• Journal of Life Science
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• 제10권1호
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• pp.40-44
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• 2000

The SNF2/SW ATPase/helicase family comprises proteins form a variety of species with in vivo functions, such as transcriptional regulation, maintenance of chromosome stability during mitosis, and various types of DNA repair. Here, we reported the characterization of h게2+gene which was iolated by PCR amplification using the conserved domain of SNF2 motifs. Sequence analysis of PCR product showed striking evolutionary conservation among the SNF2 family of proteins. Two transcripts of 6.7 and 3.4 Lb were detected by Northern blot analysis. furthermore, the intensities of these two bands were increased by ultraviolet(UV) irradiation. These results indicate that the hrp2+ is a novel member of the SNF2 family of proteins and is one of the UV-inducible genes in S. pombe. To determine the level of transcripts of hrp2+ gene during cellular growth, Northern blot analysis were performed. This result indicates that the level of hrp2+transcript reached its maximum before cells entered the exponential growth phase. This suggests that hrp2+ gene is experssed mainly at the early stage of cell growth.

• 한국수정란이식학회지
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• 제10권3호
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• pp.209-217
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• 1995

The present study was carried out to develop a cloning technology of mouse embryos by nuclear transplantation with electrofusion and to produce cloned offsprings by transfer of reconstituted embryos. A single nucleus from two- and eight-cell embryos was transplanted into the enucleated two-cell embryos by rnicromanipulation. The fusion of nucleus with recipient cytoplasm and the subsequent development of reconstituted embryos in vitro as well as in vivo to term were examined to determine the optimal electrofusion parameters for nuclear transplantation in mouse embryos. The successful enucleation of donor embryos was 84.9 and 83.3% in two- and eight-cell stage, respectively, and the successful injection of nucleus from two- and eight-cell donor embryos into the perivitelline space of enucleated two-cell embryos were 85.1 and 84.7%, respectively. No significant differences were found in enucleation or injection rate between the cell stages of donor embryos. When the blastomeres of intact two-cell mouse embryos were electrofused in 0.3 M mannitol medium(100 $\mu$sec., 3 pulses), the fusion rate was similarly 93.2, 92.2 and 92.0% in 1.0, 1.5 and 2.0 kV /crn, respectively, but in vitro development to blastocyst of the fused two-cell embryos was significantly(P<0.05) lower in 2.0 kV/cm (63.4%) than in 1.0 kV/cm (91.7%) or 1.5 kV/cm (82.4%). The development in vitro to eight-cell stage of the reconstituted embryos with nucleus from two-cell stage(45.5%) was significantly(P<0.05) higher than that from eight-cell stage blastomeres (16.7%). The number of blastomeres of the intact embryos at blastocyst stage was 50i0.6 and 55$\pm$2.4 in in vitro and in vivo cultured mouse embryos, respectively, but significantly(P<0.05) decreased to 35$\pm$0.7 in nuclear transplanted blastocyst embryos. The conception rate of mice following embryo transfer was 32.1% in the reconstituted two-cell embryos using two-cell donor nuclei, which was comparable to the fresh two-cell embryos(40.6%). However, the rate of development in vivo to term following embryo transfer of the reconstituted two-cell embryos using two-cell donor nuclei (23.5%) was significantly(P<0.05) lower compared with the percentage of two-cell fresh embryos(31.5%).

• Applied Biological Chemistry
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• 제42권4호
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• pp.293-297
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• 1999

Escherichia coli의 중요한 sugar 흡수 system인 Phosphoenolpyruvate. carbohydrate phosphotransferase system(PTS)의 주요 구성 enzyme을 만드는 pts operon에는 여러 개의 promoter가 존재하여 어느 환경에서도 적절한 정도의 PTS 활성을 유지하도록 한다. E. coli pts operon의 P1 promoter transcription이 in vitro와 in vivo에서 차이가 나는 원인을 밝히기 위하여 pts promoter activity에 영향을 줄 수도 있는 pts P0 Promoter의 1kbp upstream에서부터 P0와 P1 promoter까지 transcription vector에 cloning하여 in vitro transcription assay를 한 결과, pts promoter의 upstream DNA가 pts P1 promoter의 in vitro transcription에 미치는 영향이 없음을 알 수 있었다. 여러 가지 PTS sugar들을 이용하여 in vivo에서 이들 sugar 들이 pts transcription에 미치는 영향을 cAMP농도 변화와 비교 조사한 바, glucose존재 하에 자랄 때보다 CAMP농도가 높은 mannose나 mannitol 존재 하에 bacteria가 자랄 때 P1b transcription은 증가하나 P0 transcription은 glucose존재 하에 자랄 때 더 높은 결과를 보였다. 이 결과는 P0에 glucose에 의해 induction되는 repressor가 존재하고, P1 에는 glucose. mannose, mannitol에 의해 공통적으로 induction되는 제 2의 repressor가 존재할 것이라는 가능성을 보여주는 것이다.

• 한국가금학회지
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• 제48권3호
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• pp.111-122
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• 2021

최근에 IL-34가 MCSFR에 대한 두 번째 기능적 리간드로 확인되었으며, M-CSFR에 대한 결합을 통해 IL-34는 M-CSF와 유사한 기능을 공유한다. 지금까지 닭의 IL-34에 대한 실험적 연구가 아닌 예측된 서열로만 보고되었으며, 닭의 IL-34 기능에 대한 정보는 아직 부족하다. 닭 IL-34의 잠재적 생물학적 기능을 구명하기 위하여, 다양한 품종의 닭, 세포주에 대한 괴사성 장염, 살모넬라 및 E. coli 유래의 LPS 등을 처리하여 관찰하였다. 또한 닭의 IL-34와 M-CSF 재조합 단백질 생산 및 이를 이용한 전염증성 사이토카인 유도를 위하여 클로닝 및 재조합 단백질을 발현 및 정제하였다. 특히 관절이상 육계(unknown cause)에 대한 IL-34, M-CSF, 그리고 M-CSFR 유전자의 발현이 대조구보다 유의하게 증가하였으나, 병원균 자극 조직의 경우 많은 조직에서 감소함을 보였다. M-CSFR의 발현은 in vitro에서 IL-34와 M-CSF 재조합 단백질에 의해 증가함을 보였으며, IFN-γ은 재조합 단백질 M-CSF을 제외한 IL-34에 의해 증가하였다. 하지만, IL-12 발현은 유의적인 차이가 없었으며, IL-1β의 경우는 감소하였다. 이 결과는 IL-34와 M-CSF가 고전적인 대식세포와 대체 대식세포 모두에서 역할을 한다고 할 수 있다. 결론적으로, in vitro와 in vivo 실험을 통하여 병원균 처리 시 닭의 IL-34 발현을 관찰하였으며, IL-34 재조합 단백질이 대식세포에서와 전염증성과 항염증성 반응에 중요한 역할을 함을 증명하였다. 추후에 IL-34의 사이토카인, 케모카인 그리고 염증반응 경로 등에 대한 추가 연구가 필요하다고 판단된다.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2001년도 춘계학술발표대회
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• pp.62-62
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• 2001

Recently, production of transgenic animal by nuclear transfer has been known as a useful method. The production of cloned offspring derived from nuclear transfer depends upon a variety of factors such as species, donor cells type and cell cycle, and source of recipient ova. Therefore, we attempted a different transgenic methods using follicular granulosa cells (GCs). In general, ovulated GCs undergoes lutenization and transformation in vitro which might defective effects on developmental potential. In order to avoid the GCs transformation in vitro culture system, we introduced a direct injection of retrovirus into the follicles and then collected them mechanically from ovaries of 6-8 week-old ICR mice. Retrovirus vector constructed with pLN $\beta$ EGFP was injected into the follicles. The follicles are cultured in $\alpha$ -MEM supplemented with human FSH, LH and ITS in Costar Transwell dish for 4 days. Survival rate of virus injected follicles was 52.1% (12/23) and expression rate of EGPP gene was 33.3% (4/12). In this study, we found GCs performed transgenesis in our culture system. In addition, the GCs in follicle may be developed in vivo like environment rather than in vitro environment. Thus, the use of GCs as donor cells may be useful in the nuclear transfer for cloning of genetic modification. Therefore, these results suggest that follicular GCs can be transfected by viral vector during folliculogenesis in vitro.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제16권7호
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• pp.1071-1086
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• 2003

Reproductive biotechnologies continue to be developed for genetic improvement of both river and swamp buffalo. Although artificial insemination using frozen semen emerged some decades back, there are still considerable limitations. The major problem appears to be the lack of efficient methods for estrus detection and timely insemination. Controlled breeding experiments in the buffalo had been limited and similar to those applied in cattle. Studies on multiple ovulation and embryo transfer are essentially a replica of those in cattle, however with inherent problems such as lower number of primordial follicles on the buffalo ovary, poor fertility and seasonality of reproduction, lower population of antral follicles at all stages of the estrous cycle, poor endocrine status and a high incidence of deep atresia in ovarian follicles, the response in terms of transferable embryo recovery has remained low with 0.51 to 3.0 per donor and pregnancy rates between 15 to 30%. In vitro production of buffalo embryos is a valid alternative to recovery of embryos by superovulation. This aspect received considerable attention during the past decade, however the proportion of embryos that develops to the blastocyst stage is still around 25-30% and hence the in vitro culture procedures need substantial improvement. Embryo cryopreservation procedures for direct transfer post thaw need to be developed for bubaline embryos. Nuclear transfer and embryo cloning is a technique that has received attention in various species during recent years and can be of immense value in buffaloes as they have a low rate of embryo recoveries by both in vitro and in vivo procedures. Gender pre-selection, genome analysis, gene mapping and gene transfer are a few of the techniques that have been studied to a limited extent during recent years and are likely to be included in future studies on buffaloes. Very recently, reproductive biotechnologies have been applied to feral buffaloes as well, but the results obtained so far are modest. When fully exploited they can play an important role in the preservation of endangered species.

• 대한수의학회지
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• 제30권4호
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• pp.355-360
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• 1990

포유동물의 초기 발생단계에서 핵의 분화와 전능성(totipotency) 을 규명하고, 수정란의 cloning technique를 개발하여 우량유전자로 조성된 개체를 복제함으로써 효과적인 종축개량 기법으로 응용하기 위하여 생쥐 수정란을 모델로 하여 미세조작기법과 Sendai virus를 이용한 핵융합기술을 이용하여 인위적으로 동일한 유전자를 가진 복제 수정란을 작출하고 이들의 작출효과, 체외발달능력 및 체내 이식후 개체발생여부 등을 조사하였다. 2-세포기, 4-세포기 및 8-세포기의 수정란으로부터 핵을 채취하여 이들을 탈핵된 2-세포기의 수정란에 이식하였을 때, 이들의 핵융합 성공율은 각각 88.6%, 87.1% 및 84.7%이었다. 나아가서 이들 핵융합된 수정란을 체외에서 96시간 배양한 결과, 2-세포기, 4-세포기 및 8-세포기의 핵이 이식된 수정란은 각각 76.5%, 68.4% 및 48.3%가 배반포로 발달하였다. 핵이식 후 체외에서 배반포로 발달된 수정란을 골라 수란생쥐에 이식하였던 바, 2-세포기의 핵이 이식된 수정란 156개 중 58개(37.1%) 가 발달하여 신생자로 생산되었으며, 4-세포기의 핵아 이식된 수정란 135개 중 40개(29.6%)가, 그리고 8-세포기의 핵이 이식된 92개의 수정란 중 15개(16.3%)가 신생자로 생산되었다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제33권4호
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• pp.195-202
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• 2009

Abnormal development and fetal loss during the post-implantation period are key concerns in the production of cloned animals by somatic cell nuclear transfer (SCNT). We hypothesized that the problems in cloned porcine offspring derived from SCNT are related to interactions between the conceptus and the endometrial environment. In the present study, we investigated expression patterns in the formation of placenta-related genes (Cdx2 and GATA6) in whole in vivo normal porcine embryos (from single cell to blastocyst) and each tissue of a normal fetus at Days 25, 35 and 55 by quantitative mRNA expression analysis using real-time PCR. The expression of Cdx2 and GATA6 mRNA increased to around the blastocyst stage. These genes were gradually decreased from the peri-implantation to post-implantation stage. Moreover, we examined the expression patterns of Cdx2 and GATA6 in Day 35 normal and SCNT cloned fetuses by the same methods. And, the level of Cdx2 and GATA6 gene expression in the extraembryonic tissue of SCNT was significantly higher than that of control tissues. From the present results, it can be postulated that the aberrant expression of Cdx2 and GATA6 genes in the endometrial and extraembryonic tissues at pre- and peri-implantation stages may be closely related to the lower efficiency of animal cloning.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제35권1호
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• pp.36-40
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• 2007

Redox signaling은 단백질을 산화환원 시키는 세포의 중요 신호가 전달되어, 그 단백질의 기능이 변화함으로써 세포의 성장 및 사멸을 조절하게 되는 과정이다. 단백질 합성 구성원의 산화, 환원 과정에 의한 단백질 합성 조절을 알아보기 위해 환원제인 DTT 존재 하에 단백질 합성 활성을 관찰한 결과 DTT가 존재하지 않는 것에 비해 단백질합성이 1.4배 정도 증가됨이 관찰되어 redox potential을 보이는 것으로 보아 환원제가 단백질 합성을 좀 더 증진시키는 것으로 사료된다. DTT에 의한 이러한 현상은 산화환원 조절 단백질인 thioredoxin를 첨가한다면 thiol기에 환원력이 전달되어 단백질합성이 더욱 촉진되기 때문에 효모에서 thioredoxin유전자를 cloning하고 이로부터 효모에서 GST-thioredoxin을 분리하였다. DTT 존재 하에 산화환원 조절 단백질인 thioredoxin을 농도별로 첨가하였을 때의 단백질 합성이 어떻게 조절되는지 알아보았다. 반응 액에 DTT를 넣은 것과 넣지 않은 것을 사용하여 thioredoxin을 0ng, 18ng, 90ng, 460ng, 2,300 ng의 농도로 각각 넣어서 반응시켜 보았다. 이렇게 반응시킨 반응물에서 만들어진 단백질 활성을 측정하였는데 thioredoxin의 농도가 높아질수록 그 활성이 높게 나타났으며, thioredoxin을 넣은 것이 넣지 않은 것에 비해 활성이 약 4배 이상 높게 나왔다 이 결과는 산화환원 조절 단백질인 thioredoxin이 환원력을 단백질합성구성원에 효율적으로 전달하는데 관여함을 보여주는 것이며, 산화환원이 단백질 합성 시 중요한 신호전달 과정임을 암시한다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제4권1호
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• pp.125-131
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• 2000

Differential display-PCR 방법을 이용하여, hCG 처리에 의한 참돔, Pagrus major의 난성숙 능력의 획득 경과시간에 따라 새롭게 발현하는 cDNA를 해석하였다. Differential display-PCR과 5'RACE 방법을 이용하여, 2,662 염기와 434개의 아미노산을 코드하고 있는 cDNA의 전염기배열을 결정하였다. DNA의 데 이터베이스인 GenBank 및 EMBL을 이용하여 상동성을 검색한 결과, 본 cDNA와 높은 상동성을 나타낸 유전자는 검색되지 않았다. 따라서 본 cDNA는 참돔의 난성숙 능력 유도와 함께 그 발현량이 증가하는 난성숙 관련 유전자로 판단되었다. 또한 본 cDNA에서는 protein kinase C 인산화 및 casein kinaseII 인산화 consensus 배열의 존재가 확인되었다. 본 연구에서 cloning된 난성숙 관련 유전자는 난여포에 hCG 처리 9～24시간 후에 그 발현량이 증가하였으며, GH-II (300 ng/ml)로 배양한 난여포에서 특이적으로 증가하였다. 또한 in vivo 실험에서 난성숙 관련 유전자는 난성숙 능력 획득 이전의 난소에서는 거의 발현하지 않았으나, 난성숙 능력을 획득한 난소에서 강하게 발현된 점으로 보아, hCG에 의한 난성숙 능력 유도에 성숙기간 중 새롭게 합성되는 난성숙 관련 유전자가 관여할 가능성이 높다.