mammalian cell cycle at G1/S phases. Cysteine (Cys) is decisive for protein and glutathione that acts as an indispensable sulfur grantor for methionine and many other sulfur-containing secondary products. Cys biosynthesis includes consecutive two steps using two enzymes-serine acetyl transferase (SAT) and O-acetylserine (thiol)lyase (OASTL) and appeared in plant cytosol, chloroplast, and mitochondria. In the first step, the acetylation of the ${\beta}$-hydroxyl of L-serine by acetyl-CoA in the existence of SAT and finally, OASTL triggers ${\alpha}$, ${\beta}$-elimination of acetate from OAS and bind $H_2S$ to catalyze the synthesis of Cys. Mimosine synthase, one of the isozymes of the OASTLs, is able to synthesize Mim with 3-hydroxy-4-pyridone (3H4P) instead of $H_2S$ for Cys in the last step. Thus, the aim of this study was to clone and characterize the cytosolic (Cy) OASTL gene from L. leucocephala, express the recombinant OASTL in Escherichia coli, purify it, do enzyme kinetic analysis, perform docking dynamics simulation analysis between the receptor and the ligands and compare its performance between Cys and Mim synthesis. Cy-OASTL was obtained through both directional degenerate primers corresponding to conserved amino acid region among plant Cys synthase family and the purified protein was 34.3KDa. After cleaving the GST-tag, Cy-OASTL was observed to form mimosine with 3H4P and OAS. The optimum Cys and Mim reaction pH and temperature were 7.5 and $40^{\circ}C$, and 8.0 and $35^{\circ}C$ respectively. Michaelis constant (Km) values of OAS from Cys were higher than the OAS from Mim. Inter fragment interaction energy (IFIE) of substrate OAS-Cy-OASTL complex model showed that Lys, Thr81, Thr77 and Gln150 demonstrated higher attraction force for Cys but 3H4P-mimosine synthase-OAS intermediate complex showed that Gly230, Tyr227, Ala231, Gly228 and Gly232 might provide higher attraction energy for the Mim. It may be concluded that Cy-OASTL demonstrates a dual role in biosynthesis both Cys and Mim and extending the knowledge on the biochemical regulatory mechanism of mimosine and cysteine.
누에의 소화액 proteinase 및 중장조직 Sucrase의 활성에 미치는 영양 및 환경의 영향을 알기 위하여, 사료조성중에 당의 함량이 많은 A사료(따라서 단백질의 함량은 적음), 당과백질과의 량비가 약 1 : 2로 적당하다고 생각되는 B사료, 단백질의 함량이 많은 C사료(따라서 당의 함량이 적음)의 3종의 준합성사료를 사용하여 유충을 사육하고, 4면기를 16$^{\circ}C$, $25^{\circ}C$, 32$^{\circ}C$로 각각 보호한 5령 5일째 유충의 소화액 proteinase 및 중장조직 Sucrase의 활성을 조사하였던바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 유충의 혈당량은 4 면기보호온도와 상관하지 않고 A사료> B사료> C사료의 순으로 많었으나 소화액 proteinase 및 중장조직 Sucrase의 활성은 C사료> B사료 >A사료의 순으로 강하였다. 2. 유충의 소화액 proteinase 활성은 A,B,C의 각 사료에 있어서 대개 같은 경향으로, 32$^{\circ}C$ 보다 16$^{\circ}C$에 있어서 강하였으나 혈당량의 변화와는 상반되는 경향이 없다. 3. 유충의 소화액 Sucrase 활성은 A,B,C의 각 사료에 있어서 같은 경향으로, 32$^{\circ}C$> $25^{\circ}C$ >16$^{\circ}C$의 순으로 강하였으며 또한 혈당량의 변화와 같은 경향이었다. 4. 유충의 소화액 proteinase 활성은 사료조성과 4 면기보호온도와의 교호작용이 웅에서만 인정되었으나 중장조직 Sucrase 활성은 교호작용이 자웅 다같이 인정되었다.
본 연구는 12주간 탄력밴드 운동이 체조성, 혈중지질 및 AMPK에 미치는 영향을 구명하기 위해 만 65세 이상 75세 이하의 여성 노인을 대상으로 운동군 12명, 대조군 12명으로 구분하여 실시하였다. 탄력밴드 운동 방법은 주 3회, 60분으로 1-4주는 OMNI-RES 3-4의 저강도, 5-8주는 OMNI-RES 5-6의 중강도, 9-12주는 OMNI-RES 7-8의 고강도로 실시하였다. 탄력밴드 운동 전 후 그룹 및 시기 간 상호작용을 검증하기 위하여 two way repeated measures ANOVA로 처리하였고, 측정된 자료의 그룹 내 차이는 paired t-test, 그룹 간 차이는 independent t-test, 집단 간 오차를 최소화하기 위해 공변량 분석 analysis of covariance ANCOVA를 실시하였으며, 각 항목별 통계적 유의수준은 .05로 설정하였다. 그 결과, 체지방률은 운동군이 유의하게 감소하였으며(p<.05), 골격근량이 유의하게 증가하였다(p<.01). 혈중지질 중 TC, TG, LDL-C는 운동군과 대조군 모두 유의한 차이가 나타나지 않았으며, HDL-C는 대조군이 유의하게 감소하였다(p<.05). AMPK는 운동군이 유의하게 감소하였고(p<.001), 대조군은 유의한 차이가 나타나지 않았으나, 공변량분석 결과에 의하면 운동 후 그룹 간 AMPK는 유의한 차이가 나타났다(p<.05). 이상의 결과를 종합해 볼 때 OMNI 저항운동 척도를 이용한 12주간 탄력밴드 운동이 여성노인의 체조성 및 AMPK에 긍정적인 영향을 미친 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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